丝氨酸蛋白酶1在胃癌组织中的表达及其影响因素分析

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　　[摘要]目的 探討胃癌患者癌组织中丝氨酸蛋白酶1（HTRA1）的水平变化及其影响因素。方法 选取2016年7月～2019年7月于我院临床确诊的220例胃癌患者作为研究对象，采用免疫组织化学方法检测患者胃癌组织及远癌组织中的HTRA1表达情况，并分析HTRA1表达与胃癌患者临床特征的关系。结果 HTRA1蛋白在胃癌组织中的阳性表达率（13.18%）低于远癌组织（86.82%），差异有统计学意义（P<0.05）;HTRA1蛋白表达阳性与阴性患者的肿瘤直径、浸润深度、吸烟史、酗酒史及饮食习惯比较，差异有统计学意义（P<0.05）;HTRA1蛋白表达阳性与阴性患者的年龄、性别、组织分化程度、淋巴结转移及TNM分期比较，差异无统计学意义（P>0.05）;Logistic回归分析结果显示，肿瘤直径（β=0.532，OR=1.873，95%CI 0.372～2.711）、浸润深度（β=0.837，OR=1.103，95%CI 0.822～2.014）、吸烟史（β=0.486，OR=1.569，95%CI 1.023～2.832）、酗酒史（β=0.590，OR=1.690，95%CI 0.934～3.721）、饮食习惯（β=0.829，OR=1.552，95%CI 1.032～2.831）均是影响胃癌组织中HTRA1蛋白表达的独立危险因素（P<0.05）。结论 胃癌中HTRA1蛋白表达与肿瘤直径、浸润深度、吸烟史、酗酒史及饮食习惯有关，肿瘤直径、浸润深度、吸烟史、酗酒史、饮食习惯均是影响胃癌的危险因素。
　　[关键词]胃癌;丝氨酸蛋白酶1;相关因素;预后
　　[Abstract] Objective To investigate the changes of serine protease 1 （HTRA1） in gastric cancer patients and the influencing factors. Methods A total of 220 patients with gastric cancer clinically diagnosed in our hospital from July 2016 to July 2019 were selected as study objects. The expression of HTRA1 in gastric cancer and distant cancer was detected by immunohistochemistry， and the relationship between HTRA1 expression and clinical characteristics of gastric cancer was analyzed. Results The positive expression rate of HTRA1 protein in gastric cancer tissues （13.18%） was lower than that in distant cancer tissues （86.82%）， the difference was statistically significant （P>0.05）. The differences in tumor diameter， invasion depth， smoking history， drinking history and mental state between positive and negative HTRA1 protein expression patients were statistically significant （P<0.05）， while the difference in age， gender， tissue differentiation degree， lymph node metastasis and TNM stage between positive and negative HTRA1 protein expression patients were not statistically significant （P>0.05）. Logistic regression analysis showed that tumor diameter （β=0.532， OR=1.873， 95%CI 0.372-2.711）， invasion depth （β=0.837， OR=1.103， 95%CI 0.822-2.014）， smoking history （β=0.486， OR=1.569， 95%CI 1.023-2.832）， drinking history （β=0.590， OR=1.690， 95%CI 0.934-3.721） and mental state （β=0.829， OR=1.552， 95%CI 1.032-2.831） were independent risk factors affecting gastric cancer （P<0.05）. Conclusion HRA1 protein expression in gastric cancer is related to tumor diameter， invasion depth， smoking history， drinking history and mental state. Tumor diameter， invasion depth， smoking history， drinking history and mental state are all risk factors affecting gastric cancer.
　　[Key words] Gastric cancer; Serine proteinase 1; Related factors; Prognosis 　　胃癌是临床上常见的一种恶性肿瘤，发病率较高，病死率在恶性肿瘤中居第3位[1]。随着时代的进步，人们生活水平不断提升，生活方式及饮食习惯的改变直接导致胃癌的发病率逐年上升[2]。相关研究显示[3]，对于胃癌的治疗方法，临床上大多以5氟尿嘧啶为主的药物治疗。常用药物有紫杉醇、伊立替康及第三百铂等，但效果并不能让患者及医师满意。因此，临床上开始从胃癌患者体内基因和分子水平探讨其病情变化[4]。大量研究显示[5-7]，丝氨酸蛋白酶1（HTRA1）基因在子宫内膜癌、卵巢癌、肝癌等多种癌症中表现为低表达，提示HTRA1具有肿瘤抑制功能，但在胃癌中未有研究证实其表达情况。本研究选取我院收治的220例胃癌患者作为研究对象，旨在探讨胃癌患者癌组织中HTRA1水平的表达情况，并分析其影响因素，现报道如下。
　　1资料与方法
　　1.1一般资料
　　选取2016年7月～2019年7月于我院临床确诊的220例胃癌患者作为研究对象，其中男125例，女95例;年龄27～80岁，平均（63.91±7.85）岁;肿瘤直径<5 cm 的有101例，≥5 cm的有119例;组织分化程度：中或高分化105例，低或未分化115例;浸润深度：T1～T2 68例，T3～T4 152例;有淋巴结转移172例，无淋巴结转移48例;TNM分期：Ⅰ～Ⅱ期88例，Ⅲ～Ⅳ期132例。本研究已经医院医学伦理委员会审核批准，所有患者均对本研究知情同意并签署知情同意书。
　　 纳入标准：①患者术前均未接受过放疗或化疗[8];②无其他恶性肿瘤病史者;③神志清楚、能进行语言沟通交流者;④愿意配合者。排除标准：①精神、认知有障碍者;②病情不稳定或病情急剧恶化者。
　　1.2观察指标及评价标准
　　采用免疫组化法检测胃癌及远癌组织中的HTRA1蛋白表达情况，分别对患者的胃癌及远癌组织进行免疫组化S-P法染色。石蜡切片二甲苯脱蜡，梯度乙醇水化，H2O2室温孵育20 min灭活内源性过氧化物酶，切片抗原修复后，滴加鼠抗人HTRA1一抗50 μl，4℃过夜，过夜后将切片室温平衡1 h，加入抗鼠IgG，37℃，DAB显色，苏木精复染，脱水、透明、封片、镜检。两项的乘积即为该病例的免疫组化评分：0分为阴性（-）;1～4分为弱阳性（+）;5～8分为中度阳性（++）;9～12分为强阳性（+++）。以≥5分判断为阳性，<5分判断为阴性。
　　1.3统计学方法
　　采用SPSS 19.0统计学软件对数据进行分析，计量资料以均数±标准差（x±s）表示，采用t检验，计数资料以率（%）表示，采用χ2检验，相关因素采用Logistic回归分析，以P<0.05为差异有统计学意义。
　　2结果
　　2.1患者胃癌及远癌组织中的HTRA1蛋白表达情况
　　HTRA1蛋白阳性呈棕褐色颗粒，主要表达于细胞核中，HTRA1蛋白在胃癌组织中阳表达率为13.18%（29/220），而在远癌组织中阳性表达率为86.82%（191/220）。患者胃癌组织中的HTRA1蛋白表达低于远癌组织，差异有统计学意义（P<0.05）。
　　2.2影响胃癌组织中HTRA1蛋白表达的单因素分析
　　HTRA1蛋白表达阳性与阴性患者的患者的肿瘤直径、浸润深度、吸烟史、酗酒史及饮食习惯比较，差异有统计学意义（P<0.05）;HTRA1蛋白表达阳性与阴性患者的年龄、性别、组织分化程度、淋巴结转移及TNM分期比较，差异无统计学意义（P>0.05）（表1）。
　　2.3影响胃癌组织中HTRA1蛋白表达的因素的Logistic回归分析
　　以患者的临床特征为自变量，胃癌组织中的HTRA1蛋白表达为应变量，最终将肿瘤直径、浸润深度、吸烟史、酗酒史及饮食习惯纳入Logistic回归分析。结果显示，肿瘤直径、浸润深度、吸烟史、酗酒史及饮食习惯均是影响胃癌组织中HTRA1蛋白表达的独立危险因素（P<0.05）（表2）。
　　3讨论
　　胃癌是临床上消化科常见的恶性肿瘤，发病率较高，引起胃癌的主要原因是人们的生活习惯、工作压力、幽门螺杆菌的感染及饮食习惯等造成的[9]。相关研究证明[10-11]，绝大多数的胃癌患者属于腺癌，早期胃癌症状不明显，晚期胃癌表现为贫血、消瘦及营养不良等症状，且小部分会出现上腹不适、嗳气等特异性症状，与胃慢性疾病症状较为相似，易被忽略。因此，目前为止我国胃癌的早期诊断率较低。胃癌又为分为早期胃癌和进展期胃癌，早期胃癌是指癌组织局限于胃黏膜下层的胃癌，肉眼可分清形态;进展期胃癌是指癌组织浸润深度已超越黏膜下层的胃癌[12]。此外，相关资料证明[13]，在人们的饮食习惯中，膳食含有促癌真菌、N-亚硝基化合物、新鲜蔬菜的缺乏、幽门螺旋菌感染及遗传易感等是胃癌疾病的高发因素。大量研究显示，肿瘤的发生是一个涉及多个癌基因激活和抑癌基因失活的复杂演讲过程[14-16]。
　　近年來研究证实[17]，膜蛋白酶与肿瘤的发生日益密切，如HTRA1等，参与了多种恶性肿瘤的发生发展过程。HTRA1是一个蛋白酶家族成员之一，也是一种具有热休克蛋白性质的膜蛋白酶，在哺乳动类动物里扮演者重要的角色，特别是在消化、凝血和补体系统方面。相关研究显示[18]，临床上HTRA家族同源物有4类，其中包括HTRA1、HTRA2、HTRA3及HTRA4。HTRA同源物均包含1个高度保守的胰酶样蛋白酶结构域和1个1～2碳末端盘状同源区域。研究显示，盘状同源区域是蛋白质反应模块，作为多聚体信号复合物的组织者发挥重要作用，同时在临床被作为是激活细菌和人类HTRA家族成员蛋白酶活性的开关[19]。此外，据相关资料报道[20]，HTRA1基因包含了9个外显因子，编码458个氨基酸，定位于染色体10q26.2。HTRA1在宫颈癌、黑色素瘤、子宫内膜癌等多种癌症中表达水平较低，这提示HTRA1对肿瘤有抑制作用。 　　本研究结果显示，HTRA1蛋白在胃癌组织中的阳性表达率（13.18%）低于远癌组织（86.82%），差异有统计学意义（P<0.05）;HTRA1蛋白表达阳性与阴性患者的肿瘤直径、浸润深度、吸烟史、酗酒史及饮食习惯比较，差异有统计学意义（P<0.05）。提示HTRA1可促进胃癌的生长、侵袭和转移，为胃癌预后的一项重要指标。同其他恶性肿瘤一样，在胃癌的发展过程中HTRA1起到了至关重要的作用。Logistic回归分析结果显示，肿瘤直径、浸润深度、吸烟史、酗酒史及饮食习惯均是影响胃癌组织中HTRA1蛋白表达的独立危险因素（P<0.05）。提示HTRA1表达水平与胃癌发生关系密切，且胃癌组织中HTRA1水平表达与吸烟、酗酒、精神状态及饮食习惯有一定关系。
　　综上所述，胃癌患者体内HTRA1水平缺失与肿瘤直径、浸润深度、吸烟史、酗酒史、饮食习惯有关，且肿瘤直径、浸润深度、吸烟史、酗酒史、饮食习惯均是影响胃癌的独立危险因素，通过以上指标有助于发现胃癌治疗的新靶点。
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　　（收稿日期：2019-09-18  本文编辑：閆  佩）
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