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黄芪中黄芪甲苷含量测定研究进展

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  摘要:在综述国内黄芪中黄芪甲苷含量测定方法基础上,分析黄芪中的黄芪甲苷含量测定方法研究进展,包括HPLC-ELSD法、HPLC/ESI-MS联用法、HPLC-UV法、UPLC-MS法、HPLC-DAD-ELSD法等,旨在为进一步开展黄芪相关研究提供理论借鉴。
  关键词:黄芪甲苷;含量測定;黄芪;HPLC-ELSD;HPLC/ESI-MS
  中图分类号:R284.2    文献标识码:A    文章编号:1674-1161(2019)04-0049-03
   黄芪具有补气升阳、益卫固表、利水消肿和托疮生肌等功效。目前,主要用黄芪皂苷中的黄芪甲苷(astraga bside IV)作为评价黄芪药材质量的标准。在查阅收集大量文献的基础上,综述黄芪甲苷的检测方法研究进展,为黄芪甲苷相关研究提供技术借鉴。
  1 黄芪中黄芪甲苷含量测定方法
   黄芪甲苷的检测方法主要有HPLC-ELSD法、HPLC/ESI-MS联用法、HPLC-UV法、UPLC-MS法、HPLC-DAD-ELSD法、近红外光谱法等。
  1.1 HPLC-ELSD法
  蒸发光散射检测器作为通用型检测器,不依赖于化合物光学性质,对非挥发组分均有较好的响应,广泛应用于皂苷类、萜类、生物碱类、糖类等中药成分的质量控制。
  崔雪莹等探讨蒸发光散射检测器高效液相色谱法(HPLC-ELSD)测定黄芪中4种皂苷类活性成分含量的可行性。采用ZORBAX SB-C18(4.6 mm×250 mm,5 μm)色谱柱,以水-乙腈为流动相梯度洗脱,流速0.8 mL/min,载气流速1.2 L/min,漂移管温度105 ℃。测定结果表明,黄芪甲苷、黄芪皂苷Ⅰ、黄芪皂苷Ⅱ、黄芪皂苷Ⅲ的含量分别为4.40 ,0.2,1.42,1.31 mg/g,分别在0.476~5.712,0.139~8.340,0.434~6.944,0.392~4.704 μg范围内呈线性关系,精密度分别为2.25%,0.81%,2.52%,2.31%,平均回收率分别为101.84%,98.96%,103.27%,100.35%。
   林宏琳等通过HPLC-SPD-ELSD串联系统比较、样品前处理及色谱条件优化,测定保健食品中黄芪甲苷的量。以甲醇为提取溶剂对样品进行超声提取,色谱柱选用Thermo Accucore XL C8(150 mm×4.6 mm,4 μm),流动相为乙腈-水(32∶68),柱温35 ℃,体积流量1 mL/min,紫外检测波长192 nm,进样量20 μl,漂移管温度40 ℃,氮气压力308 kPa。测定结果表明:黄芪甲苷在0.05~0.25 mg/ml范围呈良好线性关系,ELSD和SPD分别为0.999 8和0.999 2;方法检出限为0.02,0.04 mg/g;3批样品黄芪甲苷平均含量分别为1.06,1.03,1.05 mg/g和1.11,1.06,1.09 mg/g,平均加样回收率为96.80%,98.70%。该法便捷经济、准确可靠,可根据实际情况选择ELSD或SPD检测器,为保健食品中黄芪甲苷的质量控制与评价及相关研究提供适用方法。
  1.2 HPLC/ESI-MS联用法
   电喷雾质谱(ESI-MS)是一种可得到每个色谱峰的紫外光谱图、保留时间、相对分子质量和特征碎片等信息的软电离质谱技术,与质谱联用可弥补常规紫外检测对某些紫外吸收弱的化合物不灵敏、提供分子结构信息较少的缺点。
   张文敬等利用高效液相色谱法制备黄芪水煎液中的黄芪甲苷,并通过质谱对收集到的组分进行鉴定。分析型色谱条件为:色谱柱EcliPseXDB-C18(150 mm×4.6 mm,5 μm)柱,乙腈-水梯度洗脱,柱温25 ℃,流速0.8 mL/min,检测波长254 nm,进样量20 μL。制备型色谱条件为:Hypersil C18(20 mm×300 mm,10 μm)柱,流速10 mL/min,进样量2 mL,其他同分析型色谱。质谱分析法为电喷雾离子化(electrospray ionization,ESI)源,电压3.5 kV,正、负离子检测,鞘气(N2)流速80 a.u.,辅助气(N2)流速15 a.u.,碰撞气体为氦气,毛细管温度350 ℃,毛细管电压±5 V。全离子扫描范围50~2 000 m/z。经分析型色谱得标准曲线回归方程为:A=0.1717 C+0.4657,r=0.999 6,在0.01~0.2 mg/mL范围内线性关系良好。制备型色谱方法得到的峰型较好,峰间隔适当,能够将相邻组分分离。收集保留时间为26 min的组分,经分析型色谱和ESI-MSn鉴定为黄芪皂甙IV(astragaloside IV),即黄芪甲苷,且纯度可达95%。
  1.3 HPLC-UV法
   高效液相色谱法是检测药材中成分含量的一种常用方法。紫外检测器灵敏度高,噪间低,线性范围宽,选择性好,对环境温度、流动相组成变化和流速波动不敏感,可用于等浓度洗脱,也可用于梯度洗脱。
   姜丽丽等建立黄芪干根中HPLC-UV法测定黄芪甲苷的方法,比较蒙古黄芪、野生黄芪和膜荚黄芪3种不同来源样本的黄芪甲苷含量。采用HPLC-UV法,色谱柱为Kromasil C18柱(250 mm×4.6 mm),流动相为乙腈∶水(32∶68),流速1.0 ml/min,检测波长203 nm。黄芪甲苷在0.05~0.50 mg/ml范围内线性关系良好(r=0.999),平均回收率为98.216%(RSD=2.85%);黄芪甲苷含量为野生黄芪>膜荚黄芪≈蒙古黄芪。
  1.4 UPLC-MS法
   用超高效液相色谱-串联质谱法(UPLC-MS法)测定物质含量,具有准确、快速、高效、灵敏等优点,可用于黄芪中黄芪甲苷的快速测定,提高分析效率。
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