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摘要：牛肝片吸虫病主要在我国中南、东南部等地区流行，严重阻碍了我国养牛业的发展。在一例牛肝片吸虫病的诊治过程中，根据病原体的属性及流行特点，采用临床症状与分子检测相结合的方式对该病进行了诊断，并提出了科学合理的防治方法，以期为临床诊疗该病提供参考。
关键词：牛;肝片吸虫病;诊断;治疗;预防
中图分类号：S858.23 文献标识码：A 文章编号：1007-273X（2021）02-0015-02
牛肝片吸虫病是由肝片吸虫寄生于牛的肝管、胆管内所引起的一种常见寄生虫病[1]。该病主要引起牛消瘦、贫血、异嗜、腹泻、发育不良及生产性能下降等一系列临床症状，严重感染时可直接导致牛死亡[2]。该病流行范围广，全球均有相关报道，多发于多雨且潮湿的夏秋两季，且流行范围较为固定[3]。放牧牛群的感染率高于圈养牛群，某些区域感染率高达100%[4]。目前，我国中南、东南部等地区的牛群饲养模式大多为山地放养，大大增加了牛群感染肝片吸虫的几率，故牛肝片吸虫病已严重阻碍了我国养牛业的发展。因此，在流行区域对该病进行科学合理的诊治和检测，可为今后我国在该病的监测和防控方面提供一定的技术支撑。
1 发病情况
2019年5月26日，湖南省怀化市新晃县某养殖户反映在其所饲养的30余头牛中，有1头犊牛出现异常症状。该牛表现体格消瘦、反应迟钝、精神不振、食欲废绝、毛焦易断，时而腹泻时而便秘等一系列症状。养殖户曾用青霉素、链霉素、恩诺沙星、氟苯尼考等药物进行治疗，病情未得到控制反而愈加严重。笔者现场发现病牛的眼睑、额下、胸腹等部位均出现不同程度的水肿，肝区疼痛拒检。
2 临床证状
该犊牛体温39～40 ℃，早期出现精神沉郁、食欲下降、体格消瘦、毛焦易断，腹泻与便秘交替出现等一系列症状。后期，该病牛的眼睑、额下、胸腹等部位均出现不同程度的水肿，尿液呈黄褐色，可视黏膜苍白;叩诊肝区浊音变大，疼痛敏感。
3 诊断
3.1 初诊
根据该病牛所表现出的一系列临床症状、养殖户用药情况及临床诊断经验初步判定该病为肝片吸虫病。
3.2 实验室诊断
收集该犊牛的新鲜粪便于自封袋中，置于冰盒内，带回实验室进行病原体检查。用粪便DNA提取试剂盒（北京天根生化科技有限公司）提取粪便中的总DNA。将提取的好的DNA样品置于-20 ℃保存备用。
根据已公布的肝片吸虫cox1基因序列（GenBank Number：AB300704），设计一对引物（cox1-F：G TTTAGGTAGTGTTGTTTGGGC;cox1-R：CCCAACAT TATCAACCAGG），以扩增总DNA的cox1基因部分序列。反应体系为50 μL，反应条件为：95 ℃（预热）5 min， 95 ℃（变性）30 s，53 ℃（退火）30 s， 72 ℃（延伸）1 min，共35个循环;最后72 ℃（延伸）5 min。反应完全后，吸取5 μL PCR产物在1.5%琼脂糖上进行凝胶电泳检测，结果显示为阳性。将PCR产物发送至生工生物工程（上海）股份有限公司进行测序，获得cox1基因的部分序列。
将获得的序列在GenBank上进行BLAST搜索分析，发现该序列与已公布的肝片吸虫cox1基因序列（GenBank number：AB300704）相似度为100%，从而确定该病原体为肝片吸虫，确诊该病为肝片吸虫病。
4 治疗
根據确诊结果及该养殖场的用药情况，采用氯氰碘柳胺钠+中药驱虫配伍方式对该病牛进行治疗。清晨空腹时灌喂氯氰碘柳胺钠，剂量为5 mg/kg，1次/d，连用5 d。傍晚归栏时，用绵马、贯众各45 g，槟榔、茯苓、龙胆草各30 g，木通、泽泻、苏木、肉豆蔻、甘草、厚朴各20 g研磨成粉末，混匀加开水搅拌后灌服[5]，1次/d，连用5 d，该犊牛病情好转，2周后基本恢复正常。
5 预防措施
5.1 加强饲养及卫生管理
养殖户在进行饲料配比的过程中，应当注重粗饲料和精饲料的搭配比例，适当增加维生素和矿物质的含量，以提高牛的身体素质，增加抵抗力，同时也要保证牛群的饮水和饲草卫生[6]。及时清扫牛圈，定期对牛圈进行消毒。掌握放牧时间，不在低洼处放牧，以尽量减少牛群感染肝片吸虫的几率。粪便置于一偏僻且低洼处进行堆积发酵。
5.2 定期驱虫
定期驱虫是预防肝片吸虫最有效的方法，每年春秋两季各进行1次驱虫[7]，驱虫后的粪便要置于一偏僻且低洼处堆积发酵[8]。
5.3 消灭中间宿主
肝片吸虫的中间宿主为淡水螺。根据淡水螺的生活属性，在牧区内使用1∶5 000的硫酸铜溶液对淡水螺进行灭杀[5]。
5.4 加强养殖户的防范意识
每年派兽医技术人员深入养牛、养羊专业户，讲解牛羊肝片吸虫病的防疫知识[5]。提倡养殖户通过自学等方式来提高对肝片吸虫病的诊治水平及防范意识。
6 小结
牛肝片吸虫病是牛体内一种常见寄生虫病，主要引起牛消瘦、贫血、异嗜、腹泻、发育不良及生产性能下降等一系列临床症状，严重阻碍了我国养牛业的发展。牛轻度感染时一般不会表出明显的临床症状，导致养殖户常常忽略该病的存在及危害性。传统的检测技术操作过于繁琐，造成诊治过程不方便，而利用分子检测技术不仅可克服传统检测技术的缺陷，还大大提高了检测结果的准确性，为养殖户对该病的诊断和治疗提供了便捷有效的途径。此外，本文所采用的诊断和防治方法也可为今后的临床诊疗提供技术参考。
参考文献：
[1] 郝教欣.牛肝片吸虫病的防治措施[J].畜禽业，2018，29（8）：112-113.
[2] 孙 丽，谭 艳.肉牛肝片吸虫病的临床症状、实验室检查与防治措施[J].现代畜牧科技，2017（11）：126.
[3] 魏彩艳.牛肝片吸虫病的防治[J].养殖与饲料，2019（2）：55-56.
[4] 曹仁山，赵克华，罗进昌，等.浅谈牛肝片吸虫的防治措施[J]. 畜禽业，2015（4）：73.
[5] 张友亮.一例水牛肝片吸虫病的诊治体会[J].福建畜牧兽医，2019，41（3）：51-52.
[6] 王玉龙.一例牛肝片吸虫病的诊治[J].当代畜禽养殖业，2018（6）：35.
[7] 马晓鹏.牛肝片吸虫病防治[J].中国畜禽种业，2017（10）：109.
[8] 朱义能，唐贵才.牛肝片吸虫病的防治[J].养殖与饲料，2015（10）：54-55.
