丙泊酚后处理对心肌缺血再灌注中TNFα，IL6的影响
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作者: 张彦清 聂丽霞 周建斌 白国良 刘保江
摘要：目的探讨丙泊酚后处理大鼠心肌缺血再灌注中肿瘤细胞因子α（TNFα）、白细胞介素6（IL6）的影响及对心肌的保护机制。方法将40只Wistar大鼠随机分为4组（n=10），分别为假手术组（A组），只穿线，不结扎；缺血再灌注组（B组），缺血30 min，再灌注2 h；缺血后处理组（C组）缺血30 min末行缺血30 s，再灌注30 s，重复3次，再灌注2 h；丙泊酚后处理组（D组）缺血30 min再灌注前5 min静脉滴注丙泊酚（25 μmol/L），再灌注2 h。结扎大鼠冠状动脉左前降支来制备心肌缺血再灌注模型。用ELISA方法观察各组在各采血时间点的血清中TNFα，IL6的含量。结果与假手术组相比，缺血再灌注组中TNFα，IL6的含量均升高，差异有统计学意义（P<0.05）；与缺血再灌注组相比，缺血后处理组中TNFα，IL6的含量均降低差异有统计学意义（P<0.05）；与缺血后处理组相比，丙泊酚后处理组中TNFα，IL6的含量均降低，差异有统计学意义（P<0.05）。结论丙泊酚后处理对大鼠心肌缺血再灌注具有保护作用，丙泊酚后处理可能通过调控对大鼠心肌缺血再灌注血清中的TNFα，IL6含量来发挥对心肌细胞的保护作用。
关键词：心肌缺血再灌注；缺血后处理；丙泊酚；肿瘤细胞因子α；白细胞介素6
中图分类号：R542.2R285.5文献标识码：Adoi：10.3969/j.issn.16721349.2014.03.052文章编号：16721349（2014）03034702
心肌缺血再灌注损伤（IRI）是临床麻醉工作中一种常见的病理过程，尤其在体外循环下的心脏手术、心肌梗死患者的溶栓治疗和实施非心脏手术的冠心病患者中往往更为多见。在1960年Jennings等[1]第一次提出心肌缺血再灌注损伤的概念，其发病机制通常认为与氧自由基、钙超载、中性粒细胞释放、微血管损伤和高能磷酸化合物生成障碍等有关[2，3]。心肌缺血后处理（IPO）是近年来提出的一种新的心肌保护方法，动物实验和临床试验已证实其确有心肌保护作用，但由于IPO要求短暂反复缺血再灌注，存在潜在的风险及医学伦理道德的原因而限制了其在临床上的广泛应用，因此药物后处理将成为一种趋势[4，5]。丙泊酚被用于临床已有几十年的历史，丙泊酚具有明确的扩冠作用，至今仍被广泛应用于临床麻醉。随着循证医学的兴起，医疗工作者们组织了大规模的临床试验试图对一些常规药物进行全面的评价，其中一些实验就是针对丙泊酚[4，5]。一些试验表明使用丙泊酚可能加重再灌注心肌损伤[3，4]。我们考虑除了已知的保护作用外，丙泊酚对缺血心肌可能还存在某种“潜在”的威胁，这两种作用同时存在，在一般情况下，其保护作用强于损伤作用。因此，本实验将通过丙泊酚后处理对大鼠心肌缺血再灌注中肿瘤细胞因子α（TNFα）、白细胞介素6（IL6）的含量来为临床提供参考。
1材料与方法
1.1动物选择健康成年Wistar雄性大鼠40只，清洁级，体重250 g～300 g，由山西医科大学生理教研室提供。
1.2建立大鼠在体心肌缺血再灌注模型用乌拉坦以5 mL/kg的剂量对大鼠腹腔注射，麻醉后固定，并将针形电极插入大鼠四肢皮下，进行心电监护，并记录正常Ⅱ导联心电图。将大鼠气管切开，连接动物呼吸机，呼吸频率60次/分，潮气量18 ml/kg，行机械通气。开胸：将大鼠左侧胸壁第3～4肋间纵向切口，并剪开心包，暴露心脏，然后在肺动脉圆锥和左心耳连线中点下方约2 mm 处进针，穿行70缝线，并在末端通过一塑料管，向下推动其管身来阻断冠脉血流，放松则造成再灌注，同时记录并观察Ⅱ导联心电图，观察ST段抬高及恢复，以及心律失常来作为判断冠状动脉断流及再灌注成功与否的指标。
1.3试剂ELISA试剂盒，Rat IL6（北京四正柏生物科技有限公司）；ELISA试剂盒，Rat TNFα（北京四正柏生物科技有限公司）；HX300动物呼吸机（泰盟科技有限公司）；SC04低速离心机（安徽中科中佳科学仪器有限公司）
1.4实验分组及标本采集实验随机分为4组（n=10），假手术组（A组）：只穿线不结扎，并分别于穿线之前，30 min后及2 h后取血；灌注组（B组）：穿线之前取血，结扎LAD缺血30 min后取血，再灌注2 h后取血；缺血后处理组（C组）：穿线之前取血，结扎LAD缺血30 min末行缺血30 s，再灌注30 s，重复3次，然后取血，再灌注2 h后取血；丙泊酚后处理组（D组）：穿线之前取血结扎LAD缺血30 min再灌注前5 min静脉滴注丙泊酚（25 μmol/L）后取血，再灌注2 h后取血。取血之后立即离心血清并冰冻。
1.5标本测定用ELISA法测定血清中TNFα，IL6的含量。
1.6统计学处理采用SPSS 15.0 统计软件分析，计量资料以均数±标准差（x±s ） 表示，各组间差异性检验采用单因素方差分析，P<0.05为差异有统计学意义。
2结果
与A组比较，B组血清含量中TNFα，IL6均升高（P<0.05），与B组比较，C组血清中TNFα，IL6含量均降低（P<0.05），与C组比较，D组血清含量中TNFα，IL6含量均降低（P<0.05）。详见表1、表2。
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