中医药治疗溃疡性结肠炎作用机制的动物实验研究进展

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　　关键词：溃疡性结肠炎；中医药治疗机制；综述
　　中图分类号：R574.62文献标志码：A文章编号：1007-2349（2015）06-0102-03
　　溃疡性结肠炎（ulcerative colitis，UC）是一种主要累及直肠、结肠黏膜的慢性非特异性炎症，属炎症性肠病范畴。临床上以腹痛、腹泻、黏液血便、里急后重为主要表现。病因不明、难以治愈、容易复发和癌变。随着生活水平的提高，饮食结构、生活习惯的改变，环境的变化，以及诊断技术的不断进步，我国UC的发病率逐年增高，逐渐成为消化内科的常见疑难疾病。2004年亚太地区UC处理共识意见指出在我国UC的患病率为11.6/10万。有关资料显示，UC发病率在我国有上升趋势。中医药治疗取得了等同或优于西医治疗的成效，同时也对其作用机制进行了动物实验研究。现将近年来的研究进展综述如下。
　　1炎性因子
　　李进等将64只雄性Wistar大鼠用三硝基苯磺酸（TNBS）/乙醇溶液灌肠诱导UC模型，UC 模型组第1、3、7、14 d大鼠结肠组织学评分均明显升高，结肠组织MPO活性明显增高，IL21β，IL210mRNA 相对于GAPDH的表达量均明显增高[1]。迟莉丽等采用2，4，6-三硝酸苯磺酸复制UC模型，各试验组大鼠结肠黏膜均有不同程度的炎症修复、溃疡愈合。结肠大体形态和组织学损伤评分及MPO活性均不同程度降低，结肠黏膜中IL1β、IL-8、TNF-α含量也不同程度降低，而IL-10含量升高，与模型对照组相比有显著性差异，尤其以安肠愈疡汤合加味生肌散组最显著[2]。刘敬军等建立小鼠UC动物模型，白头翁和丹参单独灌肠治疗UC的疗效显著，而三七单独灌肠治疗UC疗效不显著；白头翁单独灌肠治疗UC的疗效可能是通过调节细胞因子IL24、IFN2C来实现的[3]。贾志新等采取免疫致敏法制备模型，治疗后肠必安组的体重变化、结肠黏膜损伤度、溃疡面积、组织病理学的改变、CRP值方面与模型对照组相比有显著性差异（P<0.05）；肠必安组在结肠黏膜损伤度、溃疡面积、组织病理学改变方面与阳性对照组相比有显著性差异（P<0.05）[4]。
　　2免疫调节
　　荣英蕊等采用TNBS/乙醇混合溶液灌肠制备溃疡性结肠炎大鼠模型，泄浊解毒方能明显降低大鼠结肠CMDI评分，降低NF2κBp65、ICAM21的表达[5]。陈文刚等采用TNBS/乙醇混合溶液灌肠复制溃疡性结肠炎大鼠模型，泄浊解毒方各剂量组大鼠Toll样受体4及核因子-κB表达均明显低于模型组；泄浊解毒方大剂量组Toll样受体4及核因子-κB表达明显低于柳氮磺胺吡啶组[6]。陈名涛等采用葡聚糖硫酸钠加乙酸配合饮食加环境复合法复制大肠湿热型UC大鼠模型，模型组大鼠结肠组织中NF-κBp65、TLR4的表达显著增高（P<0.01），清肠汤各剂量组和SASP组NF-κBp65、TLR4的表达较模型组明显降低（P<0.01）[7]。
　　3调节胃肠激素
　　惠毅等以SD大鼠为研究对象，采用大承气汤灌胃+TNBS灌肠诱导UC形成，通过乌梅丸拆方给药，模型组大鼠结肠组织VIP升高，SP降低，胃残留率升高，小肠推进率降低，有显著性（P<0.01），灌胃给药后，全方组、寒热并用组、温热组大鼠结肠组织VIP降低，SP升高，胃残留率降低，小肠推进率升高，补益组大鼠结肠组织VIP降低，SP升高，有显著性差异（P<0.01）[8]。朱叶珊等采用TNBS/乙醇溶液灌肠法制作UC大鼠模型，阳性药对照组和泄浊解毒方高、低剂量组DAI、ICAM-1积分均较模型对照组下降（P<0.01）；泄浊解毒方高剂量组DAI较阳性药对照组、泄浊解毒方低剂量组均下降（P<0.01，P<0.05）。阳性药对照组和泄浊解毒方高、低剂量组ICAM-1积分均较模型对照组降低（P<0.01）；泄浊解毒方高、低剂量组ICAM-1积分均较阳性药对照组降低（P<0.05）；泄浊解毒方高、低剂量组之间ICAM-1积分比较差异无统计学意义（P>0.05）[9]。王营等采用醋酸直肠刺激法复制大鼠UC模型，模型组SP、VIP含量明显增高；合方组与拆方组含量较模型组明显降低（P<0.05）；辛开组与苦降组无差异（P>0.05）；而与合方组比较，各组均有差异（P<0.05）[10]。
　　4调控细胞凋亡因子
　　王浩等根据体重将60只SD大鼠随机分为正常组、模型组、对照药组、葛根芩连汤组；采用免疫诱导法（第1、10、17、24d于大鼠双侧足趾、双侧腹股沟及背部皮下注射抗原乳化液）复制UC大鼠模型，UC模型大鼠结肠溃疡形成，可伴有炎症、充血、水肿等病理改变；UC模型大鼠结肠黏膜Bcl-2水平显著降低，Bax水平显著升高（P<0.05）；葛根芩连汤组结肠黏膜Bcl-2水平显著升高，Bax水平显著降低（P<0.05）[11]。马少丹等采用异种异体结肠黏膜组织致敏法结合TNBS/无水乙醇局部灌肠方法建立UC模型，模型组结肠组织凋亡细胞明显增多（P<0.01），久泻宁颗粒治疗后，凋亡细胞数目明显减少（P<0.01），并明显降低了凋亡相关调控蛋白Fas/Fas-L的表达（P<0.01）[12]。张涛等采用5%TNBS 100mg・kg 灌肠建模，模型组结肠黏膜LPL凋亡减慢，中、西药组均可诱导结肠黏膜LPL凋亡，中药组与模型组相比，P<0.05[13]。
　　5抗氧化及清除氧自由基
　　王宏伟等采用异种异体结肠黏膜组织致敏法和乙酸局部灌肠相结合的方法制造动物模型。久泻灵可明显降低结肠组织中MDA水平，升高GSH-Px、SOD的活性，降低病理组织学评分[14]。陶弘武等采用TNBS/乙醇法建立溃疡性结肠炎大鼠模型，大鼠结肠组织中的MDA含量明显升高，SOD活性明显降低，具有统计学意义（P<0.05）；补脾益肠丸组、SASP组、溃结安康汤组与模型组比较，MDA含量明显下降，SOD活性明显增强，具有统计学意义（P<0.05）；溃结安康汤组与补脾益肠丸组、SASP组比较，MDA含量下降，SOD活性明显增强，具有统计学意义（P<0.05）[15]。 　　6小结
　　中药能下调致炎细胞因子（IL-1β、IL-8、TNF-α）和上调抗炎细胞因子（IL-10、IFN 2C），从而使免疫功能恢复。异常的免疫反应或正常免疫调节的破坏是UC发病的重要环节。细胞因子（cytokine）是一类生物活性物质，是由细胞分泌的具有生物活性的小分子蛋白质的总称。UC患者，核因子激活，可使肠道黏膜细胞、固有层淋巴细胞和浸润的炎症细胞产生大量细胞因子，直接或间接造成组织损伤。炎症发生时，先激活的是炎症细胞因子IL-1β、TNF2α等。进一步激活Th，释放1L-2、IL-6、IL-8等，当这些细胞因子的过度分泌使机体免疫平衡被打破时即出现免疫性疾病，最终引起UC的发生。细胞因子可分为白细胞介素、干扰素、肿瘤坏死因子、集落刺激因子、生长因子和趋化性细胞因子6类。细胞因子还可分为促炎因子和抗炎因子2类。正常人群细胞因子中促炎性因子如白介素-1（IL-1）、IL-6、IL-8、肿瘤坏死因子-α（TNF-α）和炎性抑制因子IL-1ra、IL-4、IL-10、IL-13处于平衡状态，如果失去平衡，则会导致疾病的发生。促炎细胞因子IL21β与抑炎细胞因子IL210的失衡在TNBS诱导的UC模型大鼠发病中起重要作用。
　　中药抑制肠组织TLR4、NF-κB p65的激活。Toll 样受体4是免疫系统中的跨膜受体，其介导的信号转导通路参与了UC的发生发展。NF-κB在免疫及炎症反应方面起着重要作用，有功能活性的NF-κB二聚体大都含p65亚单位，这样的二聚体具有显著的促炎活性。Toll样受体4可通过MyD88途径及MyD88非依赖途径，使核因子-κB转移到细胞核内并活化，释放多种炎性因子，最终引发肠道黏膜的异常免疫反应。NF-κB是一种具有多向性转录调节作用的核蛋白因子，广泛参与多种基因特别是免疫炎症反应相关基因的表达调控，影响炎症反应过程[16]，可能在UC的发生、发展中起重要作用。
　　中药通过降低胃肠激素的分泌，缓解肠平滑肌痉挛，减慢肠蠕动，减少肠分泌减少，缓解腹泻、腹痛等症状。血管活性相关肠肽（VIP）具有强大的抑制胃肠道平滑肌和括约肌的作用，可抑制胃蠕动和胆囊收缩，VIP分泌异常可能致使胃肠道动力和分泌功能紊乱，从而使分泌物过多，运动规律性改变，肠道对外来刺激敏感性增强，因而导致了腹痛腹泻等临床症状。P物质（SP）为11个氨基酸组成的多肽，在肠道主要分布于近端小肠和结肠，它既可以激素的形式，亦可作为神经递质参与胃肠道运动的调控。VIP和SP 2种物质的协调作用，是维持胃肠运动功能的重要机制之一。ICAM-1 在炎症中的作用主要是白细胞的过度激活，这是炎症肠病病理过程中的一个重要环节，而白细胞停滞并浸润式的血管外渗依赖于炎症部位白细胞和内皮细胞膜表面的黏附分子的表达与功能。ICAM-1作为免疫调节因子，通过受配体相互作用，介导白细胞不同亚群间的接触和黏附，调节白细胞的功能活性和免疫反应。
　　中药可能通过诱导结肠黏膜 LPL凋亡达到缓解溃疡性结肠炎的目的。Bcl-2家族在细胞凋亡中扮演重要角色，降低线粒体膜的通透性，阻止细胞色素C进入细胞质[17～18]。一类具有抑制细胞凋亡的作用，如Bcl-2；另一类具有促进细胞凋亡的作用，如Bax等。通过上调Bcl-2水平、下调Bax水平，可能为溃疡性结肠炎的疗效机制。Fas /Fas-L为细胞凋亡发生的重要途径。UC发病时Fas/Fas-L表达均显著升高。通过改善相关细胞凋亡蛋白的表达达到治疗作用。
　　中药有抗氧化和清除氧自由基的作用。GSH-Px的作用是催化还型谷胱甘肽生成氧化型谷胱甘肽，并能使有害的过氧化物还原为无害的羟基化合物，从而保护细胞膜结构和功能免受过氧化氢的氧化损伤，因此，GSH-Px活性的变化也可反映机体抗氧化能力的变化，而脂质过氧化反应的中间产物MDA间接反映机体内细胞操作的轻重和脂质过氧化的程度。SOD能抑制脂质过氧化反应，清除超氧阴离子，保护细胞免受损伤，其活性的高低常间接地反映了机体清除自由基的能力。参考文献：
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　　（收稿日期：2015-02-02）
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