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市售生猪肉中金黄色葡萄球菌污染状况及耐药性分析

来源:用户上传      作者:邬元娟 张树秋 王文博 李鸳鸯

   摘要:为了解市售生猪肉中金黄色葡萄球菌的污染及耐药性状况,于2019年从济南、寿光、德州、兖州、临沂、济宁6地市采集生猪肉(后腿肉)样品共计300份,对其金黄色葡萄球菌污染状况进行检测分析。结果表明,300份样品中,金黄色葡萄球菌检出率为13.0%(38/300);进一步进行金黄色葡萄球菌对9种抗生素的药敏试验,结果表明,猪肉样品中的金黄色葡萄球菌对红霉素、四环素有较高耐药性,且多数为多重耐药菌株。综上,市售猪肉产品中金黄色葡萄球菌污染情况仍比较严重,建议相关部门进一步加强猪肉产品市场监管,采取针对性风险监测预警措施。
  关键词:生猪肉;金黄色葡萄球菌;污染状况;耐药性
  中图分类号:S851.34+7  文献标识号:A  文章编号:1001-4942(2020)02-0140-04
  Abstract To investigate the contamination situation of Staphylococcus aureus in raw pork sold on the markets and its drug resistance in Shandong Province, 300 raw pork samples were collected from Jinan, Shouguang, Dezhou, Yanzhou, Linyi and Jining in 2019. The results showed that Staphylococcus aureus was found in 38 samples, which accounting for 13.0% (38/300). The susceptibility test of the Staphylococcus aureus strains to 9 types of antibiotics was conducted and the results were as follows. The Staphylococcus aureus strains isolated from raw pork had higher resistance to erythromycin and tetracycline, and most strains had multidrug resistance. In conclusion, the contamination of Staphylococcus aureus in raw pork sold on the markets in Shandong Province was more serious, so it was recommended that relevant governmental departments and agencies should further strengthen the market supervision and take actions for risk monitoring and early warning.
  Keywords Raw pork; Staphylococcus aureus; Contamination situation; Drug resistance
   近年来,世界各国食品安全事件频繁发生,食品安全问题成为全世界共同关注的问题[1]。据WHO统计,全世界每年患有腹泻病的人群中约有70%是由于食用了受微生物污染的食品[2]。随着人们生活水平的提高,猪肉产品已经成為百姓餐桌上最为常见的食品,因此食源性致病菌污染造成的猪肉产品食品安全问题不断出现,越来越受到大家的关注[3]。金黄色葡萄球菌是污染猪肉的主要食源性致病菌之一,食用携带有金黄色葡萄球菌的猪肉,会带来很大的食品安全隐患[4]。我国规定绝大多数食品中不能有金黄色葡萄球菌检出,但据报道仍有大量动物源食品中检出金黄色葡萄球菌[5-8]。
  本试验于2019年从济南、寿光、德州、兖州、临沂、济宁6地市采集生猪肉样品,检测其金黄色葡萄球菌,并对检测出的金黄色葡萄球菌进行抗生素药敏试验,以期为选择有效抗菌药、防止抗生素滥用及研究食源性致病菌提供可靠依据,为完善猪肉制品致病菌防治体系奠定基础。
  1 材料与方法
  1.1 样品采集
  2019年6—8月在济南市、寿光市、德州市、兖州市、临沂市、济宁市的超市和农贸市场,采用随机抽样的方式,每个地市抽取50份生猪后腿肉,共计300份。每份猪肉样品为500~1 000 g,无菌袋封装后冷藏条件下4 h内送达实验室进行检测。采样过程遵循无菌操作程序,防止一切可能的外来污染。
  1.2 主要试剂及设备
  金黄色葡萄球菌所用增菌液、分离培养基及显色培养基均购自广东环凯生物科技有限公司,所有试剂及生化检定卡均在有效期内。生化培养箱购自上海新苗医疗器械制造有限公司,质控菌株均由广东省食品微生物安全工程技术研究开发中心提供,金黄色葡萄球菌质控菌株编号ATCC25922。苯唑西林、庆大霉素、复方新诺明、环丙沙星、克林霉素、红霉素、磺胺异恶唑、多西环素、四环素药敏板,均购自上海星佰生物技术有限公司。
  1.3 猪肉样品中金黄色葡萄球菌检测方法
  参照《食品微生物学检验 金黄色葡萄球菌检验》(GB 4789.10—2016)[9]检测猪肉样品中的金黄色葡萄球菌,检测过程严格按照《国家食源性致病菌监测工作手册》中质量控制操作程序进行,并以标准菌株为对照菌株进行质控。
  1.4 药敏试验
  1.4.1 药敏板浓度 苯唑西林(OX),0.125~8 μg/mL;庆大霉素(GEN),0.06~32 μg/mL;复方新诺明(T/S),0.03/0.59~64/304 μg/mL;环丙沙星(CFX),0.06~32 μg/mL;克林霉素(CLN),0.03~16 μg/mL;红霉素(EM),0.03~16 μg/mL;磺胺异恶唑(G),16~512 μg/mL;多西环素(DOX),0.03~16 μg/mL;四环素(TET),0.03~16 μg/mL。   1.4.2 试验方法 将保存于-80℃的金黄色葡萄球菌(参考GB 4789.10—2016检测方法分离纯化后,收集到脑心浸出液甘油管中保存)取出复苏,划线接种于营养琼脂板上,挑取菌落数个置于接种水(DEMINERALIZED WATER)中,用0.5麦氏比浊管比浊;取上述菌液60 μL,加入营养肉汤培养液中,混匀;吸取稀释菌液,加入药敏板中,毎孔100 μL;将板条放入恒温培养箱中36℃培养16~24 h,自培养箱中取出板条,判读各个孔的阴阳性结果。
  2 结果与分析
  2.1 猪肉样品中金黄色葡萄球菌检出总体情况
  试验结果显示,300份样品中, 有38份检出金黄色葡萄球菌,检出率为13.0%(38/300)。对分离自这38份样品的菌株分别进行编号(1~38),用于后续试验。
  2.2 金黄色葡萄球菌药物敏感性试验结果
  按照临床和实验室标准化协会(CLSI)的《M100S抗微生物药物敏感性试验的执行标准(26th Edtion)》对分离自猪肉样品的38株金黄色葡萄球菌进行药敏试验,结果见表1。可以看出,除3、9、18号菌株外,其余菌株均对一种或多种抗生素产生耐药性,其中12、14、27、30号菌株均对6种抗生素产生耐药性。
  2.2.1 耐药率 由表2可以看出,38株金黄色葡萄球菌菌株对红霉素和四环素的耐药率最高,其次为克林霉素,均超过60%;对磺胺异恶唑和庆大霉素的耐药率也较高,分别为36.8%、44.7%;对多西环素和复方新诺明的耐药率较低,分别为5.3%和7.9%。
  2.2.2 耐药谱 38株金黄色葡萄球菌中有3株为敏感菌(表1),其余菌株均为耐药菌,其耐药谱见表3。有3株菌耐一种抗生素,6株菌耐两种抗生素,8株菌耐三种抗生素,10株菌耐四种抗生素,4株菌耐五种抗生素,4株菌耐六种抗生素。
  其中,耐药谱为磺胺异恶唑+四环素两种抗生素及克林霉素+红霉素+磺胺异恶唑+庆大霉素四种抗生素的菌株检出率最高,各有4株;其次为耐克林霉素+红霉素+环丙沙星+四环素的,有3株菌。
  3 讨论与结论
  金黄色葡萄球菌是人畜共患病菌,可引起食物中毒,在美国被列为第五位致病因子[10]。随着抗生素在畜牧业中的大量使用,金黄色葡萄球菌对抗生素的耐药水平越来越高,耐药谱越来越广,多重耐药现象越来越严重[11-14]。猪肉是我国居民生活中的主要肉类食品,2017年山东省监测的360份市售畜禽蛋产品中,猪肉中食源性致病菌的检出率很高,直接影响消费者的健康。
  本研究从山东省6地市采集了300份生猪肉样品,其中38份检出金黄色葡萄球菌,检出率为13.0%。38株菌对红霉素和四环素的耐药率最高,均为65.8%。38株金黄色葡萄球菌中仅有3株为敏感菌,其余均对一种、两种或多种抗生素耐药,其中,耐一种抗生素的有3株,耐两种抗生素的有6株,耐三种抗生素的有8株,耐四种抗生素的有10株,耐五种抗生素的有4株,耐六种抗生素的有4株。
  本试验中分离出的金黄色葡萄球菌菌株对红霉素和四環素的耐药率最高,是由于四环素、红霉素价格低廉,抗菌谱广,被广泛用作防治动物疾病的饲料添加剂[15];对多西霉素和复方新诺明的敏感率较高,这为以后选择有效抗菌药、减少抗生素滥用提供了指导,可为完善猪肉产品致病菌防治体系奠定基础。
  本次抽检猪肉样品的金黄色葡萄球菌检出率较高,多重耐药性也较高,可能是因为夏季病菌繁殖快,交叉污染的概率高,且目前抗生素在畜禽养殖中广泛使用,长时间不合理地使用抗生素极易导致致病菌的耐药性增强、耐药谱扩大。因此,有关部门需要进一步加强猪的饲养、屠宰、加工及销售各环节的监管,降低由此引发的食源性疾病的发生率。
  参 考 文 献:
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