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气相色谱质谱法测定猪肉中氯丙嗪残留量的研究

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  摘要 运用气相色谱质谱法(GC/MS)测定猪肉中残留的氯丙嗪。猪肉中残留的氯丙嗪经乙酸乙酯提取,正己烷脱脂,C18柱净化,氨化乙酸乙酯洗脱。采用EI电离源方式进行选择离子扫描(SIM),选择离子为86、233、272和318。测定猪肉中残留量的检测限为1ng/g(S/N>3),线性范围为1~1 000ng/g,添加回收率为70.00%~86.30%,相对标准偏差(n=5)为3.97%~5.04%。
  关键词 氯丙嗪;气相色谱质谱法;猪肉
  中图分类号 S828.9文献标识码A文章编号1007-5739(2008)14-0203-01
  
  氯丙嗪是吩噻嗪类药物,为中枢多巴胺受体的阻断剂,作用于中枢神经系统,具有催眠、麻醉等多种药理作用,兽医临床上主要被用作镇静药。近年来,一些不法商在饲料中私自添加氯丙嗪,达到镇静、催眠之效果,从而间接起到催肥促生长作用,造成氯丙嗪在畜产品中残留。氯丙嗪在体内主要通过肝脏代谢,大部分从尿中排除,易产生体内蓄积残留。目前,对于猪肉中氯丙嗪的残留测定研究较少,尚不能满足对于畜产品质量安全的检测需要。本研究运用气相色谱质谱法测定猪肉中氯丙嗪残留量,为今后的测定提供科学依据。
  
  1材料与方法
  
  1.1仪器和设备
  气质联用仪(Agilent5973i)、高速冷冻离心机(日本)、氮吹仪(美国)、旋转蒸发仪(上海亚荣生化仪器厂)、超声波清洗机(江苏昆山市超声仪器有限公司)。
  1.2试剂
  本法所用试剂均为分析纯(除非另有说明)。氯丙嗪,中国药品生物制品检定所;乙腈:色谱纯;乙酸乙酯:色谱纯;正己烷、氢氧化钠、氨水、乙酸乙酯;SPE柱:C18,100mg/mL,美国Varian。
  1.3测定条件
  1.3.1气相色谱条件。色谱柱:HP-5MS 5%苯基甲基聚硅氧烷,30m×0.25mm(内径),0.25μm(膜厚);进样口温度:250℃;进样方式:不分流;进样体积:2μL;柱温程序:80℃保持1min,15℃/min升温至270℃;2℃/min升温290℃,保持5min;载气:氦气,纯度>99.995%,流速:0.8mL/min(恒流)。
  1.3.2质谱条件。离子源:EI源;溶剂延迟:12min;传输线温度:280℃;离子源温度:200℃;四极杆温度:160℃;选择离子监测(M/Z):86、233、272、318。
  1.4样品提取
  称取4.0±0.05g匀浆后的猪肉置离心管中,依次加入20mL乙酸乙酯和1mL氢氧化钠溶液(1mol/L),10 000rpm均质1min,振荡15min,5 000rpm离心5min。取上清液转入旋转蒸发瓶,试样中再加10mL乙酸乙酯,重复提取1次。合并2次上清液,50℃水浴旋转蒸干。用2mL乙腈超声溶解残渣,加入4mL正己烷涡旋1min,3 000rpm离心5min,弃去上层正己烷,待用。
  用2mL乙腈淋洗SPE柱,精密量取待用的上述提取液1mL过SPE柱,弃去流出液,用1mL水淋洗SPE柱,抽干。加2%氨化乙酸乙酯(V∶V=2∶98)2mL洗脱,收集洗脱液,50℃氮气吹干,加0.2mL乙酸乙酯溶解,混匀。
  1.5样品测定
  1.5.1标准工作曲线。称取氯丙嗪用乙酸乙酯超声溶解成100μg/mL的储备液,取氯丙嗪储备液,用乙酸乙酯稀释成浓度为10ng/mL、20ng/mL、50ng/mL、100ng/mL、200ng/mL、1 000ng/mL的标准工作液,供气相色谱质谱仪分析。
  1.5.2回收率和变异系数的计算。取空白猪肉各4g,添加浓度分别为1.0ng/g、5.0ng/g、10.0ng/g,按1.4处理后进行气相色谱质谱仪分析,每种浓度5个平行样,同时作空白样品测定。计算回收率及平行样品间的变异系数。
  1.5.3灵敏度、准确度和精密度的测定。分别添加浓度为1ng/g、5ng/g、10ng/g的阳性对照样品,每组重复设置5个,连续测定5d,分别测定含量,计算日内和日间变异系数。
  
  2结果与分析
  
  2.1提取液的选择
  氯丙嗪易溶于乙腈、甲醇和乙酸乙酯。本试验分别设计用甲醇、乙腈、乙酸乙酯为提取液。结果发现,用乙酸乙酯作为提取液回收率高于甲醇和乙腈。因猪肉含有一定的脂肪和其他基质,采用正己烷脱去脂肪,经C18小柱进行净化、分离,用2%氨化乙酸乙酯把富集在固相萃取小柱上的氯丙嗪洗脱下来,氮气吹干后,乙酸乙酯溶解,待用。
  2.2优化色谱和质谱条件
  为了提高检测灵敏度,本方法选择EI离子源,采用选择离子监测方式,分别是86、233、272和318。其中318是氯丙嗪的分子离子峰,272是氯丙嗪分子离子峰失去N(CH3)2的产物[M-N(CH3)2],氯丙嗪的环N去烷基代谢物分别产生233[M-C5H11N]和86[C5H12N]。根据氯丙嗪的气化温度,采取程序升温方式,提高检测灵敏度;载气的流速设定为0.8mL/min,使氯丙嗪的出峰时间较晚,达到更好的色谱分离效果。
  2.3线性范围和检出限
  依次测定标准工作液10ng/mL、20ng/mL、50ng/mL、100 ng/mL、200ng/mL、1000ng/mL,绘制标准工作曲线及回归方程,以氯丙嗪溶液浓度(ng/mL)X与其所得峰面积(A)Y作标准曲线图,线性范围为1~1 000ng/mL,回归方程为A=45.499*C-304.92,相关系数R=0.999 5。
  2.4灵敏度、准确度和精密度
  依据3倍信噪比峰高,检测限为1ng/g。回收率与变异系数的测定结果见表1、表2。
  猪肉中添加氯丙嗪标准品的总离子图和标准谱图见图1、图2。
  
  3结论
  
  在本方法设定色谱条件下,氯丙嗪的出峰时间约为15.59min。该方法的灵敏度高,检测限可达到1ng/g,日内、日间变异系数均低于15%,符合残留分析对精密度的要求。
  4参考文献
  [1]陈杖榴.兽医药理学[M].北京:中国农业出版社,2002.
  [2]贺江南,雷丽红.固相微萃取―气相色谱法检验盐酸氯丙嗪[J].光谱实验室,2002,19(6):751-753.
  注:“本文中所涉及到的图表、注解、公式等内容请以PDF格式阅读原文。”

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