脾虚型肠易激综合征兔模型的建立
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摘要：目的：建立一种客观的、全面反映疾病情况、切合于实际的肠易激综合征动物模型。方法：选用白毛黑眼兔，随机分为正常组、模型组、用药组。除正常组外各组均予以湿热环境应激及番泻叶灌胃加饥饱失常复合法造模，用药组于造模中期预防性给香砂六君丸治疗。通过各组动物一般情况、粪便含水率、肠道敏感性、肠道转运功能以及组织病理学综合评价模型。结果：模型组动物较正常组一般情况明显较差；粪便含水率明显增高(P<0.01)；模型组各压力值下AWR评分均明显增高(P<0.01)；碳末推进率明显增高(P<0.01)。用药组较模型组在上述方面均明显改善(P<0.01或P<0.05)。结论：通过本实验方法建立的白毛黑眼兔脾虚型肠易激综合征动物模型可较好模拟肠易激综合征的发病情况，其评价指标客观，操作简单易行，对动物伤害小。
关键词：肠易激综合征；动物模型；脾虚
中图分类号：R-332 文献标识码：A 文章编号：1673-7717(2009)05-0906-03
肠易激综合征(irritable bowel syndrome，IBS)是一种常见的慢性肠功能紊乱疾病，表现为腹痛、腹胀及排便习惯(便秘、腹泻或便秘与腹泻交替)和大便性状的改变，多为慢性、间歇性发作，且无器质性病变。流行病学显示，IBS在西方国家患病率为5％～24％；我国2001年的一份调查报告显示，其人群按罗马Ⅱ诊断标准患病率为5.6％。随着我国生活节奏加快、社会竞争愈来愈激烈、工作压力越来越大，其发病率已有逐年增多的趋势。IBS使患者生活质量明显下降，甚至低于某些器质性疾病和其他一些功能性疾病。因此如何有效防治IBS已成为目前临床和科研的热点，然而要想对IBS作正确、全面的研究就必须有一种能切实、全面反映其发病情况的动物模型。本研究以中医学对此疾病的认识为基础，拟通过湿热复合苦寒泻下加饥饱失常法建立脾虚型IBS动物模型。
1 材料与方法
1.1 实验动物及分组
两月龄白毛黑眼兔18只，雌雄各半，体重约1.5kg，由上虞市星火兔业养殖场提供。将其随机分为正常组、模型组和用药组，每组6只。
1.2 主要试剂和仪器
Medlab－U生物信号采集系统、血压换能器：均购自南京免疫公司。MiCROW(MHM335)半自动石蜡切片机：浙江中医药大学实验动物中心提供。MiCROW(STR120)生物组织自动脱水机：浙江中医药大学实验动物中心提供。TGL－16C型高速冷冻离心机：上海安亭科学仪器厂生产。
1.3 主要药物及制备
番泻叶：由浙江中医药大学第二门诊部提供，用前用90℃热水浸泡两遍，每遍30min，制成含生药量约0.1g/mL浸液。香砂六君丸：购自胡庆余堂，用前水调成0.1g/mL混悬液。
1.4 实验方法
在一空房间内，用电取暖器将室温加热并维持在39～40℃。同时以水蒸气加大空气湿度(约80％)，以建立一湿热环境。将除正常组外动物，每天早8点钟起将其置于此湿热环境中4h，期间不予饮水、饮食，湿热应激结束后予以饮水、饮食。连续7天。从第7天起空腹灌服番泻叶浸剂(按30mL/kg标准灌胃)，灌胃结束后予以饮水、饮食。连续7天。从灌番泻叶浸剂的第3天起，用药组动物下午灌服香砂六君丸悬液(按1g/kg)，进行预防性药物治疗，模型组予等量生理盐水灌胃。正常组正常饲养。
1.5 观测指标
1.5.1 一般情况 观察各组动物精神状态、活动形态、皮毛色泽、肛周污秽情况、反应。
1.5.2 粪便情况 首先目测各动物粪便情况；然后每只动物取适量粪便，称重(湿重)，再放于烘干机中烘干，再次称重(干重)，计算粪便含水率。含水率(％)=(湿重－千重)/湿重×100％。
1.5.3 肠道敏感性测定 用橡胶手套制成长约7cm的球囊固定在导尿管一端，另一端通过三通管接压力换能器。将动物固定于透明的固定盒中，球囊涂石蜡油润滑，缓慢插入兔结肠内。一操作者通过三通管向球囊内注水达预定压力(20、40、60、80mmHg)后维持30s，各动物不同压力的测定顺序由操作者随机掌握。另一观察者在不知压力值的情况下观察动物反应作出AWR(腹壁撤离反射)评分。AWR评分标准：0分：无行为学反应；1分：身体静止不动。头部运动减少；2分：腹部肌肉收缩，但腹肌未抬离桌面；3分：腹肌收缩并抬离桌面；4分：骨盆抬起，身体呈弓形。
1.5.4 小肠推进功能测定 处死动物前所有动物以碳末混悬液4mL/只灌胃，20min后处死动物，迅速取出整个小肠，分别测量小肠的全长和被碳末染黑部分的长度，以计算小肠推进率。推进率(％)=幽门至墨汁前沿的距离/幽门至回盲部的距离×100％。
1.5.5 肠组织病理学观察 取各动物部分结肠，立即用生理盐水冲洗，肉眼初步观察有无器质性病变；然后用4％多聚甲醛固定，常规脱水，石蜡包埋，切片，HE染色，镜下观察其一般组织学表现。
1.5.6 统计方法 采用SPSS11.5软件统计分析。
2 实验结果
2.1 一般情况
正常组动物精神良好，活泼好动，反应灵敏，皮毛油亮光泽，双目有神，肛周元污秽物。模型组动物造模初期焦躁不安，后期出现精神萎靡、不喜活动、反应迟钝、皮毛枯槁无光泽，喜眯眼、无神，肛周污秽等。用药组上述情况较模型组有不同程度缓解。
2.2 粪便情况
通过目测正常组动物粪便成颗粒状，较干燥；模型组动物粪便大多不成形，呈水样，或成形但较潮湿；用药组动物粪便大多成形，但较潮湿，介于上两组之间。粪便含水率，模型组较正常组明显增高(P<0.01)；用药组较模型组降低(P<0.05)。见表1。
2.3 肠道敏感性
模型组在各压力值下AWR评分均明显高于正常组(P<0.01)；用药组在40mmHg、60mmHg和80mmHg压力下，较模型组有不同程度缓解(P<0.01或P<0.05)。见表2。
2.4 小肠推进功能
模型组动物碳末推进率较正常组明显增高(P<0.01)；用药组较模型组降低(P<0.05)。见表3。
2.5 肠组织病理学观察
肉眼观察各组动物肠组织均无糜烂、出血、溃疡等器质性病变。镜下模型组肠组织未见明显损伤，黏膜下层毛细血管壁结构完整，黏膜下及固有腺之间可见少量淋巴细胞及浆细胞浸润，个别可见少量中性粒细胞浸润，与对照组相比无明显差异。
3 分析与讨论
IBS涉及神经、内分泌、免疫、精神、感染等多方面因素，现有的模型也多从以上方面着手复制，主要有：通过束缚、夹尾等刺激造成的情志应激模型，予以直肠刺激复制的高敏模型，腹腔注射病原体或化学物质造成的感染性模型，以及冰水灌胃复制的便秘型IBS模型。以上模型各有优缺点，但大多对动物伤害较大，难以反映疾病的全貌。
要想在研究中取得进展需要好的动物模型，而要复制出好的模型又要具备一定的研究基础，这样的循环桎梏了本疾病的研究。笔者通过在临床、实验观察，认为中医药是打破这个循环的切入点，尤其中医药对功能性疾病有着独特的认识和良好的疗效。尽管现代医学对IBS的病因病机难以作出全面的解释，但从中医学出发却能较好的诠释。中医认为此病的基础病机是肝郁脾虚、脾虚为本。
本实验首先选用了白毛黑眼兔作为实验对象。此种兔具有免疫力低、消化道短的特点，容易产生应激反应。这模拟那些易受激惹的特定人群，增加了造模的先天体质因素。其次采用湿热环境应激复合苦寒泻下加饥饱失常造模。湿热环境耗气伤阴，使正气不足，免疫力下降，易受内外病邪侵袭。且长期、频繁处于这种十分不适的环境中，生理上的不适会引起心理上的改变，久而久之也造成了一定情志刺激，实验过程中也印证了这一点。这与束缚、夹尾造成的情志刺激机理是相同的，但相对较缓和对动物损伤较小，更贴切于现代人生活中因压力过大、生活节奏过快造成的生理、心理上的不适情况。另外，针对国内以腹泻型IBS多见的情况，选择了苦寒泻下并辅以饥饱失常模拟脾虚之证、泄泻之症，与湿热应激联合应用，从中医上说都有损伤脾气的作用，同时又有继发的肝郁，建立了IBS脾虚肝郁、脾虚为主的证型；从现代医学上说，两法均可降低机体抵抗力，同时湿热应激又有间接的情志刺激，苦寒泻下有明显的腹泻表现，分别从病因、症状上模拟IBS。
根据实验结果，模型组动物腹泻症状明显；肠道敏感性增高，表明模型组动物痛阈下降，容易受激惹产生腹痛症状；小肠蠕动增快，从而易发生泄泻；而肠组织无论是肉眼还是显微镜下均未发现器质性病变的现象，符合腹泄型IBS的诊断标准。通过药物治疗的动物上述情况明显缓解，亦反证了模型的成功。
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