黑枸杞水提物对急性酒精性肝损伤的保护作用研究

来源:用户上传      作者: 张宁 陈静

　　[摘 要]目的：观察不同剂量黑枸杞水提物对小鼠急性酒精性肝损伤模型的血清ALT、AST含量和肝组织超氧化物歧化酶（SOD）、丙二醛（MDA）含量的影响。方法：取小鼠60只，随机分为正常组、模型组、阳性组、黑枸杞给药组（LL、LM、LH）。除正常组外，其余各组上午9点给予56°白酒15ml/kg灌胃，连续7天构建急性酒精性肝损伤模型，正常组给予等量生理盐水。造模成功后，每天下午3点各给药组灌胃给药，连续7天。末次给药12h后处死，检测ALT、AST和SOD、MDA含量。结果：阳性组和黑枸杞给药组小鼠血清ALT、AST和肝组织MDA含量均显著低于模型组，且LM、LH组显著低于阳性组，肝组织SOD含量显著高于模型组，且LL、LM、LH显著高于阳性对照组。结论：黑枸杞水提物在一定程度上可保护小鼠肝脏，减轻急性酒精性肝损伤，且随着剂量的增加，其作用优于阳性药物。
　　[关键词]黑枸杞；酒精性肝损伤；清除自由基；抗氧化
　　中图分类号：R285 文献标识码：A 文章编号：1009-914X（2016）18-0353-02
　　统计显示，我国饮用酒精消耗量呈逐年增长趋势，酒精性肝病（Alcoholic liver disease， ALD）的发病率亦显著增加， 在一些地区已成为继病毒性肝炎的第二大肝病[1]。研究表明，酒精对肝脏的损伤机制主要是乙醇及其代谢产物对肝细胞造成广泛损伤，其中氧化应激和脂质过氧化是被普遍认可的重要原因[2]。由于临床尚缺乏治疗ALD的特效药物，因此寻找具有抗氧化活性的药材具有重要意义。
　　黑枸杞（ Lycium ruthenicum Murr） 为茄科枸杞属，主要产于青海省柴达木盆地，其中含有大量的花青素、维生素C、多糖等营养成分，具有较强的抗氧化、抗衰老、清除自由基等作用[3，4]。本实验选取黑枸杞与临床常用保肝药物比较，观察其对小鼠急性酒精性肝损伤的作用。
　　1 材料和方法
　　1.1 药物和试剂
　　联苯双酯，购自富康医药超市。AST、ALT、SOD、MDA试剂盒均购自南京建成生物公司。黑枸杞，购自青海九康中药公司。按料液比1/10称取黑枸杞和蒸馏水，70℃恒温水浴锅浸泡2h，过滤，重复两次，回收三次滤液。旋转蒸发仪70℃浓缩后定容，4 ℃避光保存备用。
　　1.2 实验动物及分组
　　SPF级昆明小鼠60只，购自甘肃中医学院，许可证SCXK（甘）2011-0001。体重（20±2）g，雌雄各半。随机等分成6组：黑枸杞高剂量（LH，16g/kg）、黑枸杞中剂量（LM，8g/kg）、黑枸杞低剂量（LL，4g/kg）、模型组（Model）、阳性组（Positive）（ 联苯双酯，100mg/kg）、正常组（Normal control）。
　　1.3 给药与取材方法
　　除正常组外，其余各组上午9点给予56°白酒15ml/kg灌胃7天构建小鼠急性酒精性肝损伤模型；正常组给予等量生理盐水。造模成功后，每天下午3点各给药组灌胃给药正常组和模型组给予适量生理盐水，连续给药7天后各组称重处死，分离血清和肝脏10%匀浆上清液，-20℃保存以待检测。
　　1.4 统计学分析
　　采用 SPSS17.0统计软件，所有数据均以均数±标准差表示，检验水准α=0.05。
　　2 结果
　　2.1 一般情况
　　试验期间，正常组小鼠无明显变化，模型组小鼠精神差，毛发乱，食量减少，大便稀少。阳性组和黑枸杞给药组小鼠精神可，毛发有光泽。模型组、阳性组、LH组各死亡一只，原因可能是灌胃损伤或小鼠对酒精的耐受差异。正常组毛发、食量、活动、大便均可，适应和试验期间各死亡一只，可能适应不足。
　　2.2黑枸杞水提物对急性酒精性肝损伤小鼠体重和肝脏指数的影响 见表1
　　与正常组相比，各组小鼠体重均显著减轻，肝脏指数显著升高，说明小鼠肝脏转化能力降低，肝脏肿大，急性酒精性肝损伤模型构建成功。
　　2.3 黑枸杞水提物对急性酒精性肝损伤小鼠肝功能的影响 见表2
　　与正常组相比，各组的AST、ALT均显著升高，说明肝功能已损害。与模型组相比，阳性组、LM、LH的AST和ALT均显著降低，说明较高剂量黑枸杞对小鼠有保肝作用，且优于阳性药物。
　　2.4 黑枸杞水提物对急性酒精性肝损伤小鼠肝组织SOD和MDA的影响 见表3
　　正常组SOD显著高于模型组，说明模型小鼠抗氧化酶活力降低，且LL、LM、LH的SOD显著高于阳性组。阳性组、LL、LM、LH的MDA均显著低于模型组，LM、LH的MDA显著低于阳性组。说明阳性药物和黑枸杞均可一定程度提高机体的抗氧化能力，清除和减轻酒精代谢的自由基对肝细胞的氧化损伤和脂质过氧化反应，减缓肝细胞内SOD的消耗和肝组织 MDA的蓄积，且LM、LH的效果优于阳性药物。
　　3 讨论
　　乙醇进入体内后主要经肝细胞中的乙醇脱氢酶（ADH）代谢为乙醛，再经乙醛脱氢酶（ALDH）代谢为乙酸。乙醇代谢过程中产生大量的还原型辅酶Ⅰ（NADH）， 其可激活氧分子，产生大量活性氧（ROS），引起氧化应激和脂质过氧化反应，导致肝细胞内抗氧化酶的下降和肝细胞膜脂质过氧化损伤。肝细胞损伤后胞内ALT和AST可漏出释放入血，使得血清中ALT和AST活性升高[5-8]。脂质过氧化产物还可生成终产物MDA和新的自由基，继续损伤肝细胞，并最终代谢为MDA，故其含量可反映自由基的含量及其引起的脂质过氧化程度[9]。
　　本实验成功构建了急性酒精性肝损伤小鼠模型，并探讨了黑枸杞对其作用。结果表明：1、酒精对小鼠造成了急性肝损伤，肝脏肿大指数升高，肝功降低体重减轻。2、肝功能：黑枸杞给药组和阳性组的AST、ALT显著低于模型组，说明黑枸杞和阳性药物能有效减轻酒精所致急性肝功能损害。3、肝细胞抗氧化酶系：黑枸杞可通过清除酒精代谢产生的大量自由基减轻对肝细胞的氧化应激和膜过氧化反应，一定程度上提高机体的抗氧化能力，减缓酒精所致肝细胞SOD的耗竭和MDA的堆积，且该效果与黑枸杞的剂量呈正相关。
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