气相色谱-串联质谱法测定动物组织中6种β-受体激动剂残留量研究

来源:用户上传      作者: 蒋万枫 董诗竹 李钰

　　摘要 建立了气相色谱-串联质谱同时测定动物组织中6种β-受体激动剂（克伦特罗、溴布特罗、马布特罗、莱克多巴胺、特布他林、沙丁胺醇）残留量的检测方法。样品经乙酸乙酯提取，SCX小柱提取净化后，用BSTFA：TMCS衍生，再进行气相色谱-串联质谱测定，在子离子扫描模式下优化不同β-受体激动剂的碰撞能量。结果表明：该方法的相关系数为0.994~0.998，定量限为0.24~0.30 μg/kg，检出限为0.08~0.10 μg/kg，克伦特罗的线性范围为0.005~2.500 μg/mL，溴布特罗的线性范围为0.002~3.000 μg/mL，马布特罗、莱克多巴胺、特布他林的线性范围均为0.005~3.000 μg/mL，沙丁胺醇的线性范围为0.010~2.000 μg/mL。6种β-受体激动剂的回收率为79.7%~100.3%，精密度为1.2%~3.3%。
　　关键词 气相色谱-串联质谱（GC/MS/MS）；动物组织；β-受体激动剂；残留量
　　中图分类号 R151.3 文献标识码 A 文章编号 1007-5739（2012）03-0033-02
　　动物组织中β-受体激动剂的检测是一项重要的工作。β-受体激动剂虽然有一定的药用价值，有防治支气管哮喘和支气管痉挛，松弛器官平滑肌、促进体内营养素重新分配等功能，但剂量过大，会对人和动物产生巨大的副作用[1-2]。目前，一些不法商贩将剂量加大至药用剂量的5～10倍，并且延长使用期，以提高家畜的生长速度和瘦肉率，获取暴利。由于β-受体激动剂难分解，一旦被人食用后，会产生明显的中毒症状。
　　目前，β-受体激动剂的研究方法主要有气相色谱-质谱（GC/MS）法[3-8]、液相色谱-质谱（LC/MS）法[9-10]，但利用气相色谱-串联质谱（GC/MS/MS）对动物组织中β-受体激动剂的检测暂时还缺乏相关报道。由于气相色谱-串联质谱（GC/MS/MS）的灵敏度显著高于气相色谱-质谱（GC/MS），因此对日常工作中β-受体激动剂的检测具有重要意义。
　　1 材料与方法
　　1.1 试验材料
　　1.1.1 仪器。Agilent 7890A/7000 Triple Quad，美国安捷伦公司产品；固相萃取装置；SCX固相萃取净化柱；氮气吹干仪。
　　1.1.2 供试药剂。衍生化试剂BSTFA：TMCS（99.1）；β-受体激动剂标准品：克伦特罗、溴布特罗、马布特罗、莱克多巴胺、特布他林、沙丁胺醇。
　　1.2 试验条件
　　1.2.1 色谱条件。色谱柱：毛细管柱HP-5MS，30 m×250 μm×0.25 μm；载气：高纯He，纯度99.999%以上；流量：1.0 mL/min，恒流模式；压力：8.808 5 psi；进样口温度：250 ℃；进样方式：不分流进样；进样量：1 μL；升温程序：起始温度70 ℃（保持1 min），以25 ℃/min升至230 ℃（保持3 min），以25 ℃/min升至280 ℃（保持0 min）。
　　1.2.2 质谱条件。电子轰击（EI）离子源温度：230 ℃；EI源电子轰击能量：70 eV；电子倍增器电压：自动调谐值；溶剂延迟：3.75 min；四极杆温度：150 ℃；选择离子监测（SIM）模式和多重反应监测（MRM）模式。
　　1.3 样品的前提取
　　称取5 g（精确到0.01 g）动物组织样品于50 mL聚乙烯离心管中，加入15 mL乙酸乙酯、3 mL 10.0%碳酸钠溶液，匀质，离心，取上清液，再加入10 mL乙酸乙酯，漩涡混合，合并提取液，加入0.10 moL/L盐酸溶液5 mL，漩涡混合，离心吸取下层溶液，重复萃取1次，合并提取液，调pH值至5.2。经SCX柱净化，吹干，加入100 μL甲苯及100 μL衍生化试剂，80 ℃衍生化1 h后，加入300 μL甲苯后上机。
　　2 结果与分析
　　2.1 监测离子的确定
　　先对化合物进行全扫描，对每个化合物确定扫描离子，再采用选择离子模式（SIM）以提高检测灵敏度，每个化合物选择3~4个监测离子（表1）。
　　
　　2.2 6种β-受体激动剂最佳碰撞能量的确定
　　选择上述监测离子作为多离子反映监测（MRM）模式的母离子，在不同的碰撞能量下进行子离子模式扫描，碰撞电压参数从5 V变化至30 V，间隔为5 V，选择碰撞能量最高的2对母离子＞子离子作为定量离子与定性离子（表2）。
　　
　　2.3 方法学考察
　　2.3.1 线性范围、定量限、检测限和相关系数。该方法的线性范围、定量限、检出限如表3所示。该方法的相关系数为0.994~0.998，定量限为0.24~0.30 μg/kg，检出限为0.08~0.10 μg/kg，克伦特罗的线性范围为0.005~2.500 μg/mL，溴布特罗的线性范围为0.002~3.000 μg/mL，马布特罗、莱克多巴胺、特布他林的线性范围均为0.005~3.000 μg/mL，沙丁胺醇的线性范围为0.010~2.000 μg/mL。与朱 坚等[7]气相色谱-质谱联用仪的结果相比，降低了4~10倍。
　　2.3.2 回收率和精密度。该方法对猪肉、生猪肝、熟猪肝、生鸡肝、熟鸡肝等5种常见动物组织进行添加回收试验，各化合物添加水平如表3所示，每个水平重复测定10次，在添加5.0 μg/kg混标的情况下，6种β-受体激动剂的回收率为79.7%~100.3%，精密度为1.2%~3.3%。
　　3 结论
　　该研究建立了气相色谱-串联质谱（GC/MS/MS）同时测定动物组织中6种β-受体激动剂残留量的方法，优化了子离子扫描模式下6种β-受体激动剂的碰撞能量，方法的检出限、定量限较气相色谱质谱联用仪（GC/MS）明显降低，回收率、精密度均符合残留分析的要求。
　　
　　
　　4 参考文献
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