大叶冬青的黄酮类成分研究
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作者: 王存琴 王磊 李宝晶 范春林 黄晓君 叶文才
[摘要]采用多种色谱技术，从大叶冬青的叶中分离得到9 个化合物，通过IR，UV，MS，NMR 等波谱学方法鉴定了化合物的结构，分别为5-羟基-6，7，8，4′-四甲氧基黄酮（1），橘红素（2），川陈皮素（3），5-羟基-6，7，8，3′，4′-五甲氧基黄酮（4），5，6，7，8，4′-五甲氧基黄酮醇（5），5，6，7，8，3′，4′-六甲氧基黄酮醇（6），5-羟基-3′，4′，7-三甲氧基二氢黄酮（7），大豆脑苷Ⅰ（8）和大豆脑苷Ⅱ（9）。化合物1～9为首次从大叶冬青中分离得到。
[关键词]大叶冬青； 化学成分； 黄酮
[收稿日期]2013-09-05
[通信作者] 叶文才， Tel：（020）85220936， E-mail：chywc@ yahoo. com. cn
大叶冬青Ilex latifolia Thunb.，又名宽叶冬青，为冬青科Aqulfoliaceae冬青属Ilex常绿乔木，主要分布于浙江、福建、广西及海南等地[1]。大叶冬青是苦丁茶的主要来源之一，其叶可药用，具有散风热、清头目，除烦渴的功效，用于治疗口齿疼痛、目赤、热病烦渴及痢疾等症。现代药理学研究表明大叶冬青的水煎液具有降血脂、降血压、降血糖、抗生育、抗氧化、抗菌消炎等作用[2-6]。大叶冬青的化学成分也有报道，主要为三萜及其苷类、黄酮类和甾体类成分[7-11]。为了确定大叶冬青的活性成分，本课题组对其化学成分开展了进一步的研究。前文已报道了从大叶冬青干燥叶水提取物的75%乙醇部位中分离出的几种三萜类化合物的结构[11]，本文报道从大叶冬青干燥叶的水提取物中分离得到9 个黄酮类化合物，通过理化性质及各种波谱学方法鉴定这些化合物的结构，分别为5-羟基-6，7，8， 4′-四甲氧基黄酮（1），橘红素（2），川陈皮素（3），5-羟基-6，7，8，3′，4′-五甲氧基黄酮（4），5，6，7，8，4′-五甲氧基黄酮醇（5），5，6，7，8，3′，4′-六甲氧基黄酮醇（6），5-羟基-3′，4′，7-三甲氧基二氢黄酮（7），大豆脑苷Ⅰ（8）和大豆脑苷Ⅱ（9）。化合物1～9均为首次从该植物中分离得到。
1材料
X-5 型显微熔点测定仪（未校正）；Jasco V-550 UV-VIS光谱仪；Jasco FI/IR-480 plus infrared 红外光谱仪（ KBr压片）；Finnigan LCQ Advantage MAX 质谱仪；Bruker AV-400 型核磁共振仪；Dionex分析型高效液相色谱仪；VARIAN prostar 210 制备型高效液相色谱仪；柱色谱硅胶（青岛海洋化工厂）；Sephadex LH-20柱色谱凝胶（Pharmacia公司）；ODS 柱色谱填料（德国Merck公司）；所用试剂均为分析纯和色谱纯。
实验所用大叶冬青叶采自于海南省万宁市，经中国医学科学院药用植物研究所兴隆分所陈伟平教授鉴定为冬青科冬青属植物大叶冬青I. latifolia的叶。标本（No. 2008101601）保存于暨南大学中药及天然药物研究所。
2提取与分离
干燥的大叶冬青叶8 kg，粉碎成粗粉，加8倍量水煎煮3次，合并提取液，过滤，减压浓缩后静置过夜。将水总提液离心后取其上清液（相对密度约为1.05），经D101大孔吸附树脂，依次用水，30%，45%，75% ，95%乙醇梯度洗脱，其中75%乙醇洗脱部位回收后得浸膏685 g。取75%乙醇洗脱部位浸膏400 g，经硅胶柱色谱，用氯仿-甲醇梯度洗脱（100∶0～0∶100），得到9个流份（Fr. 1～ Fr. 9）。Fr. 1（11 g）经硅胶柱色谱（200～400目硅胶），以石油醚-乙酸乙酯（100∶2～0∶100）梯度洗脱，并经Sephadex LH-20 柱色谱，用氯仿-甲醇系统（50∶50）洗脱先后得到化合物1（5 mg），2（6 mg），3（6 mg），4（5 mg）。Fr. 2（7g） 经Sephadex LH-20柱色谱，以氯仿-甲醇（33∶67）洗脱，再经ODS柱色谱，用甲醇-水（50∶50～100∶0）梯度洗脱得化合物5（5 mg）， 6（5 mg）， 7（5 mg）。Fr. 3（1 g） 经Sephadex LH-20柱色谱，以甲醇洗脱，再经制备型HPLC以甲醇-水（75∶25）洗脱，得化合物8（5 mg），9（6 mg）。
3结构鉴定
化合物1黄色粉末（甲醇），ESI-MS m/z 359[M+H]+。UV（CHCl3）nm：290， 330。IR（KBr）cm-1：3 445，1 604，1 375，1 264。1H-NMR（DMSO-d6，400 MHz）δ：11.92（1H，s，5-OH），7.25（2H，d，J=8.8 Hz，H-2′，6′），6.35（2H，d，J=8.8 Hz，H-3′，5′），6.17（1H，s，H-3），3.22（3H，s，6-OCH3），3.12（3H，s，7-OCH3），3.06（3H，s，8-OCH3），3.02（3H，s，4′-OCH3）； 13C-NMR（DMSO-d6，100 MHz）δ：183.0（C-4），164.2（C-2），163.0（C-4′），152.9（C-7），148.9（C-5），145.7（C-9），136.3（C-6），133.1（C-8），128.7（C-2′，6′），123.2（C-1′），115.2（C-3′，5′），106.7（C-10），103.8（C-3），62.3，61.9，61.0，56.0（-OMe×4）。以上数据与文献[12]报道一致，鉴定化合物1为5-羟基-6，7，8，4′-四甲氧基黄酮（5-hydroxy-6，7，8，4′-tetramethoxyflavone）。 化合物2黄色粉末（甲醇），ESI-MS m/z 395[M+Na]+。UV（CHCl3）nm：272，324。IR（KBr）cm-1：2 946，1 648，1 510，1 461，1 361，1 261。1H-NMR（CDCl3，400 MHz）δ：7.87（2H，d，J=9.0 Hz，H-2′，6′），7.01（2H，d，J=9.0 Hz，H-3′，5′），6.60（1H，s，H-3），4.09（3H，s，5-OCH3），4.01（3H，s，6-OCH3），3.94（3H，s，7-OCH3），3.94（3H，s，8-OCH3），3.88（3H，s，4′-OCH3）； 13C-NMR（CDCl3，100 MHz）δ：177.7（C-4），162.7（C-2），161.6（C-4′），151.8（C-7），148.8（C-8），148.2（C-9），144.5（C-5）， 138.5（C-6），128.2（C-2′，6′），124.3（C-1′），115.3（C-10），115.0（C-3′，5′），107.1（C-3），62.7，62.5，62.3，62.1，55.9（-OMe×5）。以上数据与文献报道一致[13]，鉴定化合物2为桔皮素或橘红素（tangeretin） 。
化合物3黄色粉末（甲醇），ESI-MS m/z 425[M+Na]+。UV（CHCl3）nm：272，334。IR（KBr）cm-1：1 644，1 517，1 464，1 360，1 274。1H-NMR（CDCl3，400 MHz）δ：7.55（1H，dd，J=8.5，2.0 Hz，H-6′），7.40（1H，d，J=2.0 Hz，H-2′），6.98（1H，d，J=8.5 Hz，H-5′），6.60（1H，s，H-3），4.09（3H，s，5-OCH3），4.01（3H，s，6-OCH3），3.96（3H，s，7-OCH3），3.95（3H，s，8-OCH3），3.94（3H，s，3′-OCH3），3.93（3H，s，4′-OCH3）； 13C-NMR（CDCl3，100 MHz）δ：177.4（C-4），161.2（C-2），152.1（C-4′），151.5（C-7），149.4（C-3′），148.5（C-8），147.8（C-9），144.2（C-5），138.1（C-6），124.2（C-1′），119.7（C-6′），114.9（C-10），111.4（C-5′），108.7（C-2′），106.9（C-3），62.4，62.1，61.9，61.8，56.2，56.1（-OMe×6）。以上数据与文献报道一致[13]，鉴定化合物 3 为川陈皮素（nobiletin）。
化合物4黄色针晶（甲醇），mp 148～150 ℃，ESI-MS m/z 389[M+H]+。UV（CHCl3）nm：284，342。IR（KBr）cm-1：3 423，2 941，1 594，1 514，1 438，1 372，1 272。1H-NMR（CDCl3，400 MHz）δ：7.57（1H，dd，J=8.4，2.0 Hz，H-6′），7.41（1H，d，J=2.0 Hz，H-2′），6.99（1H，d，J=8.4 Hz，H-5′），6.59（1H，s，H-3），4.10（3H，s，6-OCH3），3.97（3H，s，7-OCH3），3.97（3H，s，8-OCH3），3.96（3H，s，3′-OCH3），3.95（3H，s，4′-OCH3）； 13C-NMR（CDCl3，100 MHz）δ：183.1（C-4），164.0（C-2），153.1（C-4′），152.6（C-7），149.5（C-9），149.7（C-3′），146.0（C-5），136.2（C-6），133.1（C-8），123.8（C-1′），120.2（C-6′），111.4（C-5′），108.9（C-2′），107.1（C-10），104.1（C-3），62.2，61.8，61.2，56.3，56.1（-OMe×5）。以上数据与文献报道一致[14]，鉴定化合物 4 为5-羟基-6，7，8，3′，4′-五甲氧基黄酮（5-hydroxy-6，7，8，3′，4′ -pentamethoxyflavone）。
化合物5黄色针晶（甲醇），mp 150～152 ℃，ESI-MS m/z 389[M+H]+。UV（CHCl3） nm：266，363。IR（KBr） cm-1：3 291，1 661，1 508，1 458，1 392，1 267。1H-NMR（CDCl3，400 MHz）δ：8.24（2H，d，J=9.2 Hz，H-2′，6′），7.05（2H，d，J=9.2 Hz，H-3′，5′），4.11（3H，s，5-OCH3），4.03（3H，s，6-OCH3），3.99（3H，s，7-OCH3），3.96（3H，s，8-OCH3），3.89（3H，s，4′-OCH3）； 13C-NMR（CDCl3，100 MHz）δ：171.9（C-4），160.9（C-4′），151.6（C-7），147.6（C-5），146.9（C-9），143.5（C-2），143.3（C-6），137.9（C-3），137.3（C-8），129.1（C-2′，6′），123.7（C-1′），111.8（C-10），114.2（C-3′，5′），62.3，62.0，61.8，61.7，55.4（-OMe×5）。以上数据与文献报道一致[12]，鉴定化合物5为5，6，7，8，4′-五甲氧基黄酮醇（5，6，7，8，4′-pentamethoxyflavonol）。 化合物6黄色针晶（甲醇），mp 146～148 ℃，ESI-MS m/z 419[M+H]+。UV（CHCl3） nm：261，375。IR（KBr）cm-1：3 299，2 928，1 597，1 513，1 272。1H-NMR（CDCl3，400 MHz）δ：7.92（1H，dd，J=8.4，2.5 Hz，H-6′），7.89（1H，d，J=2.5 Hz，H-2′），7.02（1H，d，J=8.4 Hz，H-5′），4.11（3H，s，5-OCH3），4.03（3H，s，6-OCH3），3.99（3H，s，7-OCH3），3.98（3H，s，8-OCH3），3.96（3H，s，3′-OCH3），3.95（3H，s，4′-OCH3）； 13C-NMR（CDCl3，100 MHz）δ：172.4（C-4），152.2（C-4′），151.0（C-7），149.4（C-3′），148.2（C-5），147.4（C-9），144.1（C-2），143.5（C-6），138.7（C-3），138.4（C-8），124.4（C-1′），121.6（C-6′），111.6（C-5′），112.2（C-10），110.7（C-2′），62.9，62.5，62.4，62.3，56.5，56.4（-OMe×6）。以上数据与文献报道一致[15]，鉴定化合物6为5，6，7，8，3′，4′-六甲氧基黄酮醇（5，6，7，8，3′，4′-hexamethoxyflavonol）。
化合物7无色针晶（氯仿），mp 150～152 ℃，ESI-MS m/z 331[M+H]+。UV（CHCl3） nm：239，288。IR（KBr） cm-1：3 470，1 642，1 516，1 366，1 261。1H-NMR（CDCl3，400 MHz）δ：7.00（1H，dd，J=8.8，2.5 Hz，H-6′），6.98（1H，d，J=2.5 Hz，H-2′），6.90（1H，d，J=8.8 Hz，H-5′），6.08（1H，d，J=2.2 Hz，H-8），6.06（1H，d，J=2.2 Hz，H-6），5.37（1H，dd，J=13.0，3.0 Hz，H-2），3.11（1H，dd，J=17.2，13.0 Hz，H-3a），2.81（1H，dd，J=17.2，3.0 Hz，H-3b），3.92（3H，s，7-OCH3），3.90（3H，s，3′-OCH3），3.81（3H，s，4′-OCH3）；13C-NMR（CDCl3，100 MHz）δ：196.4（C-4），168.7（C-7），164.7（C-5），163.4（C-9），150.1（C-4′），149.8（C-3′），131.3（C-1′），119.3（C-6′），111.7（C-2′），109.9（C-5′），103.6（C-10），95.6（C-6），94.8（C-8），79.7（C-2），56.2，56.5，56.5（-OMe×3），43.8（C-3）。以上数据与文献报道一致[16]，鉴定化合物 7 为5-羟基-3′，4′，7-三甲氧基二氢黄酮（5- hydroxy-3′，4′，7-trimethoxy-flavanone）。
化合物8白色无定形粉末（甲醇），ESI-MS m/z 736.9[M+Na]+。UV（CHCl3） nm：248，261。IR（KBr）cm-1：3 384，2 919，2 852，1 641，1 539，1 461，1 078，968。1H-NMR（C5D5N，400 MHz）δ：8.32（1H，d，J=8.8 Hz，NH ），5.92（ 1H，dt，J=15.5，5.8 Hz，H-5），5.97（ 1H，dd，J=15.5，5.4 Hz，H-4），5.49（2H，t，J=15.5，5.6 Hz，H-8，9），4.89（1H，d，J=7.6 Hz，H-1″），4.78（2H，m，H-2，3），4.74（1H，m，H-1a），4.68（1H，m，H-1b），4.56（1H，dd，J=7.7，3.6 Hz，H-2′），4.48（1H，d，J=11.5 Hz，H-6″a），4.32（1H，m，H-6″b），4.19（2H，m，H-3″，4″），4.00（1H，t，J=7.8 Hz，H-2″），3.88（1H，br s，H-5″），1.27（3H，br s），0.86-0.89（6H，m，H-18，16′）； 13C-NMR（C5D5N，100 MHz）δ：175.7（C-1′ ），132.1（C-5），131.9（C-4），131.1（C-9），129.9（C-8），105.5（C-1″），78.5（C-3″），78.4（C-5″），75.0（C-2″），72.5（C-2′），72.3（C-3），71.5（C-4″），70.0（C-1），62.6（C-6″），54.5（C-2），35.6（C-3′），32.9（C-6），32.8（C-7 ），32.7（C-10），25.8（C-4′），14.2（C-18，16′）。以上数据与文献报道一致[17]，鉴定化合物 8 为大豆脑苷Ⅰ（soyacerebrosideⅠ）。
化合物9白色无定形粉末（甲醇），ESI-MS m/z 736.8[M+Na]+。UV（CHCl3）nm：248，261。IR（KBr）cm-1：3 359，2 920，1 641，1 535，1 461，1 078，676。1H-NMR（C5D5N，400 MHz）δ：8.32（1H，d，J=8.8 Hz，NH ），5.92（1H，dt，J=15.5，5.8 Hz，H-5），5.97（ 1H，dd，J=15.5，5.4 Hz，H-4），5.47（2H，t，J=8.8，4.8 Hz，H-8，9）， 4.88（1H，d，J=7.6 Hz，H-1″），4.78（2H，m，H-2，3），4.75（1H，m，H-1a），4.67（1H，m，H-1b），4.56（1H，dd，J=7.8，3.5 Hz，H-2′），4.50（1H，d，J=11.5Hz，H-6″a），4.32（1H，m，H-6″b），4.19（2H，m，H-3″，4″），4.00（1H，t，J=7.8 Hz，H-2″），3.87（1H，br s，H-5″），1.26（3H，br s），0.86～0.89（6H，m，H-18，16′）； 13C-NMR（C5D5N，100 MHz）δ：175.7（C-1′），132.0（C-4），132.0（C-5），130.6（C-9），129.4（C-8），105.5（C-1″），78.5（C-3″），78.4（C-5″），75.0（C-2″），72.4（C-2′），72.3（C-3），71.4（C-4″），70.0（C-1），62.6（C-6″），54.6（C-2），35.6（C-3′），32.8（C-6），27.6（C-10），27.3（C-7），25.8（C-4′），14.2（C-18，16′）。以上数据与文献报道一致[18]，鉴定化合物9为大豆脑苷Ⅱ（soyacerebrosideⅡ）。 [参考文献]
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Chemical constituents from leaves of Ilex latifolia
WANG Cun-qin1，2， WANG Lei1， LI Bao-jing1， FAN Chun-lin1， HUANG Xiao-jun1， YE Wen-cai1*
（1.Institute of Traditional Chinese Medicine and Natural Products， Jinan University， Guangzhou 510632， China；
2.College of Pharmacy， Wannan Medical College， Wuhu 241000， China）
[Abstract]Nine compounds were isolated from the leaves of Ilex latifolia. Their structures were respectively identified as 5-hydroxy-6，7，8，4′-tetramethoxyflavone（1）， tangeretin（2）， nobiletin（3）， 5-hydroxy-6，7，8，3′，4′-pentamethoxyflavone（4）， 5，6，7，8，4′-pentamethoxyflavonol（5）， 5，6，7，8，3′，4′-hexamethoxy-flavonol（6）， 5-hydroxy-3′，4′，7-trimethoxyflavanone（7）， soyacerebrosideⅠ（8）， and soyacerebrosideⅡ（9） by their physicochemical properties and spectroscopic data. Compounds 1-9 were isolated from this plant for the first time.
[Key words]Ilex latifolia； chemical constituents； flavone
doi：10.4268/cjcmm20140219
[责任编辑孔晶晶]
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