关苍术组培快繁技术研究进展

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　　【摘   要】 该试验以关苍术带芽茎段为外植体进行组培繁殖，以提高关苍术苗木的繁殖速度，结果得出：关苍术带芽茎段经过消毒清洗后切割接种到MS+6-BA 0.5 mg/L+IBA 0.5 mg/L+GA3 0.5 mg/L培养基上，产生的不定芽数量最多且质量最佳;不定芽分化茎段后切断转接到MS+KT 0.5 mg/L +NAA 0.4 mg/L配方中增殖效果最佳;生根培养基选用1/2 MS+NAA 0.5 mg/L+活性炭3 g/L配方，生根效果最佳。
　　【关键词】 关苍术;初代培养;继代培养;生根培养
　　中图分类号：[R282.2]             文献识别码：A               文章编号：2096-1073（2020）10-0030-31
　　[Abstract]  In this experiment， tissue culture and propagation were carried out with rhizoma Attica with bud stem segment as explants to improve the propagation speed of seedlings. The results showed that after disinfection and cleaning， the bud stem segment with rhizoma attica was cut and inoculated into MS+6-BA 0.5mg /L+IBA 0.5mg /L+GA3 0.5mg /L， and the number of adventites was the highest and the quality was the best. Adventitious bud differentiation stem segment was cut off and transferred to MS+KT 0.5mg /L +NAA 0.4mg /L formula. 1/2 MS+NAA 0.5 mg/L+ activated carbon 3 g/L was used as rooting medium， and the rooting effect was the best.
　　[Key words] atractylodes rhizome; primary culture; subculture; take root culture
　　关苍术，学名（Atractylodes japonica Koidz. ex Kitam.），是一种珍贵的中药材，具有重要中药药理作用，主要入药部分为根茎，味道苦、辛，其性温，多用于治疗风湿病等。现在市面上关苍术的资源短缺，而市场需求量又比较大，普通人工种植供应不上市场的需要，所以尝试采用组织培养拟缓解这个问题。该试验以关苍术带芽茎段为外植体，在培养过程中设置了不同的初代培养基配方、继代培养基配方和生根培养基配方，通过比较各阶段最佳的培养方式，以得出关苍术最佳的组培方案。
　　1  材料与方法
　　1.1  试验材料
　　关苍术外植体选用带芽茎段，采自于吉林农业科技学院北校区药植园;实验所用的仪器、用具、药品等均由吉林农业科技学院中药学院组培实验室提供。
　　1.2  试验方法
　　1.2.1 培养基配方  初代培养基配方采用4個配比，分别记作：A1： MS+6-BA 1.0 mg/L+NAA 0.2 mg/L;A2：MS+6-BA 1.0 mg/L+NAA 0.5 mg/L，A3：MS+6-BA 0.5 mg/L+IBA 0.2 mg/L，A4：MS+6-BA 0.5 mg/L+IBA 0.5 mg/L，每个配比中均添加GA3 0.5 mg/L。
　　继代培养基配方采用7个配比，分别记作：B1：MS+KT 0.5 mg/L，B2：MS+KT 0.5 mg/L +IBA 0.2 mg/L，B3：MS+KT 0.5 mg/L+IBA 0.4 mg/L， B4：MS+KT 0.5 mg/L +IAA 0.6 mg/L， B5：MS+KT 0.5 mg/L+NAA 0.2 mg/L，B6：MS+KT 0.5 mg/L +NAA 0.4 mg/L， B7：MS+KT 0.5 mg/L+NAA 0.6 mg/L。
　　生根培养基配方采用3个配比，分别记作：C1：1/2 MS+活性炭3 g/L+NAA 0.5 mg/L，C2：1/2MS+活性炭3 g/L+NAA 0.8 mg/L，C3：1/2MS+活性炭3 g/L+NAA 1.0 mg/L。
　　1.2.2 培养过程  采集的带芽茎段切成2-3 cm长，分别采用0.1%升汞消毒5 min 和0.5%的84消毒液消毒30min后，在超净台内将茎段上的芽切下，切割成0.5cm大小，保留生长点，接种到初代培养基上，每瓶接种1个外植体，每个配比接种50瓶，接种后定期观察芽的分化情况，记录愈伤组织出现时间，统计出现愈伤组织的瓶数，愈伤组织上出现不定芽的时间及数量，计算平均形成芽的数量;待芽分化茎长成3-4cm时切断，每段1cm，转接到继代培养基上，每瓶接5段，每个配比接种20瓶;拟经过3次继代后，同样将茎段切成1cm转入生根培养基上，每瓶接入5个小段，每个配比接种50瓶。培养期间温度控制在25℃，光照度在2000-3000 LX，光照时间12h/d，培养室湿度85%。
　　2  结果与分析 　　2.1  不同初代培养基上诱导情况
　　由表1可见，4种配比都出现一定量的愈伤组织，诱导率最大的是A4，诱导出现时间最早的是A3，说明IBA的添加量对愈伤组织的分化有一定影响，添加适量有利于愈伤组织形成，添加少量则不利于形成。比较6-BA与NAA组合，发现诱导时间长诱导率都过低，综合比较A4的配比最合适。
　　2.2  不同增殖培养基上增殖情况
　　由表2可以看出7个配方均有一定的增值，B5、B6、B7的增值倍数明显大于B1、B2、B3、B4，苗高高于4 cm的有B1、B5、B6，但从增值情况来看，B6增殖效果最好。在继代培养基中添加GA3的主要目的是为了减少玻璃化现象，通过比较，B5、B6、B7的玻璃化比率相对较高，均超过了20%，说明配方中添加NAA虽然有利于增值但容易产生玻璃化。
　　2.3  不同生根培养基上生根情况
　　由表3得出，C1、C2生根率较高，说明1/2 MS配方中添加NAA浓度低更有利于生根。比较C1、C2生根率，分别为100%和97%，但C1根系粗壮，平均根数最多，所以，得出C1（1/2 MS+NAA 0.5 mg/L）最适合作为生根培养基。
　　3  结论与讨论
　　该试验得出关苍术带芽茎段经过升汞和84消毒液轮流消毒后，在超净台下进行接种，将腋芽切割成0.5cm大小，接种到MS+6-BA 0.5 mg/L+IBA 0.5 mg/L+GA3 0.5 mg/L诱导培养基上效果最好，继代培养基采用MS+KT 0.5 mg/L +NAA 0.4 mg/L增殖效果最好，生根培养基选用1/2 MS+NAA 0.5 mg/L效果最好。本試验也得出在继代培养基中添加NAA虽然有利于增值但容易产生玻璃化，所以关于如何降低玻璃化现象的发生还有待于进一步研究，另关于关苍术试管苗的出瓶移栽也有待于比较。
　　参考文献：
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　　[2] 蔡 柯，贾 昊，姜茹桐，等. 笃斯越桔腋芽初代培养技术研究           [J]. 现代农业研究， 2018（5）：3-3.
　　[3] 建德锋，辛立红，马 爽，等. 金银忍冬腋芽离体培养技术研究       [J]. 吉林农业科技学院学报， 2014（02）：16-18.
　　（编辑：李晓琳）
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