生活饮用水中菌落总数的测定分析
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作者: 王军 王先化
摘要：目的 探讨生活饮用水中菌落总数的测定方法。方法 用普通牛肉膏蛋白胨琼脂培养基在保证无菌的环境下，采取生活饮用水的样品，利用培养基制作平板。对生活饮用水用平板菌落技术测定菌落总数从而判断生活饮用水是否符合国家标准，是否受到污染。结果 生活饮用水中菌落平均数为35,在国家饮用水标准范围之内。结论 本实验的成败在于灭菌、无菌操作技术、培养基的温度等方面是否操作正确，因此接种过程务必防止杂菌的侵入。
关键词：生活饮用水；菌落总数
在饮用水处理中，出厂水加氯消毒后进人管网，部分存活的微生物和管网中生物膜中的微生物会利用管网水中的微量生物降解有机物进行再生长［1］。水质的好坏对人们生活起着至关重要的作用，而判断水质的标准，微生物在水中的数量、种类是必不可少的。生活饮用水的微生物学指标检验，在保证饮水安全和控制传染病上有着重要意义，同时也是评价水质状况的重要指标。我国生活饮用水卫生标准（GB 5749-2006）规定水样在牛肉膏蛋白胨琼脂培养基即营养琼脂上有氧条件下37℃培养48h后，所得1ml水样所含菌落的总数不得大于100。
长期以来，国内多采用异养菌平板计数法和最大或然数计数法来测定饮用水中的活菌数．但由于饮用水中的贫营养环境有别于传统培养基提供的富营养环境，大多数在显微镜下观察到的细菌不能在传统培养基中生长，致使活菌计数结果偏低．近些年来，国外先后应用吖啶橙染色直接计数、活菌直接计数等方法对饮用水中的菌落总数及活菌数进行快速、直接的镜检计数．一些新的染色方法，如采用5一氰基一2，3一联甲苯四唑盐酸盐、核酸探针等对活细菌计数，都取得了很好地效果，国内这方面的研究却未见报道。
因平板计数法相对简单，本实验即采用本方法，用普通牛肉膏蛋白胨琼脂培养基在保证无菌的环境下，采取生活饮用水的样品，利用培养基制作平板。
1资料与方法
1.1 本实验于在昌吉州疾控中心实验楼微生物实验室完成。`
1.2 材料
1.2.1实验材料生活饮用水
1.2.2实验试剂牛肉膏蛋白胨NaCl1mol/LNaOH1mol/LHCl 蒸馏水
1.2.3实验仪器高压蒸气灭菌锅培养皿三角烧瓶天平量筒玻璃棒电炉 药匙pH试纸（pH5.5-9.0） 温度计
1.3实验方法
1.3.1灭菌
1.3.1.1首先将内锅层取出,再向外锅内加入适量的水,使水面与三角搁架相平为宜。
1.3.1.2放回内锅层,并加入用报纸包好的培养皿、三角烧瓶、吸管。
1.3.1.3加盖，并将盖上的排气软管插入内层锅的排气槽内。再以两两对称的方式同时旋紧相对的两个螺旋，使螺旋松紧一致，勿使漏气。
1.3.1.4用电炉加热，并同时打开排气阀，使水沸腾以排除锅内的冷气。待冷空气完全排尽后，关上排气阀，让锅内的温度随蒸气压力增加而逐渐上升。当锅内压力上升到所需压力时，控制热源，维持压力至所需时间。本实验用0.1MPa,121℃,20min灭菌。
1.3.1.5灭菌时间到后，切断电源，让灭菌锅内温度自然下降，当压力表的压力降至"0"时打开排气阀，旋松螺旋，打开盖子，取出灭菌物品。
1.3.2水样的采取放开水龙头使水流5min后，用已灭菌的三角烧瓶接取水样，以待分析。
1.3.3制备牛肉膏蛋白胨培养基
1.3.3.1称量 按培养基配方依次准确的称取牛肉膏、蛋白胨、NaCl放入烧杯中。牛肉膏常用玻璃棒挑取，放在称量纸上，称量后直接放入水中，稍微加热，牛肉膏便会与称量纸分离，然后立即取出纸片。
1.3.3.2溶化 在上述烧杯中先加入少于所需要的水量，用玻璃棒搅匀，然后，在石棉网上加热使其溶解，将称好的琼脂放入已溶的药品中，再加热溶化，最后补足所损失的水分。
1.3.3.3调pH 在未调pH前，先用精密pH试纸测量培养基的原始pH，如果偏酸，用滴管向培养基中逐滴加入1mol/LNaOH，边加边搅拌，并随时用pH试纸测其pH，直至pH达7.6。反之，用1mol/L HCl进行调节。
1.3.4菌落总数测定
1.3.4.1灭菌吸管吸取1mL水样，注入其中一套灭菌的培养皿中。共做两个平皿。
1.3.4.2分别倾注溶化并冷却到45℃左右的肉膏蛋白胨琼脂培养基，培养基的量为培养基高度的1/3,并立即在桌上作平面旋摇，使生活饮用水和培养基混匀。
1.3.4.3另取一空的灭菌培养皿，倾注肉膏蛋白胨琼脂培养基，培养基的量为培养基高度的1/3,作空白对照。
1.3.4.4待培养基凝固后，倒置于37℃温箱中，培养48h，进行菌落计数。两个平板的平均菌落数即为1mL生活饮用水的菌落总数。
2结果
见表1。
生活饮用水中细菌总为（83+75）/2-44=35；实验中对照组的菌落数为44，可见培养基和培养过程中造成了杂菌污染。处理上表中数据知，该生活饮用水中细菌平均数为35,在国家饮用水标准范围之内。
3讨论
在本实验中的空白对照培养基上长了细菌菌落，说明此培养基被污染了，杂菌来源可能是由于培养皿、三角烧瓶、吸管等仪器灭菌不充分；灭菌后在空气中放置又落入杂菌；配置培养基时反复升降温，使一些杂菌产生抗性等。因此，在制作培养基及培养的过程中要严格杀菌，并严格按照实验步骤认真操作，从而使得结果更加精确。
由于水中细菌种类繁多，它们对营养和其他生长条件的要求差别很大，不可能找到一种培养基在一种条件下，使水中所有的细菌均能生长繁殖，因此，以某种培养基平板升生长出来的水中菌落总数仅是近似值。
本实验的成败在于灭菌、无菌操作技术、培养基的温度等方面是否操作正确，因此接种过程务必防止杂菌的侵入。
参考文献：
［1］沈萍，范秀容，等.微生物学实验（第四版）.北京：高等教育出版社，2007 .
编辑/许言
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