MTHFR、MTRR基因多态性与不明原因复发性流产研究

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　　[摘要] 目的 探討5，10-亚甲基四氢叶酸还原酶（MTHFR）基因C677T位点、A1298C 位点以及甲硫氨酸合成酶还原酶（MTRR ）基因A66G 位点多态性与不明原因复发性流产关系。方法 采用病例对照研究办法，方便选取2017年7月— 2019年7月在该院生殖中心就诊的原因不明胎停育≥2次的130例患者为病例组，122例在该院产检孕周大于28周，无并发症的孕妇或者生育大于1个小孩的妇女且未发生过流产的患者作为对照组，比较病例组与对照组基因型，分析不明原因复发性流产与 MTHFR 基因 C677T 位点、A1298C 位点和 MTRR 基因 A66G 位点多态性关系。结果 MTHFR基因 C677T 位点中，病例组CC基因频率为30.77%，对照组CC基因频率为57.38%，差异有统计学意义（χ2=18.115，P<0.05）;病例组CT基因频率为55.38%，对照组CT基因频率为37.70%，差异有统计学意义（χ2=7.900，P<0.05）;病例组TT基因频率为13.85%，对照组TT基因频率为4.92%，差异有统计学意义（χ2=5.821，P<0.05）;病例组C等位基因频率为58.46%，对照组C等位基因频率为76.23%，差异有统计学意义（χ2=32.389，P<0.05）;病例组T等位基因频率为41.54%，对照组T等位基因频率为23.77%，差异有统计学意义（χ2=32.389，P<0.05）。两组患者在CC、CT、TT3种基因型、C等位基因、T等位基因的分布差异有统计学意义（P<0.05）。MTHFR基因 A1298C位点、MTRR 基因A66G 位点多态性病例组和对照组差异无统计学意义（P>0.05）。结论 C677T的TT型是复发性流产的高危因素，MTHFR基因多态性与不明原因复发性流产有一定的关系， MTHFR基因 A1298C位点、MTRR 基因A66G 位点多态性与不明原因复发性流产无明确关系。
　　[关键词] 复发性流产;不明原因复发性流产;MTHFR（5，10.亚甲基四氢叶酸还原酶）;MTRR（甲硫氨酸合成酶还原酶）;多态性
　　[中图分类号] R4          [文献标识码] A          [文章编号] 1674-0742（2020）06（a）-0016-04
　　Correlation between MTHFR and MTRR Gene Polymorphisms and Unexplained Recurrent Abortion
　　LI Fu-fu， YUAN Zhi-qun， ZHOU Yun-hua， HUANG Yu-mei
　　Reproductive Center of Meizhou Maternal and Child Health Family Planning Service Center， Meizhou， Guangdong Province， 514021 China
　　[Abstract] Objective To discuss 5，10-Polymorphisms of C677T， A1298C， and A66G of the methionine synthase reductase （MTRR） gene in the methylenetetrahydrofolate reductase （MTHFR） gene were associated with unexplained recurrent abortion. Methods A case-case-control study was adopted. 130 patients with unexplained fetal discontinuations of ≥ 2 visits to the reproductive center of our hospital from July 2017 to July 2019 were selected as the case group， and 122 patients with gestational age greater than 28 weeks， uncomplicated pregnant women or women with more than one child who have not had an abortion were used as the control group. Genotypes were compared between the case group and the control group， and the polymorphism of MTHFR gene C677T， A1298C and MTRR gene A66G were analyzed. Results At the C677T locus of the MTHFR gene， the CC gene frequency in the case group was 30.77%， the CC gene frequency in the control group was 57.38%， the difference was statistically significant（χ2=18.115，P<0.05）; the CT gene frequency in the case group was 55.38%， and the CT gene frequency in the control group was 37.70%， the difference was statistically significant（χ2=7.900，P<0.05）; case group TT gene frequency was 13.85%， control group TT gene frequency was 4.92%， the difference was statistically significant（χ2=5.821，P<0.05）; case group C allele frequency was 58.46%， control group C of allele frequency was 76.23%， the difference was statistically significant（χ2=32.389，P<0.05）; the T allele frequency in the case group was 41.54%， and the T allele frequency in the control group was 23.77%， the difference was statistically significant（χ2=32.389，P<0.05）. The differences in the distribution of CC， CT， and TT genotypes， C alleles， and T alleles between the two groups of patients were statistically significant （P<0.05）. There was no significant difference between MTHFR gene A1298C locus and MTRR gene A66G loci polymorphism case group and control group （P>0.05）. Conclusion Unexplained recurrent miscarriage is related to the MTHFR gene C677T polymorphism， and has no clear relationship with the MTHFR gene A1298C locus and MTRR gene A66G polymorphism. 　　[Key words] Recurrent abortion;Unexplained recurrent abortion;MTHFR（5，10. Methylenetetrahydrofolate reductase）， MTRR （methionine synthase reductase）;Polymorphism
　　复发性流产（RSA）是指患者发生≥2 次的流产，数据指出妊娠总数的1%～2%以及自然流产患者的15%～20%[1]。产生RSA的病因相对复杂，大多是染色体、宫腔黏连以及子宫畸形等出现异常，部分患者表现为甲状腺以及黄体功能低下。以及抗磷脂抗体、抗核抗体、抗精子抗体阳性等自身免疫因素等。现40%～60%的患者流产原因尚不清楚，以上患者为原因不明复发性流产（URSA）[2]。MTHFR（5，10-亚甲基四氢叶酸还原酶）、MTRR（甲硫氨酸合成酶还原酶）是叶酸代谢的关键酶，近年来有报道指出，5，10-亚甲基四氢叶酸还原酶基因（MTHFR）多态性（C677T）同URPL之间存在一定相关性[3-4]，Wald等[5]2001 年发表的研究认为，每日补充0.8 mg的叶酸即能把血浆HCY水平控制在正常水平，且能保证补充叶酸的安全性。该研究以2017年7月—2019年7月于该院生殖中心就诊的不明原因复发性流产患者122例为研究对象，经过对MTRR 基因 A66G 位点以及叶酸代谢相关酶 MTHFR 基因 C677T 位点、A1298C 位点进行多态性的检测，探讨URSA其与之间统计学关联。孕前3个月及妊娠后每天补充0.8 mg叶酸是否对MTHFR 基因 C677T 位点多态性的复发性流产患者具有治疗意义，为孕前及孕期如何补充叶酸，降低复发性流产率提供理论基础。
　　1  对象与方法
　　1.1  研究对象
　　方便选取在该院生殖中心就诊的不明原因复发性流产患者130例：自然流产≥2次，孕周小于12周的患者作为病例组，年龄在20～40岁，平均年龄（28.5±3）岁;排除夫妻双方染色体异常者;行B超检查排除解剖因素异常，内分泌检查正常，支原体、衣原体、巨细胞病毒、弓形虫病原体检查为阴性，已排除生殖道感染等因素，且男方精液常规分析正常。122例在该院产检孕周大于28周且无并发症的孕妇或者生育大于1个小孩的妇女且未发生过流产的患者作为对照组。两组样本的一般资料比较差异无统计学意义（P>0.05）。该次研究经医院伦理委员会批准。  患者纳入标准：①患者对该次研究内容及目的明确，全部患者皆自愿参与研究;②患者一般资料完整，病历资料清晰;③患者无严重脏器疾病影响，如肾功能衰竭等。
　　1.2  方法
　　抽取入组者静脉血5 mL。研究采用PCR荧光定量技术，对患者C677T、 A1298C、A66G;对MTHFR基因C677T 位点、A1298C 位点和 MTRR 基因 A66G 进行多态性进行检测。复发性流产孕前3个月及妊娠后补充0.8 mg叶酸或者含有0.8 mg叶酸的复合维生素，观察其再次妊娠后的妊娠结局。
　　2  结果
　　2.1  两组妇女MTHFR 基因 C677T 位点基因型及等位基因频率分布
　　该研究结果显示，病例组 MTHFR基因 C677T 位点3种基因分布比较，差异有统计学意义（P<0.05）;CC型基因在病例组出现频率明显低于对照组，而TT型在两组中分布频率比较，差异有统计学意义（P<0.05）;T等位基因在病例组中表达频率显著升高（P<0.01），见表 1。说明MTHFR基因 C677T 多态性与不明原因复发性流产有一定的关系。
　　2.2  两组妇女MTHFR 基因A1298C位点基因型及等位基因频率分布
　　MTHFR基因A1298C 位点AA、AC、CC基因型病例组和对照组差异无统计学意义（P>0.05），而A、C等位基因分布差异无统计学意义（P>0.05）见表2;说明 MTHFR A1298C位点基因多态性与 URSA 无明确关系。
　　2.3两组妇女MTRR 基因A66G 位点基因型及等位基因频率分布
　　MTRR 基因 A66G 位点3种基因型病例组和对照组差异无统计学意义（P>0.05），而A、G等位基因分布差异无统计学意义（P>0.05），见表3，说明MTRR A66G 位点基因多态性与 URSA 无明确关系。
　　2.4 复发性流产患者的预防治疗措施
　　对不明原因复发性流产的患者凡是MTHFR C677T 位点、A1298C位点、MTRR A66G 基因多态性的，孕前3个月开始每天补充0.8 mg叶酸，妊娠后继续口服叶酸0.8 mg/d，再次妊娠患者46例，早期流產患者6例，早期流产率13.04%，早期流产率比自然流产率15%～20%低，孕前及孕期通过补充0.8 mg叶酸，其流产率有所下降。
　　3  讨论
　　复发性流产的病因复杂，现阶段研究的重点逐渐转向患者的凝血机制，研究指出，导致凝血机制出现变化的原因可分为获得性以及遗传性凝血。获得性凝血主要体现为血液的凝固性异常增加，主要原因在于狼疮以及心磷脂等自身抗体对血管内皮细胞产生破坏进而导致抗蛋白C被激活，最终导致患者胎盘种植以及外周循环部位形成血栓。而遗传性凝血主要是指患者体内有关凝血的基因发生了突变，血液凝固性异常增加。而MTHFR则是较为常见的与凝血有关的基因，该基因产物主要作用对四氢叶酸半胱氨酸实际的代谢具有良好的调节作用[6]。研究发现[7]，基因多态性于遗传性凝血机制之间有密切的联系，叶酸的关键酶 MTHFR、MTRR等具有影响叶酸代谢的作用，最终导致血液高凝。基因突变后的MTHFR及MTRR具有改变酶活性以及热稳定性的效果，进一步会对叶酸的合成和代谢产生影响，使机体N5-甲基四氢叶酸水平出现下降，甲硫氨酸以及SAM随之出现合成障碍，严重的导致高同型半胱氨酸血症的出现，在以上条件下，DNA甲基化水平的修复以及合成都会出现障碍，也是导致胎儿出现缺陷的主要危险因素[8]。研究发现，叶酸代谢酶 MTHFR 基因出现的多态性会导致酶活性出现降低，除了会使得胚胎发育必需蛋白质以及的 DNA甲基化不足外，还能导致血浆同型半胱氨酸水平异常升高，对血管内皮大部分细胞具有毒性以及损伤效果，进一步导致血小板聚集以及黏附作用被激活，胎盘发生血管栓塞，最终胎儿会出现畸形或是URSA[9]。 　　该研究结果显示：MTHFR基因 C677T 位点中，病例组CC基因频率为30.77%，对照组CC基因频率为57.38%;病例组CT基因频率为55.38%，对照组CT基因频率为37.70%;病例组TT基因频率为13.85%，对照组TT基因频率为4.92%;病例组C等位基因频率为58.47%，对照组C等位基因频率为76.23%;病例组T等位基因频率为41.53%，对照组T等位基因频率为23.77%。两组患者在CC、CT、TT 3种基因型、C等位基因、T等位基因的分布差异有统计学意义（P<0.05）。MTHFR基因 A1298C位點、MTRR 基因A66G 位点多态性病例组和对照组差异无统计学意义（P>0.05）。
　　该次研究中，研究结果与Grechanina Yu等人[10]研究结果具有一致性，研究中指出，MTHFR基因 C677T 位点中，病例组CC基因频率为32.51%，对照组CC基因频率为56.39%;病例组CT基因频率为52.34%，对照组CT基因频率为30.34%;病例组TT基因频率为56.30%，对照组TT基因频率为4.39%;病例组C等位基因频率为56.20%，对照组C等位基因频率为80.45%;病例组T等位基因频率为43.12%，对照组T等位基因频率为20.13%。两组患者在CC、CT、TT3种基因型、C等位基因、T等位基因的分布差异有统计学意义（P<0.05）。
　　该次研究发现病例组习惯性流产患者与正常对照组之间MTHFR C677T位点较对照组明显升高，差异有统计学意义（P<0.05）。MTHFR基因 C677T位点多态性与复发性流产的发生有关。MTHFR基因 A1298C位点、MTRR 基因A66G 位点多态性病例组和对照组无明显差异，考虑MTHFR基因 A1298C位点、MTRR 基因A66G 位点多态性与复发性流产无明确关系。
　　目前妇女在围孕期通过增补叶酸的方式可有效避免胎儿NTD的出现，但一些研究[11]也认为，围孕期增补叶酸还有可能预防其他出生缺陷，如先天性心脏病、泌尿系统畸形、肢体短缩畸形、唇腭裂等。目前，我国也推行围孕期0.4 mg/d叶酸补充的方案。但对于MTHFR、 MTRR基因突变等复杂原因导致的RSA患者，通过补充叶酸以及叶酸用药剂量以及用药周期等是否真正具有预防血栓效果以及实际治疗方案还不明确[12]。该研究通过对MTHFR、MTRR 基因多态性的患者孕前3个月及妊娠期补充0.8 mg叶酸或者含0.8 mg叶酸的复合维生素，观察其再次妊娠后的妊娠结局情况，其中早期流产率为13.04%，流产率稍降低。补充叶酸能够使同型半胱氨酸水平明显降低，从而降低了流产率，但由于该研究对复发性流产患者的年龄以及应用其他安胎治疗方式等未做全部的统计，不能完全判断是每天补充0.8 mg叶酸一定能治疗MTRR 基因A66G 位点以及MTHFR基因C677T位点、A1298C位点多态性造成的不明原因复发性流产，因此需要更多的研究来证明补充叶酸的时间和补充叶酸的剂量。
　　[参考文献]
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　　[2]  李春容，徐威力，江晓庆，等.孕早期妇女MTHFR和MTRR基因多态性分布特征及与Hcy浓度之间的相关性[J].中国优生与遗传杂志，2018，26（8）：21-23，20.
　　[3]  李阿莉，牛丽红，张洋.MTHFR基因多态性与庆阳地区女性复发性流产相关性研究[J].国外医学：医学地理分册，2019， 40（1）：30-32.
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　　[9]  谢晓媛，张颖，辛力，等.叶酸代谢酶 MTHFR、MTRR 基因多态性与原因不明复发性流产的关系[J].天津医药2016， 44（10）：1243-1246.
　　[10]  Grechanina Yu，Bugaeva E，Lisniak S，et al. Successful Rehabilitation of Patient Disabled by the Autistic Spectrum Disorder and the Modififd Epigenetic Status （Polymorphisms Drd2 2137 T/T， Mtrr 66 A/G， Mthfr 677 C/T， Mthfr 1298 A/C）-Case Report[J].Georgian medical news，2019（290）：124-127.
　　[11]  赵雪杰，李晓娜，孙茗，等.叶酸代谢相关酶MTHFR、MTRR基因多态性与不良孕产史的关系[J].检验医学与临床，2019， 16（19）：2761-2763.
　　（收稿日期：2020-03-01）
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