一株产广谱细菌素乳酸菌Ｓ３菌株的菌种鉴定

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　　文章编号：1009-5519（2007）19-2989-02 中图分类号：R18 文献标识码：B
　　
　　乳酸菌广泛分布于自然界，细菌素是由某些细菌通过核糖体合成机制产生的一类具有抑菌生物活性的蛋白质，抑菌范围不仅仅局限于同源的细菌，产生菌对其细菌素有自身免疫性。当革兰阳性菌产生的羊毛硫抗生素乳链菌肽（nisin）被科研人员发现并被认为可作为天然防腐剂以替代化学防腐剂应用在食品保藏等方面时，各国的科研工作者都将注意力转向了革兰阳性菌产生的细菌素，对其进行了大量的基础研究和应用研究，其中，乳酸菌细菌素成为研究热点。
　　我们从多种发酵食品中分离得到92株乳酸细菌。通过平板挖井扩散法，从92株乳酸菌中筛选出5株代谢产物有较强抑菌活性的乳酸菌，其中S3、S2、L29菌株的代谢产物具有广谱抑菌活性。显微镜观察发现：S3 菌株细胞球状。本论文对筛选出的产广谱细菌素菌株S3共进行63项性状检测，均以24小时的MRS斜面或MRS营养肉汤培养物作为种子，全部实验至少平行2份。遇到不确定结果时，进行重复实验。现将实验结果报道如下。
　　
　　1 实验方法及步骤
　　
　　1.1 菌体形态和菌落特征：在MRS琼脂平板上划线，30℃培养48小时观察菌落形态，并进行革兰氏染色。
　　1.2 菌苔、菌液及穿刺特征：以MRS斜面为基础培养基，接种菌种，适温培养，2~3天观察洋菜斜面菌苔特征、培养液内特征、洋菜穿刺特征。
　　1.3 生理生化实验：生理生化方面做了以下实验：糖醇产酸、对葡萄糖及葡萄糖酸盐的利用、耐受实验、硝酸盐还原、氧化酶、接触酶、V－P反应、硫化氢的产生、乳酸层析（检查发酵液中生成的酸是否为乳酸）、葡聚糖的产生、细胞培养和收集、DNA的提取、Tm值的测定及G＋Cmol％的计算等。
　　
　　2 结果与讨论
　　
　　2.1 S3菌株的菌体形态和菌落特征：S3菌株在琼脂平板上培养24小时，圆形菌落中央为白色，边缘颜色略浅，表面平，湿润，边缘整齐。
　　2.2 S3菌株理化性质鉴定结果：共对S3菌株进行了62项性状鉴定，结果见表1。
　　2.3 S3初步鉴定结果：根据62项性状鉴定结果，以生长温度和乳酸发酵性质为主要分类依据，再结合糖类发酵结果及菌株的形态特征，依据伯杰细菌分类手册第九版制定的检索表，加以归类，最后通过G＋Cmol％的测定对鉴定结果加以肯定或否定。初步鉴定结果见表2。
　　
　　综上所述，依据伯杰细菌分类手册第九版，从62项理化性质指标检测结果和G＋Cmol％含量结果初步鉴定S3为米氏链球菌（Streptococcus milleri）。我们还将对产广谱细菌素乳酸菌S3发酵液的特性做进一步研究，为寻找一种抑菌活性范围广、性能稳定、无毒害的乳酸菌细菌素，为天然食品防腐剂的进一步应用奠定理论基础。
　　

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