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载DOX纳米粒子在SKOV3细胞内累积的研究

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  摘  要:目的:包载DOX的纳米粒子在SKOV3细胞内累积的研究。方法:本实验将人卵巢癌SKOV3细胞作为研究对象,在激光共聚焦显微镜观测NPs、NPs-DOX荧光染料随时间变化的累积情况。结果:NPs、NPs-DOX在体外培养的SKOV3细胞内荧光强度逐渐增强。结论:随时间的增加,细胞内纳米粒子的累积量逐渐增加,表现出时间依赖性。
  关键词:载药纳米粒子;DOX;SKOV3
  中图分类号:R318 文献标志码:A 文章编号:2095-2945(2020)15-0033-02
  Abstract: Objective: To study the accumulation of DOX-loaded nanoparticles in SKOV3 cells. Methods: In this experiment, human ovarian cancer SKOV3 cells were used as the research object, and the situationthat NPs and NPs-DOX fluorescent dyes accumulated with time was observed by laser confocal microscope. Results: The fluorescence intensity of NPs and NPs-DOX increased gradually in SKOV3 cells cultured in vitro. Conclusion: with the increase of time, the accumulation of intracellular nanoparticles increased gradually, showing a time-dependent manner.
  Keywords: drug-loaded nanoparticles; DOX; SKOV3
  現如今,妇科恶性肿瘤种类繁多,卵巢癌所占的死亡率最高,其中大多数原发于卵巢,随着目前临床治疗手段的完善,临床上,应用肿瘤标记物进行筛查,可提前发现患者肿瘤,及早进行治疗。卵巢癌是以手术治疗为主,辅以放化疗[1]。但其疗效仍相对局限,实际上,化疗药在对卵巢癌细胞造成伤害的同时,对机体各个系统和器官也造成不同程度的损害。临床上的一线化疗方案主要还是铂类联合紫杉醇,作用于细胞DNA,但在治疗过程中,治疗效果上仍相对有限,卵巢癌对这类药物,产生阻滞及外排,在很大程度上影响着临床肿瘤治疗的效果。应用化疗药物后,引起多种并发症,降低患者的生活质量,降低患者生存几率[2-4]。阿霉素(adriamycin;又称多柔比星,doxorubicin,DOX),目前多在实体肿瘤化疗中发挥作用,它是一种广谱蒽环类,可以抗肿瘤的药物[5]。科技进步,纳米技术在多方面皆有应用,其中纳米药物更是引起关注。多篇文献报道,在抗肿瘤治疗中,载体纳米药物有更好的疗效。纳米药物,通过物理、化学等方式将传统化疗药物负载到纳米粒子上,得到纳米化疗药。纳米药物载体粒径小,通过肿瘤的特殊效应,聚积于肿瘤内部,改变了化疗药物难溶于水,对非肿瘤细胞有杀伤性等缺点[6,7]。将纳米技术与医学相结合,改变了化疗药物的溶解度和稳定性,利用纳米粒子的特性,减轻了化疗药物带来的毒副作用。本实验旨在研究包载DOX的纳米粒子在人卵巢癌SKOV3细胞内的累积情况。
  1 材料和方法
  1.1 实验材料
  (1)实验细胞与质粒
  SKOV3由佳木斯大学生命科学中心细胞库惠赠;NPs、NPs-DOX由国家纳米科学中心提供。
  (2)试剂与耗材(见表1)
  1.2 实验方法
  (1)载药纳米粒子在细胞内的累积:于激光共聚焦专用平皿中,接种SKOV3细胞,置于培养箱中孵育24h,培养条件为37℃、5% CO2。
  (2)加入250μg/mL的NPs、NPs-DOX,分别培养30min、60min、120min后。
  (3)使用Olym-pus FV1000共聚焦显微镜,检测细胞内药物的累积情况。
  2 结果
  观察NPs-DOX在SKOV3内累积的情况,结果如图1所示,随着时间的增加,细胞内的NPs-DOX荧光强度逐渐增强。反映了纳米粒子进入细胞内的量随时间的增加而增加,呈现了时间依赖性。
  3 讨论
  肿瘤细胞与正常细胞的内外微环境有很大的差异,pH值、对热敏感性、谷胱甘肽含量以及血管状态等方面对肿瘤细胞均有影响[8]。纳米粒子利用这种特点,使载药纳米粒子进入肿瘤细胞内释放,从而可以大大减少正常组织对药物副作用的影响。本实验利用共聚焦显微镜,观察载药纳米粒子随时间增加,其在SKOV3细胞内逐渐增加。由此可知,纳米粒子包裹的DOX可进入肿瘤细胞内,快速释放DOX,并通过纳米粒子的协同治疗,发挥良好的体外抗肿瘤作用。
  纳米技术在肿瘤的治疗中,得到广泛关注。载药纳米粒子在抗肿瘤药物中,通过加强有效递送介质发挥着重要作用。将靶向性和功能性纳米药物载体与机体的生理环境结合研究,在治疗中发挥更大的作用,减轻了化疗药物带来的毒副作用,更少的使用药物,减少耐药性。使药物作用更有效地抑制肿瘤细胞。纳米药物载体的使用,结合化学疗法,放疗和成像技术等多种肿瘤治疗方法,以及多种抗癌合作方式,可以提高肿瘤组织的敏感性,并且药物的抗肿瘤作用是更有效地发挥作用。改善纳米药物载体的结构和功能,研究和开发具有更好生物相容性的纳米载体,进一步促进纳米药物载体的临床研究将成为未来的重要研究领域。
  参考文献:
  [1]Siegel RL,Miller KD,Jemal A. Cancer statistics,2018[J]. CA Cancer J Clin,2018,68(1):7-30.
  [2]Viale A, Draetta GF. Metabolic features of cancer treatment resist-ance [J]. Metabolism in Cancer,2016(207):135-156.
  [3]Wu G, Wilson G, George J, et al. Overcoming treatment resistancein cancer: Current understanding and tactics[J]. Cancer Letters,2017(387):69-76.
  [4]Gatenby R, Brown J. The evolution and ecology of resistance in cancer therapy[J]. Cold Spring Harbor Perspectives in Medicine,2018,8(3):a033415.
  [5]Cagel M,Grotz E,Bernabeu E,et al. Doxorubicin: nanotechnological overviews from bench to bedside[J]. Drug Discov Today,2017,22(2):270-281.
  [6]PARK J H, LEE S, KIM J H, et al. Polymeric nanomedicine for cancer therapy[J]. Prog. Polym. Sci., 2008,33(1):113-137.
  [7]谭桂珍,徐勤飞,王兵毅,等.纳米粒子在肿瘤成像及治疗中的研究进展[J].化学试剂,2016,38(4):291-296.
  [8]Patra J K, Das G, Fraceto L F, et al. Nano based drug delivery systems: Recent developments and future prospects[J]. Journal of Nanobiotechnology, 2018,16(1):71.
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