滁菊农药的使用情况及农药残留检测方法研究

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　　摘 要：随着中医药的发展，滁菊的需求量逐年增加;滁州市滁菊生产基地的种植面积也不断增加，滁菊的安全生产也成为了重中之重。因此，建立一种准确测定滁菊中多种类型农药残留的分析方法，对滁菊中的农药残留进行有效的监控，并对滁菊中农药残留进行风险评估非常重要。
　　关键词：滁菊;农药残留;检测
　　中图分类号：S-3
　　 文献标识码：A
　　
　　滁菊是中国4大药菊之首，属于药、茶两用的佳品，主要产于安徽省滁州市南谯区和全椒县，随着中医药的发展，滁菊的需求量逐年增加;滁州市滁菊生产基地的种植面积也不断增加，滁菊的安全生产也成为了重中之重。
　　在滁菊的种植过程中，常见病害有褐斑病、花叶病、叶枯病、根腐病等，常见虫害有蚜虫、菊天牛、叶螨、小地老虎、夜蛾等。为了应对病虫害，种植者使用农药进行防治保证其产量，所以合理科学用药非常重要。如果出现农药残留情况，不仅影响滁菊的品质，菊花的饮用者也会出现蓄积中毒风险。根据调研，滁菊种植过程中使用的农药种类很多，包括有机磷类、有机氯类、菊酯類、氨基甲酸酯类及烟碱类等所有农药种类。因此选用具有代表性的农药品种进行检测，包括一些高毒禁用或限用农药品种，代谢缓慢半衰期较长的农药品种，检出率较高的农药品种等。
　　1 目标检测农药的选取
　　本研究整理出合适LC-MS/MS检测的10种农药作为目标检测物。
　　2 设备和材料
　　仪器包括三重四级杆液质联用仪TQ（美国WATERS公司）;高速离心机;涡旋混合仪;高速均质器（德国IKA）;超声波清洗器;旋转蒸发仪;氮吹仪;电子天平;多功能破壁机等。
　　试剂包括乙腈、甲醇、甲酸，均为色谱级（美国TEDIA公司），无水乙酸钠、无水硫酸镁、氯化钠、PSA、C18、GCB、娃哈哈纯净水等。
　　
　　农药标准品为天津农业环境保护研究所购买，纯度不低于98%。
　　样品所用滁菊取自滁州市全椒县滁菊种植基地。将采集的样品粉碎、混匀，密封后做好标记，在-18℃条件下保存。
　　3 前处理实验过程
　　分别取农药标准品，置于50.00mL容量瓶中，加甲醇定容至刻度，制成浓度为200.0μg/mL的标准品储备液。分别取10种农药的单个标准储备液于容量瓶中，用甲醇定容至刻度，制成浓度为20.0μg/mL混合标准溶液。为了减少样品基质效应对分析物检测产生的影响，用空白样品基质提取液加入一定量的标准混合液制成不同浓度的基质混合标准工作溶液。
　　准确称取10g均质样品于50mL离心管中，加入4颗玻璃弹珠和15mL 1%乙酸的乙腈溶液，涡旋振荡提取2min;将其放入-20℃冰箱中冷藏10min（根据室内温度决定）;从冰箱中取出后，加入1g无水乙酸钠加4g无水硫酸镁的混合萃取填料，迅速手摇震荡30s至充分混匀;然后3800r/min离心3min，待净化;将样品进行净化，每毫升提取液的净化填料分别为PSA 50mg，C18 50mg，GCB 5mg，MgSO4 150mg;准确吸取6mL上清液至纯化管中，涡旋30s，3800r/min离心3min后，分别各吸取1.5mL至玻璃试管中，55℃水浴氮吹至近干，待定容;分别用1mL甲醇或者1mL正己烷加丙酮（9+1）溶解玻璃试管中的残渣，分别过亲水性0.22μm PTFE滤膜后，待UPLC-MS/MS进行分析。
　　4 UPLC-MS/MS上机过程
　　色谱柱：ACQUITY UPLC HSS（2.1mm×100mm，1.8um）;柱温：40℃;进样量：1μL;流动相：A-0.1%甲酸水，B-100%甲醇。梯度洗脱条件如表2。离子源：ESI;多反应监测（MRM）;电喷雾电压：3000V;雾化器流速：900L/h;辅助气流速：150L/h;离子源温度：400℃。
　　5 方法论证
　　UPLC-MS/MS将基质样品通过QuEChERS法处理后得到的溶液配制成不同质量浓度的标准溶液，选择5个浓度点：5μg/kg、10μg/kg、25μg/kg、50μg/kg、100μg/kg，在优化的色谱质谱条件下分析检测，以色谱峰的峰面积为Y轴，以标准品的质量浓度为X轴，绘制标准曲线，并计算线性相关系数。结果在滁菊基质中，线性相关系数均大于0.990，说明线性关系良好。以信噪比（S/N）约为3时的空白样品的添加浓度为方法的检出限（LOD）;以信噪比（S/N）约为10时的添加水平为方法的定量限（LOQ），滁菊基质的检出限（LOD）为0.12～2.77μg/kg;定量限（LOQ）为0.40～9.52μg/kg，符合农药残留的检测要求;质谱分参数如表3。
　　用添加回收率实验验证该检测方法的准确度和精密度，在滁菊样品中添加3个不同浓度水平（10μg/kg、50μg/kg、100μg/kg）农药的混合标准溶液，样品经QuEChERS法处理后，在UPLC-MS/MS进行上机检测，每个水平实验反复6次。结果显示，滁菊基质中农药的平均添加回收率范围在75.5%～115.5%，相对标准偏差RSD在1.5%～10.5%，能够满足实际检测的需求。
　　6 总结
　　通过建立滁菊中农药多残留检测分析的UPLC-MS/MS的检测方法，该方法采用乙腈提取，QuEChERS前处理提取净化，此方法操作非常简单，分析速度迅速，灵敏度好，准确度好。通过一系列论证表明该方法完全可以对滁菊中多种农药残留进行准确的定性和定量检测分析，可用于实际样品的农药残留检测工作。
　　参考文献
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　　（责任编辑 贾灿）
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