液相色谱串联质谱法检测水中藻毒素的研究
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作者: 刘铮 付芳 张杰
【摘要】建立了液相色谱/质谱快速、准确、高灵敏度地测定水体中藻毒素（MCYST）的分析方法，并用于实际样品的分析。该法在5min内即可完成MC-LR,RR的分离检测；定量检测限分别为0.05μg/L；0.015μg/L，回收率分别为101%～104%；92%～93.4%，工作曲线相关系数大于0.99。
【关键词】液相色谱；串联质谱；微囊藻毒素
营养化水体的藻毒素污染备受关注，其中蓝藻产生的藻毒素（MCYST）是湖泊等淡水富营养化水体藻毒素的主要种类［1］。MC-LR、RR是其中研究较多的2种毒素，水体中含量低，检测干扰大，因此逐渐用液相色谱/质谱代替液相色谱分析[1]。传统的液相色谱/质谱分离检测上述2种毒素耗时超过20min。本文建立了水体中MC-LR、RR的超高效液相色谱/串联质谱（UPLC/MS/MS）分析方法，极大地提高了分析速度。
1.实验部分
1.1仪器和试剂
1200 RRLC超高液相色谱仪（配备自动进样器、二元梯度泵）；6410 B型串联四极杆质谱仪；XDB-C18，2.1*50mm，1.8um色谱柱；标准样品：微囊藻毒素固体标准品：50μg，纯度>95%，HPLC级纯品；甲醇：HPLC级，纯度>99.9%；甲酸：HPLC级，纯度>99%；乙腈：HPLC级，纯度>99.9%。
1.2标准溶液的配制
标准储备液：取标准品50μg，加入2mL水：甲醇（50：50），充分摇匀并超声，密封，待用。
标准中间液1：取200μL标准储备液加入50mL水：甲醇（50：50）中，并超声，密封。
标准中间液2：取1mL标准储备液加入50mL水：甲醇（50：50）中，并超声，密封。
标准工作液：分别移取50μL、250μL标准中间液1；250μL、0.5mL、1mL、2mL标准中间液2于盛有部分体积水：甲醇（50：50）的50mL棕色容量瓶中，稀释至刻度，并超声，配制成0.10μg/L、0.50μg/L、2.50μg/L、5.00μg/L、10.00μg/L、20.00μg/L标准溶液。
1.3色谱条件
色谱柱BEH shield RP18（1.7μm, 2.1*50mm），柱温30℃；流动相为0.1%甲酸水溶液：乙腈（体积比90：10）。
1.4质谱条件
检测方式为多反应检测（MRM）模式；母离子MC-RRm/z520.2，MC-LRm/z996.9；定性离子MC-RRm/z439.5，MC-LRm/z374.7；定量离子均为m/z134.8离子源：ESI+模式。
1.5标准曲线及检出限
MC-LR标准曲线：y=1057.6740x R2=0.9981；MC-RR标准曲线：y=5124.2503x R2=0.9994
以0.10ug/L MC-LR及0.02ug/L MC-RR为标样，计算出标准溶液重复测定7次的标准偏差（SD）；按照公式MDL=SD*t（n-1，1-α=0.99）进行计算，得出MC-LR、MC-RR的检测限分别为0.05，0.015ug/L。
1.6精密度
MC-LR 2μg/L样品测定结果：RSD=8.2%；18μg/L样品测定结果：RSD=3.7%
MC-RR 1μg/L样品测定结果：RSD=6.0%；9μg/L样品测定结果：RSD=2.9%
1.7加标回收
MC-LR 出厂水加标2μg/L及18μg/L样品测定：回收率=104%；101%
MC-RR 出厂水加标1μg/L及9μg/L样品测定：回收率=92%；93.4%
2.结果分析
流动相中加入适量的甲酸可增强ESI+检测的灵敏度。
根据文献[3],在质谱分析中,m/z135是MCYST的特征碎片,在MC-LR、RR的二级碎片中丰度最大，常作为MRM定量分析。故本文在前期摸索中确定定量离子均为m/z134.8。
本文方法建立的方法5min内即可完成分析，精密度结果：2.9%～8.2%，回收率结果：92%～104%。以0.10ug/L MC-LR及0.02ug/L MC-RR为标样，计算出标准溶液重复测定7次的标准偏差（SD）；检测限分别为0.05，0.015ug/L。世界卫生组织(WHO)规定水体中MCYST-LR 的质量浓度不能超过1.0ug/L[4]；张维昊等[2]建立了水中MCYST的固相萃取富集-液相色谱紫外分析方法，检测限为20～50ng/L。由此可见，本文方法适合实际工作需要，且优于已有的液相色谱法。
参考文献
[1] Yu Ruipeng, Tao Guanjun, Qin Fang, Chen Yan, Tang Jian. Chinese Journal of Ana lytical Chemis try (虞锐鹏, 陶冠军,秦方, 陈艳, 汤坚. 分析化学) , 2003, 31 (12) : 1 462
[2]Zhang Weihao, Xu Xiaoqing. Chinese Journal of Analytical Chemistry (张维昊, 徐小清,分析化学) , 2001, 29 (5) : 522
[3]NamikoshiM, Rinehart K L, Sakai R, Stotts R R, Dahlem A M, Beasley V R, Carmichael W W, Evans W R. J Org Chem , 1992, 57: 866
[4] World Health Organization. Guide lines for Drinking Water Quality: Addendum to Vol 2. Geneva: World Health Organization, 1998
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