胃癌患者外周血中胆固醇与淋巴细胞检测的临床意义及两者的相关性

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　　[摘要] 目的 测定胃癌患者外周血中的总胆固醇（TC）与总淋巴细胞数（LYM），探讨胆固醇、淋巴细胞总数的测定在临床中的意义及两者之间是否有相关性。方法  方便选取2017年 1 月—2019年1 月该院收治的胃癌患者100例作为胃癌组，同期该院体检中心健康体检者50名作为对照组，检测两组研究对象外周血中总胆固醇及总淋巴细胞并进行统计分析，同时将胃癌组中胆固醇、淋巴细胞分别与临床病理特征进行分析并探讨两者之间的相关性。结果  胃癌组外周血中胆固醇水平高于对照组（t=-2.447，P=0.016），淋巴细胞水平低于对照组（t=3.886，P=0.000），差异有统计学意义（P<0.05）;胃癌组中胆固醇、淋巴细胞与性别、浸润程度、分化程度、淋巴結转移、远处转移及TNM分期差异无统计学意义（P>0.05），但随着分化程度及TNM分期情况有明显上升及下降趋势（分化程度：胆固醇： t=0.560，P=0.573;低分化（4.34±1.03）mmol/L;中分化（4.38±0.96）mmol/L;高分化（4.02±0.89）mmol/L;（TNM分期：淋巴细胞：t=0.606，P=0.613;I期（1.78±0.54）×109/L;II期（1.72±0.53）×109/L;III期（1.70±0.61）×109/L;IV期（1.57±0.55）×109/L;胃癌组中胆固醇和淋巴细胞有显著正相关性（r=0.218，P=0.029）。结论 胆固醇及淋巴细胞的异常在胃癌患者中可反应患者的病情情况及营养、免疫状态，通过干预胆固醇的含量可影响机体的免疫状态进而改变其抗肿瘤免疫能力，并为肿瘤的免疫治疗提供新的思路及临床依据。
　　[关键词] 胃癌;胆固醇;淋巴细胞;肿瘤免疫
　　[中图分类号] R73          [文献标识码] A          [文章编号] 1674-0742（2020）06（a）-0175-04
　　Clinical Significance of Peripheral Blood Cholesterol and Lymphocyte Detection in Patients with Gastric Cancer and Their Correlation
　　WU Hong-wei， WANG Zi-an
　　Department of Oncology， the First Affiliated Hospital of Bengbu Medical College， Bengbu， Anhui Province， 233004 China
　　[Abstract] Objective To determine the total cholesterol （TC） and total lymphocytes （LYM） in the peripheral blood of patients with gastric cancer， and to explore the clinical significance of the determination of cholesterol and total lymphocytes and whether there is a correlation between the two. Methods A total of 100 patients with gastric cancer treated from January 2017 to January 2019 were conveniently selected as the gastric cancer group， and 50 healthy patients from the physical examination center of the hospital were used as the control group. Total cholesterol and total lymphocytes in the peripheral blood of the two subjects were measured and analyzed. At the same time， the cholesterol and lymphocytes in the gastric cancer group were analyzed with clinicopathological characteristics and the correlation between the two was explored. Results The levels of cholesterol in the peripheral blood of gastric cancer group were higher than those in the control group （t=-2.447， P=0.016）， and the levels of lymphocytes were lower than those in the control group （t=3.886， P=0.000）. The differences were statistically significant（P<0.05）. Cholesterol， lymphocytes and gender， degree of infiltration， degree of differentiation， lymph node metastasis， distant metastasis， and TNM staging were not statistically significant and had no significant correlation （P>0.05）， but with the degree of differentiation and TNM staging significant upward and downward trends （differentiation degree： cholesterol： t=0.560，P=0.573;poorly differentiated （4.34±1.03）mmol/L; moderately differentiated （4.38 ± 0.96）mmol/L; highly differentiated （4.02±0.89）mmol/L; （TNM stage： lymphocytes： t=0.606， P=0.613; Stage I （1.78 ± 0.54）×109/L; Stage II （1.72 ± 0.53）×109/L; Stage III （1.70±0.61）×109/L; Stage IV （1.57 ± 0.55）×109/L; There was a significant positive correlation between cholesterol and lymphocytes in the gastric cancer group （r=0.218， P=0.029）. Conclusion Cholesterol and lymphocyte abnormalities can reflect the patient's condition and nutrition and immune status in patients with gastric cancer. Intervention of cholesterol content can affect the body's immune status and thus change its anti-tumor immune ability， and provide new opportunities and clinical basis for tumor immunotherapy. [Key words] Gastric cancer; Cholesterol; Lymphocyte; Tumor immunity 　　胆固醇与多种肿瘤存在相关性，但与胃癌的关联性至今并未达到一致，近年，基于T淋巴细胞的肿瘤免疫治疗取得新进展，研究发现胆固醇水平可影响CD8+T细胞的免疫功能[1]，而外周血中胆固醇与淋巴细胞的相关性未得到验证;淋巴细胞作为能反应机体免疫能力的细胞，与临床病理特征间关系的研究相对较少，该研究方便选取2017年 1 月—2019年1 月入住该院的100例胃癌患者病例，研究外周血中总胆固醇、总淋巴细胞水平，探讨它们之间的相关性及与胃癌临床病理特征的关系，为肿瘤免疫治疗提供临床依据，報道如下。
　　1  资料与方法
　　1.1  一般资料
　　方便选取入住该院的胃癌患者100例作为胃癌组，所有患者均经胃镜和活检或手术与病理确诊，未行抗肿瘤治疗。其中男72例，女28例;年龄25～81岁;分化程度：低分化63例，中分化15例，高分化12例;TNM分期：Ⅰ期11例，Ⅱ期14例，Ⅲ期37例，Ⅳ期38例。另将同期健康体检者50名作为对照组，其中男24名，女26名;年龄 25～72岁。两组性别、年龄差异无统计学意义（P>0.05），两组患者均排除体重超过标准体重15%和原发性血脂代谢异常疾病、自身免疫性疾病、心肺肝肾严重功能障碍、高血压病、甲状腺疾病、糖尿病、中重度贫血者。所选病例均经过伦理委员会批准，且获得患者及其家属的知情同意。
　　1.2  方法
　　分析两组的血浆胆固醇、淋巴细胞，测定方法为：收集受试者空腹12 h后静脉血2 mL，加入0.2 mL肝素抗凝，离心分离血清，用酶法测定TC水平，所用试剂为日立7600-120E全自动生化仪配套的试剂。使用流式细胞术测定两组血浆中总淋巴细胞计数，美国BECKMAN-COULTER公司 EPICS-XL型流式细胞仪，试剂原装进口，采用CD3-FITC/CD16+56-PE、CD4-FITC/CD8-PE鼠抗人双色荧光抗体，OptilyseC溶血剂。取 100 μL抗凝外用静脉血与20 μL荧光抗体充分混匀 ，室温避光放置20 min后，加入500 μL溶血剂，摇匀后避光放置15 min，离心2 000 r/min离心10 min，去上清，加1 mL的PBS缓冲液，混匀后上机检测。
　　1.3  统计方法
　　采用SPSS 21.0统计学软件进行数据分析，计量资料用均数±标准差（x±s）表示，用t检验。相关性采用Pearson相关性分析，P<0.05为差异有统计学意义。
　　2  结果
　　2.1  胃癌组与健康对照组胆固醇、淋巴细胞含量的比较
　　胃癌组胆固醇水平高于对照组，胃癌组淋巴细胞水平低于对照组，差异有统计学意义（P<0.05）。见表1。
　　2.2  胃癌患者外周血胆固醇、淋巴细胞水平与临床病理特征的关系
　　胃癌患者外周血胆固醇、淋巴细胞水平与其性别、浸润程度、淋巴结转移、远处转移、分化程度及TNM分期差异无统计学意义 （P>0.05），但有远处转移者胆固醇水平高于无远处转移者;中、低分化程度胆固醇水平高于高分化程度者;且随着TNM分期越晚，外周血胆固醇水平有上升趋势。有远处转移者淋巴细胞水平低于无远处转移者;且随着TNM分期越晚，外周血淋巴细胞水平有下降趋势。见表2。
　　2.3  胃癌患者外周血胆固醇、淋巴细胞水平与临床病理特征的相关性
　　胃癌患者外周血中总胆固醇、总淋巴细胞水平与其临床病理特征均无相关性（P>0.05）。见表3。
　　2.4  胃癌患者外周血总胆固醇与总淋巴细胞水平的相关性
　　胃癌患者外周血总胆固醇与总淋巴细胞水平之间有相关性（r=0.218，P<0.05）。见表3。
　　3  讨论
　　肿瘤患者普遍存在血脂紊乱现象，胃癌患者更倾向于高脂血症，既往研究表明：胆固醇在胃癌及前期病变既胃高级别瘤变中呈高水平（P=0.013）[2-3]，TC与TNM分期及远处转移差异有统计学意义（P<0.05）。该研究发现胃癌患者外周血中总胆固醇含量（4.28±0.98）mmol/L高于正常（3.82±0.65）mmol/L;有远处转移者含量（4.46±0.97）mmol/L高于无远处转移者（4.17±0.97）mmol/L;分化程度低者含量较高[低分化（4.34±1.03）mmol/L;高分化（4.02±0.89）mmol/L];且随着TNM分期越晚，外周血TC水平有上升趋势I（4.18±0.88）mmol/L;Ⅱ（4.22±0.78）mmol/L;Ⅲ（4.16±1.07）;Ⅳ（4.45±0.98），与既往结果一致。胃癌患者外周血中TC的升高可能与脂蛋白酯酶 （LPL）及肿瘤坏死因子（TNF-α）有关：LPL是调节脂肪合成的重要酶之一，TNF-α由肿瘤细胞产生，进展期胃癌患者中TNF-α通过抑制LPL参与癌性恶液质的发生发展，从而降低 LPL活性及脂肪酸转变能力，使外周血中TC不易向组织转化，既血浆TC水平升高[4]。TC水平升高通过诱导促炎性细胞因子、趋化因子等高表达、增加氧化应激产物、引发 DNA突变、增加癌基因的表达，促使癌症的发生和发展;同时增加肿瘤血管内皮生长因子的表达、促进肿瘤血管生成、增加血管通透性，促进肿瘤生长，提高肿瘤的转移风险[5]。这些均表明高胆固醇与胃癌的发生、发展息息相关。但是本研究中，胃癌患者外周血总胆固醇与各临床病理特征无明显关联（分化程度r=-0.105，浸润程度r=0.154，淋巴结转移r=0.021，TNM分期r=0.114;P>0.05），考虑可能为纳入实验组人数相关较少、较多晚期患者所致，因既往有研究表明TC与胃癌各临床病理特征之间无相关性（分化程度r=-0.004，浸润程度r=0.003，淋巴结转移r=-0.005，TNM分期r=-0.056;P>0.05）[6]，所以不排除实际差异无统计学意义（P>0.05）的可能。 　　抗腫瘤免疫中发挥重要作用的细胞包括T、B、NK淋巴细胞，外周血T淋巴细胞亚群相互协调，维持机体正常的免疫功能，当其数量、比例异常时，机体会出现免疫功能紊乱并引发一系列病理改变;B细胞作为抗原提呈细胞诱导T细胞活化发挥细胞免疫作用，在肿瘤免疫中发挥正向作用;NK细胞通过增加MHCⅠ类分子表达参与适应性T细胞免疫应答，是天然免疫系统的重要组成部分，三者相辅相成发挥免疫监视作用。学术上认为，胃癌患者血清T细胞亚群中，CD3+T、CD4+T细胞表达较正常人和癌前病变者少，CD4+T/CD8+T细胞比值降低，且淋巴细胞的表达水平由其TNM分期决定[7];B细胞计数较正常人虽差异无统计学意义，但其绝对数值低于正常人（P>0.05），早期（Ⅰ、Ⅱ期）含量高于晚期（Ⅲ、Ⅳ期）（P<0.01）[8];NK细胞亚群（CD16、CD57、CD69）数量减少，且多为抑制性表型[9]，这些异常均说明机体出现负性调节的免疫抑制，识别和杀伤突变细胞的能力下降，从而有利于肿瘤细胞的生长、侵袭和转移，这是胃癌发病的免疫学基础。以上，既往研究大都集中在淋巴细胞亚群的探究中，表明胃癌患者外周血中各淋巴细胞计数较正常人降低，且与淋巴结转移无相关性，差异无统计学意义（P=0.367），Ⅲ、Ⅳ期淋巴细胞水平较Ⅰ、Ⅱ期及正常人明显较少，差异具有显著性（P<0.01）[10]，该实验证实胃癌患者总淋巴细胞计数（1.67±0.57）×109/L较正常人（1.90±0.48）×109/L低，同时也证实其与淋巴结转移无相关性（r=-0.122，P=0.226）但随着TNM分期递增有明显下降趋势[I （1.78±0.54）;Ⅱ（1.72±0.53）×109/L;Ⅲ（1.70±0.61）×109/L;Ⅳ（1.57±0.55）×109/L]，说明不管基于总淋巴细胞还是各亚群，数量都较正常人低，随着肿瘤的发展，机体免疫能力呈现下降趋势，由于各免疫细胞的类型、密度、位置、表达模式及免疫应答状态不同导致肿瘤的免疫控制失去协调性，所以总淋巴细胞计数与临床病理特征间无明显关联。
　　HMG-CoA还原酶是胆固醇生物合成中的限速酶，抑制其活性减少TC的合成可抑制淋巴细胞扩增[11]，抑制胆固醇酯化酶ACAT1活性，增加细胞膜游离胆固醇水平可增强CD8+T细胞的抗肿瘤免疫反应[1]，上述研究证实TC的代谢调节会影响淋巴细胞增殖、信号传导及免疫功能，该实验首次研究两者的相关性，证实具有显著正相关性（r=0.218;P=0.029），可为肿瘤代谢免疫治疗提供新的研究方向及临床依据。既往研究发现高胆固醇组的记忆B细胞STAT3活性较正常胆固醇组显著升高[12]，结合最新研究：EB病毒相关性胃癌与包括JAK2扩增在内的免疫应答基因异常调节有关[13]，有理由推测胃癌中TC可通过JAK2/STAT3信号通路发挥调节淋巴细胞免疫功能的作用，并可由相关拮抗剂调节转化胃上皮细胞进而改变其表观遗传，因此，下一步可就其信号通路进行基因方面的研究，有望发现更高效的靶向治疗药物。
　　综上所述，胃癌患者外周血中胆固醇、淋巴细胞水平与胃癌息息相关，监测其变化可判断疾病进展情况及预后，同时本研究表明胆固醇与淋巴细胞正相关，从临床层面证实了胆固醇代谢的调节可影响免疫细胞的适应性免疫应答活性，并为肿瘤的免疫治疗提供新的思路。
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　　（收稿日期：2020-03-04）
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