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制马钱子配伍赤芍桂枝汤的抗炎镇痛实验研究

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   【摘 要】目的:研究配伍赤芍桂枝汤对制马钱子在风湿病治疗中抗炎镇痛的影响。方法:将赤芍桂枝汤与不同比例的制马钱子相配伍后,进行小鼠的抗炎与镇痛实验。抗炎实验采用小鼠腹腔毛细血管通透性实验,通过测定各组吸光度值进行比较;镇痛实验采用热板法,通过末次给药后1 h和2 h分别测定各组小鼠痛阈值进行比较。结果:通过对毛细血管通透性的影响研究表明,13.41%马钱子组可以明显增强制马钱子的抗炎作用(P ﹤0.05),7.19%马钱子组与3.72%马钱子组有增强马钱子抗炎作用的趋势(P > 0.05)。镇痛实验中,各配伍组与制马钱子组相比,都可以提高其痛阈,但差异无统计学意义(P > 0.05)。结论:配伍赤芍桂枝汤不能明显增强制马钱子的鎮痛作用,仅13.41%马钱子组能明显增强制马钱子的抗炎作用。
   【关键词】 赤芍桂枝汤;制马钱子;风湿病;抗炎;镇痛;实验研究
   【ABSTRACT】Objective:To study the anti-inflammatory and analgesic effects of Semen Strychni Praeparata combined with Chishao Guizhi Tang(赤芍桂枝汤)in the treatment of rheumatism.Methods:The anti-inflammatory and analgesic experiments of mice were carried out after the mixture of Chishao Guizhi Tang and strychnine in different proportion.In the anti-inflammatory experiment,the permeability of capillaries in the abdominal cavity of mice was tested,and the absorbance values of each group were compared.In the analgesic experiment,the hot plate method was used,and the pain thresholds of each group were measured at 1 h and 2 h after the last administration.Results:Study on the capillary permeability showed that 13.41% of Semen Strychni Praeparata could significantly enhance the anti-inflammatory effect,7.19% and 3.72% of Semen Strychni Praeparata could enhance the anti-inflammatory effect,but the difference was not statistically significant(P > 0.05).In the analgesic experiment,the pain threshold of each compatibility group was higher than that of the Semen Strychni Praeparata group,but the difference was not statistically significant(P > 0.05).Conclusion:Semen Strychni Praeparata can not significantly enhance the analgesic effect after compatibility,only 13.41% of Semen Strychni Praeparata can significantly enhance the anti-inflammatory effect.
   【Keywords】 Chishao Guizhi Tang(赤芍桂枝汤);Semen Strychni Praeparata;rheumatism;anti-inflammation;analgesia;experimental study
   马钱子[1]药性猛烈,走窜力强,具有较强的抗炎镇痛效果,临床上用于治疗风湿顽痹效果显著。本课题组前期实验证实,配伍赤芍桂枝汤能够减轻制马钱子的毒性[2-3]。因此,本次实验通过研究配伍赤芍桂枝汤对制马钱子抗炎与镇痛作用的影响,为临床更安全合理有效地运用制马钱子提供实验依据。
  1 实验材料
  1.1 药 品
  1.1.1 制马钱子粉 实验所用马钱子药材统一购于河南省药材公司,按照《中华人民共和国药典》2010版一部马钱子项下规定的砂烫法炮制成制马钱子,粉碎10 min,过200目筛;制马钱子用高效液相色谱仪测得士的宁含量为14.43 mg·g-1,马钱子碱4.79 mg·g-1[4-9]。
  1.1.2 赤芍桂枝汤浸膏粉末 药物饮片统一由河南风湿病医院提供,赤芍桂枝汤组成:桂枝9 g、赤芍9 g、甘草6 g、生姜9 g、大枣9 g。将以上药物按比例放入煎药机中,加10倍量水,煎煮1 h,浓缩后干燥粉碎即得,后过200目筛,1 g干浸膏粉相当于原生药5.9 g。水浴灭菌30 min,低温冷藏,实验时与制马钱子按配伍比例制成混悬液。
   以上药物均由河南风湿病医院提供,由河南中医药大学药学院刘雅敏统一制备,打粉,干燥,密闭使用。另外考虑样品制备损耗等因素,按1 g干浸膏相当于原生药6 g计算。   1.1.3 制马钱子与赤芍桂枝汤配伍比例 本实验所选取的制马钱子与赤芍桂枝汤配伍比例依据是娄多峰教授和娄玉钤教授在长期的临床实践中总结出的用药经验,在临床中业已使用并证明有效。3个剂量组分别为13.41%马钱子组(马钱子占赤芍桂枝汤与制马钱子混合物的百分比为13.41%)、7.19%马钱子组、3.72%马钱子组。
  1.2 动 物 选取SPF级昆明小白鼠180只,体质量18~22 g,雌雄兼用,购自河南省实验动物中心,实验动物许可证号SCXK(豫)2012-0002。动物质量合格证号:No.41003100000519,No.41003100000600,No.41003100000619,No.41003100000626,No.41003100000638,No.41003100000659。統一在河南省药检所动物实验中心饲养并实验,条形饲料,每笼5只,单笼喂养,自由饮水。实验室温度(23.0±2.0)℃,湿度50%~65%。
  2 方 法
   抗炎(毛细血管通透性实验)与镇痛(热板法)实验,分别独立进行。制马钱子最小100%死亡量(Dm)为450 mg·kg-1,最大0不死量(Dn)为200 mg·kg-1。
  2.1 抗炎实验
  2.1.1 实验分组 SPF级昆明小白鼠90只随机分为空白对照组、阳性对照组、制马钱子组、13.41%马钱子组、7.19%马钱子组、3.72%马钱子组,每组15只。
  2.1.2 给药方法 空白对照组给予蒸馏水,阳性对照组给予布洛芬缓释胶囊,制马钱子组及其余3组按照比例各自配成混悬液(按临床用量的换算值,临床应用马钱子粉入丸散剂为0.3~0.6 g,20 g小鼠与70 kg成人的比例为1∶387.9,按最小量0.3 g给药,得出小鼠的临床用药为38.67 mg·kg-1,其余各配伍组按制马钱子的比例确定给药剂量)。给药量按每10 g体质量给药0.3 mL,连续灌胃5 d,每日1次,统一每日上午8:00~9:00定时给药。
  2.1.3 实验操作 第5天灌胃给药30 min后,将质量分数为0.5%的依文思兰溶液0.1 mL·(10 g)-1注射至小鼠尾静脉,然后将质量分数为0.6%的冰醋酸溶液0.1 mL·(10 g)-1注射至小鼠腹腔,20 min后脱颈椎处死;将5 mL生理盐水注射至腹腔后,轻揉小鼠腹部,使腹腔内染料充分溶于生理盐水中,并混合均匀;轻轻剪开小鼠腹部肌肉,用吸管吸出小鼠腹部洗涤液4 mL,加生理盐水稀释至10 mL,放至离心机,以3000 r·min-1离心15 min,离心半径15 cm;取上清液在紫外分光光度计上595 nm比色测定各吸光度。
  2.2 镇痛实验
  2.2.1 实验分组 将YLS-6A型热板测痛仪,自动控温在(55±0.5)℃,将雌性小鼠置于恒温盒内,按小鼠舔后足或者跳跃的时间长度测定痛阈值,选取痛阈值在5~30 s的雌性小鼠90只。随机分为空白对照组、阳性对照组、制马钱子组、13.41%马钱子组、7.19%马钱子组、3.72%马钱子组,每组15只。
  2.2.2 给药方法 同2.1.2。
  2.2.3 实验操作 于第5天末次灌胃给药1 h、2 h后,测定痛阈值。
  2.3 统计学方法 采用SPSS 18.0软件进行统计分析。多组间比较采用单因素方差分析,组间两两比较采用LSD分析,方差不齐时采用Dunnett's方法分析。以P < 0.05为差异有统计学意义。
  3 结 果
  3.1 各组抗炎作用比较 吸光度表示液体的浑浊度,吸光度越大表示越浑浊,抗炎能力越小。本次实验过程中由于小鼠尾静脉注射难度较大,后又经取舍各组均留10只小鼠作为统计。与空白对照组比较,除制马钱子组外,制马钱子各配伍组均能降低小鼠的毛细血管的吸光度,但效果都不及阳性对照组。与制马钱子组比较,只有13.41%马钱子组能显著降低小鼠的毛细血管的吸光度,差异有统计学意义(P < 0.05);各配伍组组间比较,小鼠的毛细血管吸光度随马钱子占比增多而降低,但差异无统计学意义(P > 0.05)。见表1。
  3.2 各组镇痛作用比较 与空白对照组比较,13.41%马钱子组在给药1 h后能显著提高小鼠的痛阈,差异有统计学意义(P < 0.05);7.19%马钱子组与3.72%马钱子组在给药2 h后比较,差异有统计学意义(P < 0.05)。各配伍组与制马钱子组比较,都有提高其痛阈的趋势,但差异无统计学意义(P > 0.05)。见表2。
  4 讨 论
   桂枝汤是《伤寒论》群方之首,由桂枝、芍药、甘草、生姜、大枣组成,功效是解肌发表,调和营卫。关于桂枝汤之芍药,历代医家众说纷纭。赤芍、白芍始分于梁代,多数医家认为“白补而赤泻、白收而赤散”[10];西医学研究发现,小鼠腹腔注射赤芍提取物芍药苷1 g·kg-1,能减少自发活动,赤芍乙醇浸膏可抑制士的宁引起的小鼠痉挛[11-13];赤芍中赤芍总苷[14]能显著增加小鼠耳廓毛细血管开放量,其中7.5 mg·kg-1,25 mg·kg-1作用比较明显。乐娜等[15]研究表明,赤芍对急性血瘀证大鼠血液流变学的作用优于白芍,这与其芍药苷含量较多,而芍药苷有较强改善血液流变学异常和保护血管内皮功能作用有关。贾敏等[16]指出,赤芍总苷在10-4~10-3 g·L-1剂量区间范围内对用K+、PE及5-HT预收缩的血管均有显著舒张作用,而白芍总苷的舒血管作用不明显。
   从本次实验结果来看,抗炎实验中,13.41%马钱子组能明显增强制马钱子的抗炎作用,7.19%马钱子组与3.72%马钱子组有增强马钱子抗炎作用的趋势,但差异无统计学意义(P > 0.05)。镇痛实验中,各配伍组与制马钱子组比较,都有提高痛阈的趋势,但差异无统计学意义(P > 0.05)。娄多峰教授和娄玉钤教授致力于风湿病的治疗与研究,临床上,用桂枝汤与制马钱子配伍治疗风湿病取得较好的效果。因此,本课题组围绕制马钱子与桂枝汤加减进行一系列实验,本实验结果证实制马钱子与不同比例的赤芍桂枝汤配伍能不同程度地增强其抗炎与镇痛作用,为临床更好地运用制马钱子与赤芍桂枝汤配伍提供了实验依据,但其中的作用机制还需进一步更深层次的研究。   参考文献
  [1] 白明,刘雅敏,娄玉钤.制马钱子粉急性毒性试验研究[J].风湿病与关节炎,2012,1(1):41.
  [2] 王淑静,娄玉钤.配伍对马钱子的减毒增效研究概述[J].风湿病与关节炎,2014,3(2):78-80.
  [3] 王淑静.桂枝汤对马钱子减毒及抗炎镇痛作用影响的实验研究[D].郑州:河南中医学院,2015.
  [4] 李朝阳,娄玉钤,苗根旺,等.配伍肉桂、桂枝对马钱子毒性影响的实验研究[J].风湿病与关节炎,2012,1(6):28-30.
  [5] 苗根旺,娄玉钤,李朝阳,等.配伍生地黄、熟地黄对制马钱子毒性影响的实验研究[J].风湿病与关节炎,2012,1(5):19-22.
  [6] 娄玉钤,成广超,李朝阳,等.配伍甘草对制马钱子毒性影响的实验研究[J].风湿病与关节炎,2012,1(2):40-42,50.
  [7] 李朝阳,邱海彦,娄玉钤,等.配伍肉桂、桂枝对制马钱子抗炎镇痛影响的实验研究[J].风湿病与关节炎,2013,2(5):17-20.
  [8] 苗根旺,娄玉钤,李朝阳,等.配伍生地黄、熟地黄对制马钱子抗炎、镇痛影响的实验研究[J].风湿病与关节炎,2013,2(3):21-24.
  [9] 李朝阳.马钱子在治疗风湿病中的配伍减毒与增效研究[D].郑州:河南中医学院,2012.
  [10] 裴艳霞.略谈赤芍白芍的异同点[J].光明中医,2011,26(9):1934.
  [11] 菅谷爱子.芍药的药理及药效[J].国外医学中医中药分册,1992,14(5):271.
  [12] 张艳,明亮,王翰,等.白芍总苷的抗惊厥作用[J].中国药理学通报,1994,10(5):372-374.
  [13] 傅立海,张继训,李利.赤芍及其有效部位的研究进展[J].安徽医药,2002,6(2):62-63.
  [14] 刘超,王静,杨軍,等.赤芍总苷活血化瘀作用的研究[J].中药材,2000,23(9):447-560.
  [15] 乐娜,周雪,费文婷,等.赤芍、白芍及芍药苷、芍药内酯苷对急性血瘀证大鼠血液流变学及血管内皮功能的影响[J].环球中医药,2019,12(9):1302-1307.
  [16] 贾敏,秦巧红,陈玉龙,等.白芍总苷与赤芍总苷舒血管作用的比较及其物质基础研究[J].中药药理与临床,2018,34(5):69-74.
  收稿日期:2020-01-20;修回日期:2020-03-10
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