高效液相色谱法在脑心清胶囊添加硝苯地平检测中的应用价值探讨

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　　【摘要】 目的 探究高效液相色谱法（HPLC）在脑心清胶囊添加硝苯地平检测中的应用价值。方法 色谱柱为Agilent C18（250 mm×4.6 mm， 5 μm）， 以甲醇-水（60∶40）为流动相， 检测波长为235 nm， 流量为1.0 ml/min， 进样量为20 μl， 柱温为30℃。结果 处于27.98～139.9 μg/ml范围内， 硝苯地平浓度线性关系良好， 得出Y=130.2+13.92X回归方程， 相关系数：r=0.9941。重复性RSD是0.3%（n=5）， 进样精密度0.7%（n=5）， 回收率平均值100.1%， RSD：1.0%（n=5）。结论 采用HPLC对脑心清胶囊添加硝苯地平进行检测， 发现其准确度、灵敏度高， 重复性好， 是用于硝苯地平被非法添加在脑心清胶囊中测量的一种极佳的测定方式， 具有临床应用价值。
　　【关键词】 脑心清胶囊;硝苯地平;高效液相色谱法
　　DOI：10.14163/j.cnki.11-5547/r.2020.12.088
　　硝苯地平适用于各种类型高血压， 是一种防治心绞痛、抗高血压的药物， 对重度、顽固性高血压有极佳的疗效， 其起效快、峰/谷比值高是此药的特点， 且经临床使用， 疗效获得肯定[1]。但是， 急需建立硝苯地平的检验检测方式， 对此类非法添加进行严厉打击[2]。本文对HPLC检测脑心清胶囊添加硝苯地平的应用价值进行研究， 结果报告如下。
　　1 资料与方法
　　1. 1 一般资料 选择色谱柱为Agilent （250 mm×4.6 mm， 5 μm）， 以甲醇-水（60∶40）为流动相， 检测波长为235 nm， 流量为1.0 ml/min， 进样量为20 μl， 柱温为30℃。选择带DAD检测器的Agilent 1260高效液相色谱仪， 岛津UV 2700型紫外可见分光光度计;Mettler XS105型分析天平;上海波龙电子设备有限公司生产的USA-602超声仪， Mettler Seven Excellence多功能参数测定仪。同时选取不同批号的、某厂家生产的3份脑心清胶囊样品， 给出A、B、C编号， 并选择编号为D的另一家脑心清胶囊， 选取批号为100338-201605中国食品药品检定研究院生产的硝苯地平对照品。甲醇（色谱醇）;超纯水。
　　1. 2 方法
　　1. 2. 1 色谱条件 选择色谱柱为Agilent （250 mm×4.6 mm， 5 μm）， 以甲醇-水（60∶40）为流动相， 检测波长为235 nm， 流量为1.0 ml/min， 进样量为20 μl， 柱温为30℃。
　　1. 2. 2 定性实验 精密称取硝苯地平对照品27.40 mg置入100 ml的量瓶中， 用甲醇稀释至刻度， 摇匀， 滤过， 精密量取续滤液3 ml置10 ml的量瓶中， 加甲醇稀释至刻度， 滤过并摇匀， 作为对照品溶液分析。分别选择各20粒样品A、B、C的编号， 对内容物进行称重， 分别为5.3834、5.3840、5.3765 g， 分别将内容物置入研钵中研磨， 再分别精密称取B：0.8171 g， A：0.8076 g， C：0.8031 g置于50 ml的量瓶中， 加適量甲醇， 振摇5 min溶解， 超声处理10 min， 加甲醇稀释到刻度， 滤过， 作为供试品溶液实施分析。结果：对照品色谱和供试品色谱中相应保留时间处， 紫外光谱图一致， 检出一个色谱峰， 说明在3种样品中均含有硝苯地平。
　　选择编号为D的另一家脑心清胶囊， 在50 ml的瓶中加入3粒内容物， 加适量甲醇， 振摇5 min溶解， 超声处理10 min， 加甲醇稀释到刻度， 摇匀滤过， 选择滤液作供试品溶液实施分析。结果：基于硝苯地平对照品相应保留时间内， 样品D无色谱峰， 显示此样品不含硝苯地平。分别稀释后进样的硝苯地平对照品溶液， 当信噪比为3时， 检测限为0.02 μg。
　　1. 2. 3 定量实验 对照液稳定性实验：分别在30 min、1 h、1.5 h、2 h、3 h选择“定性实验”项下的硝苯地平对照品溶液进行分析。对照液至少于3 h内稳定， 硝苯地平RSD为1.1%。
　　线性实验：精密称定硝苯地平对照品27.98 mg置100 ml的量瓶中， 加甲醇溶解稀释至刻度， 摇匀， 分别精密量取5.00、4.00、3.00、2.00、1.00 ml置10 ml的量瓶中， 加甲醇溶解稀释至刻度， 配制成浓度分别为139.90、111.92、83.94、55.96、27.98 μg/ml的溶液， 分别进样20 μl实施分析。相应浓度为横坐标（X）、纵坐标（Y）， 得出Y=130.2+13.92X回归方程， 相关系数：r=0.9941。
　　重复性实验：在研钵中研磨20粒A号样品内容物称重5.3840 g， 分别精密称取0.8072、0.8076、0.8031、0.8171、0.8076 g置50 ml的量瓶中， 加适量甲醇， 振摇5 min， 超声处理10 min， 加甲醇稀释到刻度， 滤过， 作为供试品溶液实施分析， 平均测定5份。结果计算出平均含量为1.03 mg/粒， 计算硝苯地平的含量， 依据“含量测定”项下校正因子（f）计算， RSD为0.3%。
　　进样精密度实验：连续5次， 选择“定性实验”下的对照品溶液， 结果得RSD为0.7%。
　　2 结果
　　2. 1 硝苯地平回收率实验 精密称取硝苯地平对照品27.75 mg置100 ml的量瓶中， 加甲醇稀释到刻度， 精密量取15 ml置于50 ml量瓶中， 加甲醇溶解稀释到刻度、摇匀， 在10 ml的量瓶中放置“定性试验”下A样品溶液5 ml， 精密量取2 ml， 加甲醇稀释到刻度且摇匀， 并实施进样分析。见表1。 　　2. 2 HPLC对脑心清胶囊添加硝苯地平的检测结果   精密称取硝苯地平对照品27.40、29.04 mg分置100 ml的量瓶中， 并加甲醇溶解稀释到刻度， 摇匀， 分别精密量取3 ml置10 ml的量瓶， 加甲醇稀释到刻度， 进样分析。分别选择各20粒样品A、B、C的内容物称重， 样品分别为：C：0.8031、0.8054 g;B：0.8171、0.8189 g;A：0.8706、0.8711 g;均放置在50 ml的量瓶中， 加适量甲醇超声处理10 min， 振摇5 min， 加甲醇稀释至刻度， 滤过， 选择续滤液20 μl进样分析。见表2。
　　3 讨论
　　经实验， 试用几种不同色谱柱， 基于固定相的选择上效果均较为理想， 如应用C18、C8柱， 脑心清和硝苯地平分离度理想， 峰形尖锐， 色谱峰可较好分离， 保留时间适当。通常以对照品和保留时间核对定性， 确认紫外吸收光谱， 当判断为伪药， 则非法添加西药硝苯地平。本文实施线性关系等方法学研究， 为了审慎， 对其加入量为每粒1 mg稍多进行准确测定[3， 4]。
　　硝苯地平无臭、无味， 是黄色结晶粉末、遇光不稳定， 易出现歧化反应， 易分解， 在价格上此种药物有较强优势。存在负性肌力和传导的作用， 药效时间短、血压波动大， 增加冠心病患者死亡率， 但是容易出现非法添加使用化学药物的情况， 造成无意中增加患者的风险性， 剂量上难以很好的把握， 对患者的生命产生严重威胁， 发生不良反应[5， 6]。在具体的实验过程中因硝苯地平遇光不稳定， 溶解配制完成后避免分解， 需尽快使用[7]。脑心清胶囊主要成分为柿叶提取物， 内含儿茶酸、槲皮素、山奈素、黄酮等有效成分， 选取现代化的方式进行定性定量分析是提高其药效质量的有效方式。
　　综上所述， 针对脑心清胶囊添加硝苯地平檢测中采用HPLC， 发现其准确度、灵敏度高， 重复性好， 能够作为一种极佳的测定方式， 用于硝苯地平被非法添加在脑心清胶囊中的测量， 具有临床应用价值。
　　参考文献
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　　[4] 张明， 任宏伟， 刘育慧. 心脑清软胶囊联合匹伐他汀治疗高脂血症的临床研究. 现代药物与临床， 2019， 34（3）：677-681.
　　[5] 李国宏， 纪品川， 王雅君. 心脑康胶囊对慢性稳定性心绞痛患者血液流变学和血清细胞因子的影响. 中国煤炭工业医学杂志， 2019， 22（2）：191-194.
　　[6] 裴月梅. HPLC法测定清脑降压片中非法添加的氢氯噻嗪、盐酸哌唑嗪、盐酸异丙嗪、利血平、硝苯地平. 中草药， 2014， 45（23）：3414-3417.
　　[7] 孙晓岩， 李清. HPLC法同时检测29家硝苯地平制剂的有关物质. 沈阳药科大学学报， 2018（6）：469-476.
　　[收稿日期：2019-11-07]
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