胃癌组织中Beclin1和LC3的表达水平分析

作者:未知

  【摘要】 目的   分析胃癌组织中Beclin1和微管相关蛋白轻链3(LC3)的表达水平, 以期为临床相关工作或研究提供参考。方法 选取75例胃癌组织芯片HStmA150CS02标本为研究对象, 对所有标本实施染色处理。比较胃癌组织与癌旁组织中Beclin1、LC3表达水平, 分析胃癌患者的基本信息和病理特征以及患者病理特征与Beclin1、LC3表达水平之间的关系。结果 胃癌组织中Beclin1、LC3的表达阳性率分别为30.67%、34.67%, 均明显低于癌旁组织的89.33%、76.00%, 差异具有统计学意义(P<0.05)。Beclin1、LC3表达阳性患者与Beclin1、LC3阴性表达患者的年龄、性别及肿瘤位置比较, 差异无统计学意义(P>0.05)。Ⅰ~Ⅱ期患者Beclin1、LC3表达阳性率分别为82.61%、80.77%, 均明显高于Ⅲ~Ⅳ期的17.39%、19.23%, 差异具有统计学意义(P<0.05);浆膜层内患者Beclin1、LC3表达阳性率分别为86.96%、84.62%, 均明显高于浆膜层外患者的13.04%、15.38%, 差异具有统计学意义(P<0.05);淋巴结未转移患者Beclin1、LC3表达阳性率分别为86.96%、84.62%, 均明显高于淋巴结转移患者的13.04%、15.38%, 差异具有统计学意义(P<0.05);Ⅲ级分化患者Beclin1、LC3表达阳性率分别为8.70%、11.54%, 均明显低于Ⅰ~Ⅱ级分化患者的91.30%、88.46%, 差异具有统计学意义(P<0.05)。结论 Beclin1、LC3在胃癌组织中的表达阳性率相对较低, 且随着患者病情的发展, 该两项指标的表达阳性率会随之降低。
  【关键词】 Beclin1;胃癌;微管相关蛋白轻链3;自噬;凋亡
  DOI:10.14163/j.cnki.11-5547/r.2020.12.087
  胃癌是指起源于胃黏膜上皮的一种恶性肿瘤, 在国内各地恶性肿瘤发病率中稳居首位, 该病的发生有显著地域差异性, 多见于东部沿海与西北地区, 高发于>50岁人群, 男性多于女性, 两者发病率的比例约为2∶1[1]。近年来, 由于饮食结构与生活方式的变化, 该病发生率有所上升, 且呈年轻化发展趋势, 当前, 临床上尚未找到特效治疗方法。Beclin1、LC3皆是形成自噬体的重要基因, Beclin1属于自噬相关基因, 其与Bcl-2基因共同调控自噬, 在自噬溶酶体降解期间可发挥抗肿瘤效果;LC3为一种自噬标志基因, 也是诊断自噬特异的主要指标之一。为分析Beclin1、LC3于胃癌组织中的表达水平, 现对75例胃癌患者展开研讨, 详细报告如下。
  1 资料与方法
  1. 1 一般资料 选取上海芯超生物科技有限公司提供的75例胃癌组织芯片HStmA150CS02标本, 均为手术过程中获取, 且经病理检查明确判断。
  1. 2 方法 对胃癌芯片进行常规脱蜡, 之后, 利用柠檬酸缓冲液实施抗原修复, 添加3%双氧水去离子水, 于37℃下孵育18 min。第1抗体(兔抗人Beclin1与LC3多克隆抗体)稀释至1∶200, 在4℃下过夜, 之后添加相应的试剂于37℃下进行孵育, 时间为20 min。在第2抗(羊抗兔抗体)中添加过氧化物酶进行标记, 然后, 实施显色, 利用苏木精实施重新染色;脱水后, 应用中性树胶进行封片。
  1. 3 观察指标 ①观察比较胃癌组织与癌旁组织中Beclin1、LC3表达阳性情况。②观察患者基本信息(年龄、性别及肿瘤位置)分布与Beclin1、LC3表达水平。③对芯片实施免疫组化分析, 所用产品编号为HStmA150CS02(上海芯超生物科技有限公司), 点阵直径为1.5 mm, 胃腺癌75例——癌75点/癌旁75点, 并分析75例患者病理特征(病理分级、浸润深度、淋巴结有无转移、分化程度)与Beclin1、LC3表达水平之间的关系。
  1. 4 统计学方法 采用SPSS17.0统计学软件对数据进行统计分析。计数资料以率(%)表示, 采用χ2检验。P<0.05表示差异具有统计学意义。
  2 结果
  2. 1 胃癌组织与癌旁组织中Beclin1、LC3表达阳性情况对比 胃癌组织中Beclin1、LC3表达阳性率均低于癌旁组织, 差异具有统计学意义(P<0.05)。见表1。
  2. 2 75例患者基本信息分布与Beclin1、LC3表达水平分析 Beclin1、LC3表达阳性患者与Beclin1、LC3表达阴性患者的年龄、性别及肿瘤位置比较, 差异无统计学意义(P>0.05)。见表2。
  2. 3 75例患者病理特征与Beclin1、LC3表达水平之间的关系分析 Ⅰ~Ⅱ期患者Beclin1、LC3表达阳性率均显著高于Ⅲ~Ⅳ期, 浆膜层内患者Beclin1、LC3表达阳性率均明显高于浆膜层外患者, 淋巴结未转移患者Beclin1、LC3表達阳性率均高于淋巴结转移患者, Ⅲ级分化患者Beclin1、LC3表达阳性率均低于Ⅰ~Ⅱ级分化患者, 差异具有统计学意义(P<0.05)。见表3。
  3 讨论
  自噬在机体的病理与生理过程中均可见到, 其主要是借助溶酶体来降解自身受损的大分子物质与细胞器, 为真核细胞独有的生命特征[2]。自噬除了参与细胞死亡、分化成熟、生长发育的调控外, 还与肿瘤的出现、演变存在密切的关系。
  Beclin1基因又称为BECNI基因, 为自噬调控因子, 也被临床上作为肿瘤相关因子。从肿瘤方面, Beclin1参与的自噬反应有以下几种机理:①清除具有较高遗传毒性、促使细胞非凋亡方式死亡、合成活性氧的细胞器;②降解必要的、特定的长寿蛋白与细胞器, 调控细胞生长。由此可推断出, Beclin1可能具有清除肿瘤细胞、阻止肿瘤发展与出现的可能性。现有研究证实[3], Beclin1于同一或不同肿瘤的不同时期发挥的作用也不尽相同。于前列腺癌、卵巢癌、乳腺癌细胞内, Beclin1可出现缺失现象。经动物实验表明, 敲掉Beclin1基因的小鼠, 其体内不同癌症的发生率显著大于正常小鼠, 可见Beclin1与癌症的发生存在明显的关联性, 可能为癌症发生的早期事件[4]。在本研究中, 胃癌组织内的Beclin1表达阳性率显著低于胃癌旁组织(P<0.05), 这说明癌症的发生与Beclin1表达情况存在密切关系。   LC3为哺乳动物的一个ATG同源蛋白, 在细胞中主要分为LC3-Ⅰ与LC3-Ⅱ2种剪切方式。当出现自噬时, LC3-Ⅰ会在泛素样作用下产生水解衍生物, 即LC3-Ⅱ[5]。LC3-Ⅰ主要分布于细胞质中, LC3-Ⅱ主要是分布于自噬体膜上。当营养不足时, LC3基因会随之激活, 转录出充足的LC3前体。于自噬体膜产生期间, LC3前体在ATG4B剪切成LC3-Ⅰ[6]。LC3-Ⅰ在末端的甘氨酸作用下, 与ATG3与ATG7活性位点部位的半胱氨酸相结合产生硫脂键, 促使LC3-Ⅰ和硫脂键相结合, 从而生成LC3-Ⅱ[7]。整个反应期间, ATG3与ATG7主要起介导作用, 跟随自噬体的出现, LC3-Ⅱ开始聚集在自噬体膜上;当此期间, LC3-Ⅱ量不断增加。然后, 溶酶体与自噬体相融合, 后者随之降解, 其表面的LC3-Ⅱ于ATG4B作用下, 重新转变为LC3-Ⅰ, 以实现LC3-Ⅰ于自噬体反应过程中的循环利用[8]。LC3-Ⅱ对自噬体的产生具有重要作用, 有关文献报道表示[9], 当把LC3-Ⅱ去除, 将会出现许多非闭合的自噬体结构。由于LC3-Ⅱ数量与自噬体数量呈现为相对应的关系, 故而临床上将其作为自噬体标志物之一。在本研究中, 胃癌组织内的LC3表达阳性率低于癌旁组织(P<0.05), 这说明LC3与胃癌的发生有一定关系。
  关于Beclin1、LC3水平的表达是否与胃癌患者的性别、年龄及肿瘤位置有一定的相关性, 临床上有关研究较少, 还需进行求证与研究。本研究中, Beclin1、LC3表达阳性患者与Beclin1、LC3表达阴性患者的年龄、性别及肿瘤位置比较, 差异无统计学意义(P>0.05)。可见Beclin1、LC3在胃癌组织内的表达水平与患者的年龄、性别、肿瘤位置无关系。有关文献报道[10], Beclin1、LC3表达水平与癌症患者病理分级、病理分期、淋巴结转移、侵及浆膜程度、分化程度有密切关系。在本研究中, Ⅲ~Ⅳ期、浆膜层外、淋巴结转移、Ⅲ级分化患者的Beclin1、LC3表达阳性率均显著低于Ⅰ~Ⅱ期、浆膜层内、淋巴结未转移、Ⅰ~Ⅱ级分化患者, 由此可见患者病理分期越高、侵及浆膜程度越深、淋巴结轉移、分化程度越高, Beclin1、LC3的表达阳性率越低。
  总之, Beclin1、LC3在胃癌组织中的表达阳性率相对较低, 且随着患者病情的发展, 该两项指标的表达阳性率会随之降低。
  参考文献
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  [收稿日期:2020-01-09]
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