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白花丹参水提物对衰老小鼠学习记忆障碍的影响

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  摘 要:目的:研究白花丹参水提物对衰老小鼠学习、记忆障碍作用的影响。方法:小鼠灌胃给予白花丹参水提物,连续6周,利用Y型迷宫、跳台法和自主活动仪,观察白花丹参水提物对D-半乳糖所致学习记忆障碍的影响。结果:结果表明白花丹参水提物能明显改善D-半乳糖所致的学习记忆障碍的能力(P<0.05或P<0.01)。结论:白花丹参水提物对于衰老小鼠的学习、记忆障碍有明显的改善作用。
  关键词:白花丹参水提物; D-半乳糖学习记忆
  中图分类号:R285.5 文献标识码:A 文章编号:1673-7717(2011)04-0884-02
  Effect of Aqueous Extract of Salvia Miltiorrhiza Bge. F. alba on the
  Improvement of Learning and Memory Disturbance in Senile Mice
  LI Ju-cang【sup】1【/sup】,ZHENG Hui【sup】2【/sup】,WANG De-cai【sup】1【/sup】,WANG Hao【sup】1【/sup】
  (1.School of Pharmacy,Taishan Medical College,Taian 271016,Shandong,China,
  2.School of Science,Zaozhuang Vocational College Science and technology, Tengzhou 277500,Shandong,China)
  Abstract:Objective:To study the effects of aqueous extract of Salvia miltiorrhiza Bge. F.alba on the improvement of learning and memory disturbance in senile mice.Methods:The mice were ig aqueous extract of Salvia miltiorrhiza Bge. F. alba for six weeks continuously. The learning and memory ability of senile mice which was caused by D-galactose were determined with Y-maze test and step-down test,and autonomic activities test.Result:The aqueous extract of Salvia miltiorrhiza Bge. F. alba improved the learning and memory function of dysmnesia mice caused by D-galactose(P<0.05或P<0.01).Conclusion:The aqueous extract of Salvia miltiorrhiza Bge. F. alba could improve learning and memory disturbance in senile mice.
  Key words:salvia miltiorrhiza bge. F. alba;Aqueous extract;D-galactoselearning and memory
  收稿日期:2010-11-22
  作者简介:李聚仓(1984-),男,山东菏泽人,硕士研究生,研究方向:中药药理学。
  通讯作者:王德才(1962-),男,教授,研究方向:中药药理学。
  白花丹参(salvia miltiorrhiza bge. F.alba.C.Y.wu.et H・W・Li)是唇形科植物丹参(Salvia miltiorrhiza Bge)的变种,主要分布于山东境内泰山山脉及其周边地区,已被列为“泰山珍稀濒危物种”【sup】[1]【/sup】。白花丹参味苦,微寒,归心、肝经,有祛瘀止痛、活血通经、清心除烦的功能【sup】[2]【/sup】。研究表明,丹参及复方丹参注射液能明显提高实验动物的学习记忆能力,而丹参酮能改善阿尔茨海默病样大鼠学习记忆障碍【sup】[3-4]【/sup】。
  白花丹参具有丹参的作用和用途,故白花丹参也应该有提高实验动物的学习记忆能力。通过本实验中观察白花丹参水提物对正常及半乳糖导致学习记忆障碍模型小鼠学习记忆能力的影响,并对其机制进行初步探讨,以期为白花丹参的应用提供科学依据。
  1 材 料
  1.1 实验动物 昆明种小鼠,体质量28~33g,全雄性,购于山东中医药大学,生产许可证号:scxk(鲁)20050015。
  1.2 仪器与试药 Y迷宫刺激器(安徽省淮北正华生物仪器设备有限公司产品);ZIL-2小鼠自主活动实验自动控制仪(由中国医学科学院药物研究所研制);白花丹参水提物(白花丹参于秋季采自泰山东麓,经泰山医学院苏延友教授鉴定。将白花丹参根清洗干净晾干,用粉碎机粉碎,取适量粉末置于煎煮容器内,加入10倍药材量的冷纯化水浸泡24h,强火煮沸,再以文火煎煮30min,过滤虑渣加5倍量纯化水继续煎煮,强火煮沸后改文火再煎煮20min,过滤。合并两次滤液,经旋转蒸发仪旋转蒸发浓缩而成。临用时以纯化水配成所需浓度)D-半乳糖(上海试剂二厂生产,批号:20080927);
  2 方 法
  2.1 实验动物分组与给药 将50只昆明种小鼠随机分为空白对照组、模型组及高、中、低剂量治疗组,每组各10只。除空白对照组外,其余各组均皮下注射D-半乳糖0.12g/(kg・d)。同时高、中、低剂量组分别予白花丹参水提液40、20、10g/(kg・d)灌胃,模型组和空白对照组给予0.1L/(kg・d)蒸馏水灌胃,连续42d。
  2.2 Y型迷宫测试【sup】[5]【/sup】 实验在3等分的Y型迷宫进行,迷宫3个末端小区可分为Ⅰ,Ⅱ,Ⅲ。当Ⅰ作为起步区时Ⅲ作为安全区,当Ⅱ作为起步区时Ⅰ作为安全区,当Ⅲ作为起步区时Ⅱ作为安全区依次轮换。小鼠受到电击后,直接由起步区逃至安全区为正确反应,否则均属错误反应。以1个实验日内完成10次反应中错误次数作为学习成绩,24 h后重复测验,记录错误次数为记忆成绩。
  2.3 跳台测试【sup】[6]【/sup】 将小鼠放入跳台箱内安全台上,先适应环境3min,然后通电,小鼠受到电击后会自动跳上安全台,逃避电击。以小鼠跳下安全台为错误反应,受到电击后小鼠会跳回安全台。以小鼠第1次跳下时间作为反应期,并记录5min错误次数,此成绩作为学习成绩。24h后直接将小鼠置于平台上,记录小鼠潜伏期及每只小鼠5min的错误次数,此成绩作为小鼠记忆成绩。
  2.4 自动活动测试【sup】[7]【/sup】 将小鼠放入自主活动程序测定仪活动箱中,每个活动箱中1只,放入后先适应2min,自动记录小鼠3min内的活动次数。
  2.5 统计学方法 采用SPSS 11. 0统计软件处理。数据均以±s表示,分别进行单因素方差分析。
  3 结 果
  3.1 Y型迷宫测试结果 与生理盐水对照组相比,模型组的学习和记忆出现的错误明显增加,差异具有统计学意义。说明模型成功。与模型组相比较,白花丹参高、中剂量组均能明显减少学习时的错误次数,有统计学意义3个剂量组均能明显减少小鼠记忆时的错误次数,有统计学意义。提示白花丹参具有改善D-半乳糖衰老小鼠所致的学习和记忆障碍的作用。详见表1。

  表1 Y型迷宫测试结果(n10,±s)
  注:与生理盐水组相比,*P<0.01与模型组相比较,#P<0.1。
  3.2 跳台测试结果 与生理盐水组相比,模型组学习的反应期和记忆的潜伏期明显延长,学习和记忆测试时出现的错误次数明显增多,差异均具有统计学意义。说明造模成功。与模型组相比较,白花丹参在剂量为10、20g・kg【sup】-1【/sup】时均可明显延长学习的反应期和记忆的潜伏期,学习和记忆测试时出现的错误次数也明显增多,均具有统计学意义。提示白花丹参具有改善D-半乳糖所致衰老小鼠的学习和记忆障碍的作用。相见表2。
  表2 各组小鼠跳台测试成绩(n10,±s)
  注:与生理盐水组相比,*P<0.01;与模型组相比,#P<0.05,##P<0.01。
  表3 小鼠自主活动测试结果(n10,±s)
  注:与生理盐水组相比,*P<0.01;与模型组相比,#P<0.05,##P<0.01。
  3.3 小鼠自主活动测试结果 与生理盐水组相比,模型组小鼠自主活动数明显降低(P<0.01),具有统计学意义。与模型组相比较,白花丹参3个剂量组均可明显增加小鼠自主活动数(P<0.05或P<0.01),具有统计学意义。提示白花丹参能剂量依赖性明显减轻D-半乳糖所致小鼠衰老程度。
  4 讨 论
  D-半乳糖所致学习、记忆障碍衰老模型是最常用的模型之一。D-半乳糖是机体正常的营养成分,在一定时间内,连续给动物注射大剂量的D-半乳糖,机体细胞内的半乳糖浓度就会过多,这些半乳糖可由半乳糖氧化酶催化生成醛糖和过氧化氢,产生超氧阴离子。醛糖在醛糖还原酶的催化下,还原成不能被细胞进一步代谢的半乳糖醇,从而堆积在细胞内,影响正常渗透压,导致细胞肿胀重要器官代谢障碍,最终出现衰老。另一方面过量的氧自由基使细胞膜脂质受损,导致脑神经元退行性变,神经元数目减少、脑组织中过氧化物歧化酶(SOD)活性下降及丙二醛(MDA)、脂褐素升高等,造成动物学习记忆能力下降及机体衰老【sup】[8-9]【/sup】。白花丹参具有祛瘀镇痛、活血通经、凉血消肿、清心除烦等功能,是中医传统使用的活血化瘀药,被广泛用于防治心脑血管病。有研究表明丹参酮能改善阿尔茨海默病样大鼠学习记忆障碍【sup】[3-4]【/sup】。
  本实验通过D-半乳糖所致学习、记忆障碍衰老模型,观察白花丹参水提物对小鼠学习、记忆障碍的影响。本实验通过Y迷宫测试,白花丹参高、中剂量组均能明显减少学习时的错误次数;3个剂量组均能明显减少小鼠记忆时的错误次数。跳台实验发现白花丹参在剂量为10、20g/kg【sup】-1【/sup】时均可明显延长学习的反应期和记忆的潜伏期,学习和记忆测试时出现的错误次数也明显增多;自主活动显示白花丹参三个剂量组均可明显增加小鼠自主活动数。三种方法均表明白花丹参能明显改善记忆障碍的衰老小鼠的学习和记忆能力。
  综上所述,白花丹参水提物具有明显的保护D-半乳糖所致小鼠衰老的作用,具有提高衰老小鼠的学习记忆能力,在抗衰老方面,有着可观的发展和开发前景。
  参考文献
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