HPLC法测定胃复春片中人参皂苷Rb1的含量
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作者: 张美娟
摘 要：目的 采用高效液相色谱法测定胃复春片中人参皂苷Rb1的含量。方法 采用YMC-Pack Polymer C18（250×4.6mm 5？滋m）色谱柱；乙腈-水-磷酸（20：80：0.01）为流动相；检测波长为203nm。结果 人参皂苷Rb1在1～20μg・mL-1范围内呈良好的线性关系， 人参皂苷Rb1的平均回收率为99.5%。结论 本方法是一种简便、准确、安全的测定胃复春片中人参皂苷Rb1含量的方法。
关键词：胃复春片；人参皂苷Rb1；高效液相色谱法
胃复春片由红参、香茶菜、枳壳（麸炒）组成。 胃复春片具有健脾益气、活血解毒等功效。胃复春片用于治疗胃癌、癌前期病变及胃癌手术后辅助治疗，慢性萎缩性胃炎、其它消化系统肿瘤的辅助治疗。胃复春片能减轻致癌物质N-甲基-N-硝基-N-亚硝基胍（MNNG）对大鼠胃粘膜的损害，降低胃癌癌前期病变的发病率。长期服用胃复春片可抑制幽门螺旋杆菌；抑制醋酸致小鼠扭体次数；增加大鼠胃液分泌量。红参是参的熟用品，具有大补元气、益血、养心安神、强心、健胃、镇静、复脉固脱、益气摄血等功效。红参具有提高脑、体力活动能力、抗疲劳、抗肿瘤、抗衰老、抗辐射等作用。红参可用于体虚欲脱、气短喘促、气不摄血、崩漏下血、心力衰竭、心原性休克自汗肢泠、精神倦怠、食少吐泻、气虚作喘或久咳等。人参皂苷具有抗肿瘤、抗衰老、抗氧化、抗病毒、美容等药理作用[1-8]。文章用高效液相色谱法对胃复春片中的人参皂苷Rb1的含量进行了测定。
1 仪器与试剂
QT3120K脱气可调型超声波清洗器（天津市瑞普电子仪器公司）；TH-W50GC多功能全自动纯水机（武汉市天虹仪表有限责任公司）；RV10 数显型立式旋转蒸发仪 （上海东戈姆科贸发展有限公司）；JULABO 实验室温度控制器（优莱博技术（北京）有限公司）；CC-100分析型色谱柱温箱（成都纳杰科技有限公司）； Smartline高效液相色谱系统（北京创新通恒科技有限公司）；AUX220 分析天平（上海东戈姆科贸发展有限公司）。
2 实验方法与结果
2.1 液相色谱条件
依据查阅文献[9-11]及考查的结果，确定色谱条件如下：色谱柱为YMC-Pack Polymer C18（250×4.6mm 5？滋m）；乙腈-水-磷酸（20：80：0.01）为流动相；检测波长为203nm；流速1.0mL・min-1；柱温：30℃。理论板数按人参皂苷Rb1峰计算应不得低于2000。
2.2 提取方法确定
取胃复春片，研碎，分成三份置索氏提取器中，分别加三氯甲烷20ml，加热回流3小时，弃去三氯甲烷液，药渣挥干溶剂，分别精密加入水饱和正丁醇50ml，密塞，放置2小时，分别超声处理30分钟、40分钟、50分钟，滤过，滤液置蒸发皿中蒸干，残渣加甲醇溶解并定容至5毫升，摇匀，微孔滤膜（0.45μm）滤过，即得。结果表明超声处理30分钟、40分钟、50分钟人参皂苷Rb1含量无明显差异，所以选择超声处理30分钟。
2.3 供试品溶液的制备
取胃复春片，研碎，置索氏提取器中，加三氯甲烷20ml，加热回流3小时，弃去三氯甲烷液，药渣挥干溶剂，精密加入水饱和正丁醇50ml，密塞，放置2小时，超声处理30分钟，滤过，滤液置蒸发皿中蒸干，残渣加甲醇溶解并定容至5毫升，摇匀，微孔滤膜（0.45μm）滤过，即得。
2.4 对照品溶液的制备
精密称取人参皂苷Rb1对照品约1mg，置100mL容量瓶中，用流动相超声波振荡溶解并稀释至刻度，摇匀，即得（每1mL溶液中含人参皂苷Rb1 10μg）。
2.5 阴性干扰试验
香茶菜、枳壳（麸炒）分别加水煎煮两次，香茶菜每次3小时，枳壳（麸炒）每次1小时，过滤，合并滤液，浓缩至相对密度1.13-1.18（20）的清膏，加淀粉、硬脂酸镁混合均匀，制粒，干燥，压片，即得阴性制剂。将阴性制剂研碎，置索氏提取器中，加三氯甲烷20ml，加热回流3小时，弃去三氯甲烷液，药渣挥干溶剂，精密加入水饱和正丁醇50ml，密塞，放置2小时，超声处理30分钟，滤过，滤液置蒸发皿中蒸干，残渣加甲醇溶解并定容至5毫升，摇匀，微孔滤膜（0.45μm）滤过，按色谱条件测定。结果表明：在选定条件下测得的阴性液吸收曲线在与人参皂苷Rb1相同保留时间处不存在吸收峰，说明此方法具有较强的专属性。
2.6 标准曲线的制备
制备浓度为1、2、4、8、12、16、20μg・mL-1的对照品溶液，分别精密吸取10μL注入液相色谱仪，记录色谱图。以峰面积积分值A为纵坐标，进样浓度（μg・mL-1）为横坐标，绘制标准曲线，计算回归方程。试验表明，人参皂苷Rb1对照品在1～20μg・mL-1范围内线性关系良好。
2.7 精密度试验
精密吸取人参皂苷Rb1对照品溶液10μL重复进样6次，测定峰面积积分值，对照品峰面积积分值的RSD为0.66%。结果表明，本实验精密度良好。
2.8 重现性试验
分别称取同批胃复春片样品6份，分别制备成供试品溶液，按色谱条件测定含量，并计算样品的RSD值为0.88%，结果表明，此含量测定方法的重现性良好。
2.9 稳定性试验
取供试品溶液，分别在0，2，4，8，10h精密吸取供试品溶液注入液相色谱仪，进行测定，供试品人参皂苷Rb1峰面积积分值的RSD为0.53%。结果表明人参皂苷Rb1至少在10h内稳定。
2.10 回收率试验
采用加样回收试验，取已知含量的同一批供试品各6份，精密称定，分精密添加一定量的人参皂苷Rb1对照品，按供试品制备所述方法制备供试品溶液，测定含量（同时测定样品含量），计算回收率。6次测定的平均回收率为99.5%，RSD为0.75%。 2.11 耐用性试验
用SPOLAR C18 HPLC Column（4.6×250mm 5μm）液相色谱柱、CAPCELL PAK C18 MGⅡ（4.6×250mm 5？滋m）液相色谱柱测定同一样品，峰形及柱效均良好，表明不同的色谱柱测定时，色谱行为无显著性差异。
2.12 样品含量测定
依照上述含量测定方法，测定胃复春片三批样品中人参皂苷Rb1的含量，结果三批样品的含量分别为0.27μg・片-1、0.29μg・片-1、0.28μg・片-1。
3 结束语
分别考察乙腈-水-磷酸（50：50：0.01），乙腈-水-磷酸（20：80：0.01），甲醇-乙腈-0.05%磷酸水溶液（15：25：60）不同比例的流动相，结果以乙腈-水-磷酸（20：80：0.01）为流动相，供试品各峰分离效果最好，故选用乙腈-水-磷酸（20：80：0.01）为流动相。本方法是一种简便、准确、安全的测定胃复春片含量的方法。胃复春片中人参皂苷Rb1的含量不少于0.26μg・片-1。
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