益母草不同种质评价研究

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　　摘要：目的 比较研究各益母草种质资源的差异性，为品种选育提供优良育种材料。方法 将收集自全国不同产地的20个野生益母草种质资源在浙江衢州进行同质园试验，观察其物候期、耐寒性及生境适宜性；测定初花期株高、鲜重和干重，并分别测定初花期和反季节栽培的益母草植株中盐酸水苏碱和盐酸益母草碱含量。结果 综合各种质对浙江生境的适应性、初花期药材干产量及其中的盐酸水苏碱和盐酸益母草碱成分含量、反季节栽培益母草植株中上述2种成分的含量水平，河南灵宝、河南社旗和湖南桂东3个种质较好，其中以河南灵宝种质最佳，其初花期药材干产量（30.6 g/株）、初花期植株中盐酸水苏碱和盐酸益母草碱含量（分别为1.31%和0.19%）及反季节栽培植株中有效成分盐酸水苏碱和盐酸益母草碱含量（分别为3.44%和0.37%）均较高，且能适应在浙江种植。结论 河南灵宝种源可以作为品种选育的最佳候选材料。
　　关键词：益母草；种质；评价；盐酸水苏碱；盐酸益母草碱
　　中图分类号：R282 文献标识码：A 文章编号：1005-5304（2016）05-0078-05
　　Research on Evaluation of Different Germplasm of Leonurus japonicus XU Jian-zhong1，2， YANG Hong-tao3， SUN Yi-ming2， YU Xu-ping2， WANG ZHi-an2， LUO Ye-si1 （1. Zhejiang Chinese Medical University， Hangzhou 310053， China； 2. Zhejiang Research Institute of Traditional Chinese Medicine， Hangzhou 310023， China； 3. Hangzhou Huadong Chinese Herbs Pieces Co.Ltd.， Hangzhou 311301， China）
　　Abstract： Objective To study the difference of Leonurus japonicus germplasm resources and provide good materials for breeding. Methods Totally 20 wild Leonurus japonicus germplasm resources from different places of China were collected. Experiment was conducted in homogeneous garden in Quzhou City of Zhejiang Province. Phenological phase， cold endurance and habitat adaptability were observed； the plant height， fresh weight and dry weight in early flowering were measured； the contents of stachydrine hydrochloride and leonurine hydrochloride were determined in early flowering and out-of-season cultivation. Results Considering the habitat adaptability， dry plant weight in early flowering， the contents of stachydrine hydrochloride and leonurine hydrochloride separately in early flowering and out-of-season cultivation， it was believed that the germplasms from Linbao County， Sheqi County in Henan Province and Guidong County in Hunan Province were better， in which Linbao germplasm was the best： the dry plant weight was 30.6 g， the content of stachydrine hydrochloride and leonurine hydrochloride were 1.31% and 0.19% respectively in early flowering， and were 3.44% and 0.37% respectively under anti-season cultivation， and it can be well adapted in Zhejiang Province. Conclusion The germplasm of Leonurus japonicas from Lingbao can be the best materials for breeding.
　　Key words： Leonurus japonicas； germplasm； evaluate； stachydrine hydrochloride； leonurine hydrochloride
　　益母草Leonurus japonicus Houtt.为唇形科一年
　　生或二年生草本植物，为妇产科要药，具有调经、行血生血、祛瘀、消水、安胎等功效。益母草含生物碱类、挥发油、二萜类、苯丙醇苷、环形多肽等，具有活血调经、利尿消肿、清热解毒等功效，主要用于治疗月经不调、经闭、产后瘀痛、瘀血腹痛、跌打损伤、小便不利、水肿和痈肿疮疡等[1]，近年来还用于治疗冠心病、急性脑梗死等血栓类疾病[2]。 　　2010年版《中华人民共和国药典》[3]规定本品入药部位为益母草新鲜或干燥地上部分。鲜品于春季幼苗期至初夏花前期采割；干品于夏季茎叶茂盛、花开或初开时采割，晒干，或切段晒干。益母草传统上以花前期采割地上部分入药，但由于花前期益母草中水苏碱和益母草碱含量非常低，基本达不到药典规定，因此，目前很多生产厂家均以春季未开花的鲜益母草或反季节种植的益母草作为原料。不同产地的益母草药材中水苏碱和益母草碱含量差异很大。本试验通过采集不同地区的野生益母草种源进行同质园试验，以评价不同种源益母草对当地生境的适应性、药材产量和药材质量等情况，为益母草新品种选育提供优良育种材料。
　　1 仪器与试药
　　Agilent 1100系列高效液相色谱仪及Agilent化学工作站，配备Alhech2000蒸发光散射检测器。盐酸水苏碱对照品购于中国食品药品检定研究院，批号110712-201010。盐酸益母草碱对照品购于成都曼斯特生物科技有限公司提供，批号11122602。乙腈为色谱纯，辛烷磺酸钠为高效液相色谱专用，其他试剂均为分析纯，水为重蒸馏去离子水。
　　收集全国不同产地的20份野生益母草种质资源，经浙江省中药研究所高级工程师俞旭平鉴定为益母草属益母草Leonurus japonicus Houtt.，在浙江衢州市柯城区沟溪乡斗目垅村建立益母草种质资源圃。
　　2 方法与结果
　　2.1 种植方法
　　资源圃每个品种种植面积为20 m2，种植行距为25 cm，四周设保护行2.0 m。于8月26日播种，播种后分别观察各种源益母草的物候期；在冬季分别观察各种源益母草对低温的耐受性；并在来年初花期每个种质随机取样10株，分别测量各种质的株高、株径，称量单株鲜重，于60 ℃烘箱中烘干后再称量干重，计算折干率。反季节栽培于3月28日播种，于当年7月12日采收并测定药材中有效成分盐酸水苏碱和盐酸益母草碱的含量。施肥及其他田间管理等同常规。
　　2.2 盐酸水苏碱含量和盐酸益母草碱含量测定
　　按2010年版《中华人民共和国药典》益母草项下含量测定方法进行分析测定。
　　2.3 各种质益母草物候期及生境适应性表现
　　各种源益母草出苗时间差异不大，均在6～8 d。从耐寒性表现来看，不同种源益母草差异较大，一般来说，长江以南各省种源（湖南和湖北2个种源除外）益母草较适应浙江冬季气候，地上部基本不冻蔫而能安全入冬；长江以北尤其是山东以北等省份益母草种质均表现为冬季地上部部分或全部冻蔫，未能恢复，待来年春季从根茎基部重新萌生新枝。具体见表1。
　　从初花期看，各种源益母草初花期大部分表现为南方种源益母草初花期较早，时间范围从4月底至6月初，最早的是浙江衢州A（4月26日）和广西桂林（4月28日），以云南陆良较晚（6月5日）；而北方种源初花期相对较南方稍迟，从5月中旬至7月上中旬，较早的是山东泗水（5月14日）和河北安国（5月15日），最迟的是山东临朐（7月8日）和河南南阳（7月10日）。尤其是山东临朐和河南南阳2个益母草种源，由于初花期在7月份，正值浙江夏季高温季节，严重影响了这2个种源益母草的授粉和结实，致使结实不良，空瘪种子多。具体见表1。
　　2.4 各种质益母草初花期株高和株茎表现
　　各种质益母草初花期株高差异较明显，以河南南阳和山东临朐2个种质初花期株高较高，均在250 cm以上，其余种质株高均在200 cm以下，见图1。
　　各种质益母草株茎表现不一，也以山东临朐和河南南阳的种质株茎较粗，两者均在1.3 cm以上，株径最细的是广东清远种质，仅为0.71 cm，见图2。
　　2.5 各种质益母草初花期株均鲜重、干重和折干率
　　各种质益母草初花期株均鲜重差异较大，最多的是云南陆良（180.0 g），其次是浙江金华婺城（170.0 g）、河北安国（140.0 g）、浙江义乌（135.0 g）、浙江衢州A和山东临朐（均为130.0 g）、河南南阳（120.0 g）等，而广西桂林（65.0 g）和广东清远（50.0 g）最少。
　　各种质益母草初花期株均干重差异较大，从多到少依次为山东临朐（49.4 g）、云南陆良（46.8 g）、河南南阳（46.1 g）、浙江金华婺城（38.4 g）、浙江衢州A（33.0 g）、浙江义乌（32.5 g）、河北安国（32.0 g）、浙江金华白龙桥（28.7 g）等，最少的是广西桂林（13.9 g）和广东清远（10.7 g）种质。最多的山东临朐和最少的广西桂林相比，单株干重差异达4倍多。
　　反映在折干率上，各种质表现差异也较大。折干率以河南南阳和山东临朐2个种质较高，分别为38.4%、38.0%，折干率最低的是湖南桂东（16.7%）和江西修水（16.0%）。详见图3。
　　2.6 各种质益母草初花期有效成分含量
　　不同种质益母草初花期盐酸水苏碱和盐酸益母草碱含量差异很大。从盐酸水苏碱含量来看，除浙江衢州B种质含量（0.49%）低于药典规定标准（≥0.50%）外，其余种质盐酸水苏碱含量均在0.50%以上，其中含量超过药典规定最低标准1倍以上的有河南南阳（1.32%）、河南灵宝（1.31%）、山东临朐（1.21%）和河南社旗（1.01%）4个种质。从盐酸益母草碱含量来看，低于药典规定标准（≥0.05%）的有湖北孝感（未测出）、山东泗水（0.01%）、浙江衢州B（0.02%）、浙江义乌和浙江金华婺城（0.02%）、河北安国（0.04%）6个种质，含量超过药典规定标准1倍以上的有山东临朐（0.25%）、河南南阳（0.21%）、河南灵宝（0.19%）、河南社旗（0.18%）、浙江金华白龙桥和湖南桂东（0.10%）。可以看出，盐酸水苏碱和盐酸益母草碱含量均以北方种质较高，如河南南阳、山东临朐和河南灵宝，而南方种质普遍较低，见表2。 　　2.7 反季节栽培益母草中有效成分含量表现
　　不同种质反季节栽培益母草中盐酸水苏碱含量差异较大，其中以云南陆良较低（1.99%），其余种质含量均在2.0%以上，盐酸水苏碱含量>3.0%者从高到低依次为河南灵宝（3.41%）>金华婺城（3.28%）>河北安国（3.18%）>山东临朐和浙江衢州A（3.13%）>湖南桂东（3.09%）>浙江义乌（3.06%）>河南社旗（3.00%）。从盐酸益母草碱含量来看，各种质之间差异更大。除湖北孝感种源在检测范围内依然未检测到盐酸益母草碱外，其余种质盐酸益母草碱含量均在药典规定最低标准以上。其中含量超过药典规定最低限量标准（≥0.05%）1倍以内者为浙江衢州B（0.09%）、浙江衢州A（0.08%）和浙江金华婺城（0.07%）3个种质，含量超过药典最低标准4倍者从高到低依次为山东临朐（0.54%）>河南灵宝（0.37%）>河南南阳（0.35%）>湖南桂东（0.34%）>浙江金华白龙桥（0.25%）>江西修水（0.22%），尤其是山东临朐品种，盐酸益母草碱含量超出药典含量规定最低标准10倍多。详见表3。
　　3 讨论
　　从全生育期观察结果来看，除山东临朐和河南南阳2个种质外，其余的18个益母草种质均能适应浙江的生境，均能完成正常的生长发育过程。由于山东临朐和河南南阳2个种质的开花期均在7月上旬，此时期正值浙江地区的夏季高温季节，可能高温影响了2个种质益母草的正常开花和授粉，主要表现为花期长达2个多月，空瘪种子多，种子多不成熟，说明这2个种质不太适宜在浙江种植。
　　药材的单株干重情况直接反映了药材收获后的产量。从初花期不同种质益母草的株均干重表现来看，产量比较高的种质为山东临朐、云南陆良、河南南阳、浙江金华婺城等，产量较低的为广西桂林和广东清远等，产量最高的山东临朐和最低的广西桂林相比，单株干重差异达4倍多。
　　从初花期益母草中有效成分盐酸水苏碱和盐酸益母草碱含量来看，不同种质益母草中2种成分含量差异很大。其中，盐酸水苏碱含量超过药典规定标准1倍以上的为河南南阳、河南灵宝、山东临朐和河南社旗4个种质；从盐酸益母草碱含量来看，含量超过药典规定标准1倍以上的为山东临朐、河南南阳、河南灵宝、河南社旗、浙江金华白龙桥和湖南桂东种质。盐酸水苏碱和盐酸益母草碱含量一般均以北方的种质较高，如河南南阳、山东临朐和河南灵宝等品种，而南方种质普遍较低。
　　反季节栽培益母草植株中，盐酸水苏碱含量>3.0%的为河南灵宝、金华婺城、河北安国、山东临朐、浙江衢州A、湖南桂东、浙江义乌和河南社旗种质。盐酸益母草碱含量超过药典最低限量标准4倍的种质有山东临朐、河南灵宝、河南南阳、湖南桂东、浙江金华白龙桥和江西修水6个种质，尤其是山东临朐品种，盐酸益母草碱含量超出药典规定的10倍多；而湖北孝感种源在检测范围内依然未检测到盐酸益母草碱。益母草具有活血化瘀功效，其含有的益母草碱还具有保护心血管、保护中枢系统、抗糖尿病等作用，尤其是治疗脑梗死有显著效果[4-6]。因此盐酸益母草碱含量的高低可能会直接反映到药材的临床疗效上。
　　综合各种质对浙江生境的适应性、初花期药材干产量及其中的盐酸水苏碱和盐酸益母草碱成分含量、反季节栽益母草植株中上述2种成分的含量水平，我们认为河南灵宝、河南社旗和湖南桂东等益母草种质其综合性状和药材品质等方面均较佳，也比较适应在浙江的种植。其中，尤其以河南灵宝种质最佳，不仅初花期有效成分盐酸水苏碱和盐酸益母草碱含量（分别为1.31%和0.19%）均较高，其反季节栽培植株中上述2种生物碱成分含量（分别为3.44%和0.37%）也较高，而且单株干重（30.6 g）也较多，因此可以将河南灵宝种质作为品种选育的最佳候选材料。
　　参考文献：
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