降氮煎剂对慢性肾衰大鼠肾功能的作用及其对尿酸的影响

来源:用户上传      作者:金宇杰　梁亮　王圣治

　　摘要：目的 研究降氮煎劑对腺嘌呤所致慢性肾衰竭大鼠模型的肾功能的作用及其对尿酸的影响。方法 除空白组外，其他大鼠皆用腺嘌呤灌胃法来复制慢性肾衰竭的模型。将尿毒清作为对照组，按照体重层次将造模大鼠随机分为模型组，尿毒清组（给予尿毒清颗粒）及实验组（给予降氮煎剂），治疗14 d后，测试每组大鼠血肌酐（Scr）、尿素氮（BUN）、尿酸（UA）及肾组织URAT1表达的水平。结果 ①实验组SCR、BUN、UA明显低于尿毒清组及模型组（P<0.05）;②实验组肾组织URAT1蛋白表达明显低于尿毒清组及模型组（P<0.05），而尿毒清组与模型组之间无显著差异（P>0.05）。结论 降氮煎剂可以显著降低Scr、BUN、UA及肾组织URAT1水平，具有改善肾功能及独立降低尿酸的作用。
　　关键词：降氮煎剂;慢性肾衰竭;尿酸;URAT1
　　中图分类号：R285.5 文献标志码：A 文章编号：1007-2349（2020）03-0069-04
　　Effects of Nitrogen-reducing Decoction on Renal Function and Levels of UA andRenal Tissue UTA1 in Rats with Chronic Renal Failure
　　JIN Yu-jie1， LIANG Liang2， WANG Sheng-zhi2
　　（1. Liaoning University of Traditional Chinese Medicine， Shenyang 110032， China;2. The Affiliated Hospital of Liaoning University of Traditional Chinese Medicine， Shenyang 110032， China）
　　【Abstract】Objective： To study the effects of Nitrogen-reducing Decoction on the renal function and the levels of UA and renal tissue URAT1 in rats with adenine-induced chronic renal failure. Methods： Except the rats in the blank group， other rats were given adenine gavage to replicate the chronic renal failure model. By using Niaoduqing as a control group， the model rats were randomly sub-divided into model groups according to their weight. The Niaoduqing group （administered with Niaoduqing granules） and the experimental group （administered with nitrogen-reducing decoction） was both treated for 14 days. The levels of rat serum creatinine （SCR）， blood urea nitrogen （BUN）， uric acid （UA） and renal tissue URAT1 expression in each group were detected. Results： 1） The SCR， BUN， and UA of the experimental group were significantly lower than those of the Niaoduqing group and the model group （P<0.05）. 2） The expression of URAT1 protein in the kidney tissue of the experimental group was significantly lower than that of the Niaoduqing group and the model group （P<0.05）， but there was no significant difference between the Niaoduqing group and the model group （P>0.05）. Conclusion： Nitrogen-reducing decoction can significantly reduce the levels of SCR， BUN and UA and has the effect of improving renal function， and has independent effects of reducing uric acid. 　　【Key words】nitrogen-reducing decoction， chronic renal failure， UA， URAT1
　　慢性肾衰竭（CRF）简称慢性肾衰，是各类慢性肾脏疾病渐进地损害肾功能以致肾脏衰败的综合征[1]。其终末期需用肾脏替代疗法，但该疗法由于费用高、肾源不足等原因难以普及，而中医中药疗效显著，又以其相对低廉的价格、安全方便等特点而广泛用于临床。
　　降氮煎剂是本院院内复方制剂，临床应用治疗慢性肾衰竭氮质血症具有显著效果。同时发现，慢性肾衰患者在使用了降氮煎剂后，其继发性高尿酸血症也有所改善。因此，本实验主要在研究降氮煎剂对慢性肾衰竭所致继发性高尿酸血症大鼠模型的氮质血症及高尿酸血症的作用，并观察其是否具有独立降尿酸的作用。
　　1 材料与方法
　　1.1 材料
　　1.1.1 实验动物 50只SD雄性大鼠购自辽宁中医药大学实验动物中心，SPF级，体重（180±10）g。于辽宁中医药大学实验动物中心清洁级动物房内分笼饲养并观察。
　　1.1.2 主要药品 腺嘌呤（美国 Amresco 公司：0183，规格：100 g×1 瓶）;降氮煎剂（辽宁中医药大学附属医院制剂室，辽药制备Z20180191000，规格：500 mL×1 瓶）;尿毒清颗粒（内蒙古康臣药业有限责任公司，国药准字Z20073256，规格：5 g/袋）。
　　1.1.3 主要试剂 肌酐试剂盒（上海协和梅迪克斯医疗器械有限公司），尿素氮、尿酸试剂盒（上海德赛诊断系统有限公司）。大鼠URAT1免疫组化试剂盒（上海圻明生物科技有限公司）。
　　1.2 方法
　　1.2.1 分组与造模方法 适应性喂养7天后，随机选取12只大鼠为空白组，每天予8 mL/（kg·d）纯净水一次灌胃;对剩余的38只进行造模，每天通过胃内给药，予浓度为2.5%的腺嘌呤混悬液200 mg/（kg·d）。连续21天后，随机选取3只造模组大鼠、2只空白组大鼠，测定血清肌酐和肾间质纤维化程度。结果显示，模型组血清肌酐值超过最大正常值9.7 mmol/L[2]，肾脏体积增大，颜色变为灰白，表面被覆颗粒，光镜下可见缩小的肾小球，毁坏的肾小管，肾间质纤维化，有炎症细胞浸润;空白组大鼠血肌酐及肾脏病理均未见异常，说明制备成功。将造模后存活的30只大鼠分为模型组，尿毒清组和实验组，每组动物数为10只。每次分组皆根据体重层次随机选取大鼠。
　　1.2.2 给药与处理方法 每隔1 d，按照15 mL/kg的剂量，予所有大鼠腹腔注射10%的水合氯醛进行麻醉，等待5 min进行给药。实验组大鼠给予13 mL/（kg·d）降氮煎剂保留灌肠，给予纯净水15 mL/（kg·d）灌胃;尿毒清组大鼠给予15 mL/（kg·d）尿毒清颗粒溶液（每2 mL溶液内含尿毒清颗粒0.15 g）灌胃，纯净水13 mL/（kg·d）灌肠;空白組和模型组大鼠给予15 mL/（kg·d）纯净水灌胃，13 mL/（kg·d）纯净水灌肠。所有大鼠灌肠深度皆为8 cm，灌肠后倒悬大鼠约1 min，使液体充分接触肠壁。连续14 d。最后一次给药后，讲大鼠禁食禁水12 h，称重所有大鼠，用10%水合氯醛腹腔麻醉，剖开腹腔，采集腹主动脉血液5 mL，并摘取左肾去被膜。取材完成后处死大鼠。
　　1.2.3 检测内容与方法
　　1.2.3.1 一般情况 观察大鼠的体重，尿量，毛发颜色，精神，活动和食欲。
　　1.2.3.2 血清检测 将采集的血液离心（1500 g，4℃）7min后取血清并采用生化法检测，查看血肌酐（Scr）、血尿素氮（BUN）、血尿酸（UA）数值。
　　1.2.3.3 肾组织URAT1的检测 运用免疫组化法制备肾组织切片。测定阳性颗粒积分光密度（IOD）。
　　1.3 统计学方法 使用统计软件SPSS22.0分析数据，并且通过（x±s）来表示符合正态分布的测量数据。通过单因素方差分析对各组间的数据进行比较，采用LSD法进行两两比较，以P<0.05作为具有统计学差异。
　　2 结果
　　2.1 一般情况 造模前，所有大鼠毛色光滑润泽，活泼;造模后，造模组大鼠食量逐渐减少，体重增长较空白组大鼠慢，毛色暗淡，活动减少，尿量增加;经尿毒清或降氮煎剂治疗后的大鼠食量和活动量均有所增加。治疗期间，实验组大鼠死亡1只，尿毒清组死亡2只，模型组死亡3只，空白组无死亡。组间病死率无差异（P>0.05）。
　　2.2 血清指标 与空白组相比，其他3组的Scr、BUN及UA 3项指标的平均值显著增加（P<0.05）;与模型组相比，尿毒清组和实验组的Scr、BUN及UA平均值明显降低（P<0.05）;与尿毒清组相比，实验组的Scr及BUN均值有所减少（P<0.05），UA均值显著降低（P<0.05）。具体见表1。
　　2.3 肾组织URAT1蛋白表达 与空白组相比，其他三组大鼠肾组织URAT1蛋白表达IOD均值显著增多（P<0.01）;模型组和尿毒清组间的IOD均值无明显差异（P>0.05）;与模型组和尿毒清组相比，实验组肾组织URAT1 蛋白表达IOD均值明显减少（P<0.05）。具体见表2。 　　3 讨论
　　慢性肾衰竭[3]，属中医“水肿”“虚劳”等范畴，其病理因素主要为湿浊、水气、淤血，故使用以解毒泄浊为主的方剂治疗本病。尿酸[4]是嘌呤及核苷酸代谢的产物。人体内的尿酸水平与肾脏密切相关，其中65%～75%的尿酸是经由肾脏排泄，当生成尿酸的量保持不变时，肾滤过功能减退，血液中尿酸排出量下降，含量大幅增加，继发高尿酸血症。同时，尿酸也会增加肾小管间质的损害[5]，加重肾损害并形成恶性循环。因此在治疗慢性肾衰时，除了要注意降低人体Scr及BUN的数值以外，还要兼顾尿酸的治疗。尿毒清颗粒是用于治疗氮质血症的通腑降浊剂，大量报道显示尿毒清颗粒能降低Scr、BUN的水平[6]，而其降UA作用不尽如人意。
　　降氮煎剂是本院郭恩绵教授根据多年临床经验，反复斟酌选取大黄、红花、炮附片、白头翁4味药构成[7]。大黄苦寒，推陈致新，泻下排毒;红花辛温，通经络，活血脉;炮附片辛甘大热，以温肾暖脾为主，与大黄配伍，主行温阳泄浊的功效;白头翁苦寒降泄，善清阳明血分热毒。现代药理研究发现，人体内的氨是合成蛋白的原材料，也是合成尿素的原材料，大黄[8]通过促进蛋白合成并抑制体蛋白分解来降低血液中Scr、BUN含量，还可增进肠道平滑肌收缩而排泄废物，减轻肾脏损害;红花[9]、附子[10]能够对扩张血管起到一定作用，并能改善微循环，增加肾血流量;白头翁[11]含有的白头翁皂苷，可以舒缓血管、抗氧化。在CRF发展过程中，有许多促氧化反应会引起慢性炎症，加重肾损伤，四味药皆有抗炎作用[8-11]，能够延缓肾病发展进程。综合本方，一可增进肠道运动，促进体内代谢废物排泄;二可增进肾脏血液循环，改善肾功能，推迟肾小球硬化等，具有通腑泄浊，温阳活血，解毒祛邪之功效。
　　在肾脏将尿酸排泄出体外的整个过程中，肾小管是其中的影响要素。因血液进入肾小球后，滤出的尿酸会进入肾小管进行重吸收再分泌的过程，其中高达98%的尿酸被近端肾小管重吸收[4]。人尿酸盐阴离子交换器1（URAT1）是一种尿酸盐转运蛋白，能够主动将肾皮质近曲小管上皮细胞内阴离子与近曲小管管腔内尿酸进行互换而参与尿酸重吸收。其表达的降低，可以抑制二者的交换，增加肾小管对尿酸的排泄，降低血中UA含量。实验结果表明，降氮煎剂亦可有效地抑制URAT1在大鼠肾小管的表达。
　　灌肠[12]给药的方法历史悠久，其最早的记载是东汉张仲景用猪胆汁灌肠治疗便秘。祖国医学认为，大肠能够“传化物”，灌入肠道内的药液直接作用于肠道，治疗肠道疾病，发挥近治作用，又因“肺与大肠相表里”，药液还可通过经络表里联系关系上输于肺，经“肺朝百脉”宣发肃降，送至身体的各个部位，因而发挥作用。现代医学认为，中药药液入直肠后，由半透膜进入其繁杂的静脉丛，参与体循环到达病变部位，亦可通过肠道内外的浓度差，渗透到局部病变发挥成效。本实验降氮煎剂通过保留灌肠的方式大鼠用药，可快速吸收并发挥作用。
　　综上所述，降氮煎剂除了具有降低大鼠肌酐、尿素，改善肾功能的作用外，还可以独立降尿酸，其作用效果明显。
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　　（收稿日期：2019-11-12）
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