木霉与杀菌剂对碧玉疫病菌的活性研究
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摘 要：为探明木霉菌与药剂联用对碧玉疫病菌的抑制效果，本文采用对峙培养法测定了哈茨木霉（Trichoderma huzirum）与绿色木霉（T. virid）对碧玉疫病病菌的抑制作用;采用含毒质培养法测试了几种杀菌剂对木霉的相容性;采用离体叶片法测试了木霉与杀菌剂联合对病菌的抑制作用。结果表明：2种木霉对碧玉疫病菌均有较好抑制作用，对峙培养后72h的相对抑制效果分别为59.91%和54.31%;5种药剂对比中，双炔酰菌胺均与2种木霉的表现较高的相容性，EC50分别为5985.38g·mL-1和4604.5SymbolmA@ g·mL-1，烯酰吗啉次之;2种木霉与烯酰吗啉联合对碧玉疫病在预防和治疗作用中均取得较好抑制效果，抑制作用抑菌率最高达到85.78%，预防作用中抑菌率最高为90.52%。哈茨木霉或绿色木霉对碧玉疫病菌具有一定抑制作用和预防作用，与烯酰吗啉联用，毒力可得到明显提高，抑制和预防效果比单独使用木霉或药剂要好。
关键词：木霉;杀菌剂;碧玉疫病;联合抑制
中图分类号：S436.8 文献标识码：A
DOI：10.19754/j.nyyjs.20201030012
碧玉（Peperomia tetraphylla （Forst. f.）Hook.et Arn.）为胡椒科植物，属常绿多年生草本植物，叶片肥厚。目前在中国，广东等地区已经开始大量生产，在各处花卉市场均能见到。碧玉植株高25cm以上，叶互生，基部楔形或突然变狭，穗状花序，圆形至倒卵状卵圆形，先端圆至微凹，果实具锐尖盘曲的喙[1]。碧玉疫病一直是碧玉一种危害严重的疾病。近年来，广州地区的这种情况逐渐加剧，造成了严重地品质和产量损失。由于碧玉疫病抗病性育种的困难性大，农药防治仍然是短时间内防治碧玉疫病的首选方法。在继续利用好现有的杀菌剂来控制疫病的同时，应大力发展新型、高效、低残留的杀菌剂和生物源杀菌剂。
为观赏植物的养护和保护提供有益参考，改善观赏植物病害的防治措施，本试验测试了绿色木霉和哈茨木霉对碧玉疫病的拮抗效果，并选择对木霉菌相容性较好的杀菌剂进行协同使用，測试其联合的抑制作用和预防作用。
1 材料与方法
1.1 供试材料
1.1.1 病原菌
自广州市白云区钟落潭镇白云现代农业示范基地感病碧玉上分离并保存，经鉴定为疫霉菌（Phytophthora.sp）。
1.1.2 木霉菌
哈茨木霉（Trichoderma huzirum）和绿色木霉（Trichoderma virid）均购自山东绿陇生物科技有限公司。
1.1.3 供试药剂及浓度
80%三乙膦酸铝WP（利民化工股份有限公司），68%精甲霜·锰锌WDG（瑞士先正达作物保护有限公司），50%醚菌酯（翠贝）WDG（德国巴斯夫公司），23.4%双炔酰菌胺SC（先正达南通作物保护有限公司），50%烯酰吗啉WP（巴斯夫欧洲公司）。
1.2 试验方法
1.2.1 木霉对碧玉疫病菌的抑制作用
试验采用对峙培养法，参考牛胜芳[2]等采用的方法，取活化后直径为5mm的碧玉疫病菌菌饼和木霉菌菌饼，分别接种于PDA平板距中心2cm处同一直线的两点上，对照只接木霉菌或碧玉疫病菌，每个处理3个重复，于28℃恒温培养，处理后48h和72h后分别测量疫霉菌和哈茨木霉菌落连线的半径。
被抑菌率（%）=[（对照菌落半径-菌落趋向半径）/单独培养菌落半径]100[2]
相对抑菌率（%）=（病原菌被抑制率/木霉菌被抑制率） 100[3]
1.2.2 5种杀菌剂与2种木霉菌的相容性
采用菌丝生长速率法[4]，准确量取各供试药剂母液，分别以无菌水配制供试浓度50倍药液，取1mL稀释后药液加入冷却至约50℃的49mL定量PDA中，混匀后制成含药平板，在平板中央接种一个木霉菌饼，每浓度重复3次，以无菌水处理为对照（CK）。28℃恒温培养2d，用十字交叉法测量菌落直径，计算毒力回归方程、EC50和相关系数。
1.2.3 木霉与烯酰吗啉对碧玉疫病菌协同抑制作用
采用离体叶片法[4]测定木霉菌与杀菌剂联合对碧玉疫病菌的抑制作用。用清水按照木霉制剂的推荐浓度分别稀释为哈茨木霉100倍液、300倍液和绿色木霉200倍液、600倍液;烯酰吗啉按照推荐浓度配制稀释浓度为500g·mL-1、333.3g·mL-1备用。选取新鲜并且长势旺盛的碧玉叶片，用手持喷雾器均匀地将菌悬液喷雾喷至叶片背面，用脱脂棉包裹叶柄保湿，置于铺有滤纸保湿的培养皿中，晾干后25℃恒温箱中恒温培养1d。将处理后分为2部分，部分叶片背面分别均匀喷雾不同浓度的药液，放入培养皿中晾干，然后在叶片背面叶脉处接种3个疫霉病菌菌饼，做保护作用试验;其余叶片背面叶脉处接种3个疫霉病菌菌饼，于25℃恒温培养箱1d，而后分别均匀喷洒不同浓度的药液于叶片背面，放入培养皿中晾干，做治疗作用试验。以清水处理、单独用药液和木霉菌悬液处理的叶片为对照，每个浓度重复3次。所有处理均于25℃培养3d，用十字交叉法测量菌落直径，计算抑制率。
1.2.4 数据处理及分析
本试验的数据采用EXCEL 2010进行计算。
3 结果与分析
3.1 木霉菌对碧玉疫病菌的抑制作用
2种木霉菌对碧玉疫病菌均有抑制作用（表1），相对抑制效果随时间增加而增大，处理72h后，2种木霉对碧玉疫病菌的抑制率分别为36.26%和34.16%，相对抑制效果分别为59.91%和54.31%，绿色木霉效果更好。
3.2 杀菌剂对木霉的相容性 几种杀菌剂对2种木霉相容性测定结果（表2）表明，醚菌酯对哈茨木霉毒性低，而SymbolmA@ g·mL-1。
3.3 木霉和烯酰吗啉对碧玉疫病菌的协同防治作用
选择木霉敏感性中等的烯酰吗啉为供试药剂，与2种木霉对碧玉疫病菌联合抑菌作用，结果见表3。单用2种木霉制剂或药剂的预防作用优于治疗作用，抑制均达到80%以上，木霉制剂和烯酰吗啉联用对病菌的防效高于单用药剂的防效，且预防作用优于治疗作用，高浓度药剂联用的预防作用的防效达到90.52%，而治疗作用的防效达到85.78%。低浓度联用木霉和药剂的预防作用防效稍优于高浓度单用药剂的预防作用防效，但治疗作用防效不及高浓度单用药剂的治疗作用防效。
4 结论与讨论
木霉是植物病害防治中应用和研究非常广泛的一类生防真菌，能够有效抑制多种植物病原菌，利用其制剂进行病虫害防治具有对推广生物防治和减少化学农药残留对环境的污染等重要意义[5]，对于马铃薯、辣椒、黄瓜等多种植物疫病具有抑制作用[6-8]。疫霉菌不仅会侵染蔬菜从而造成危害，还可危害百合、兰花、蟹爪兰、白掌等花卉植物[9，10]。木霉菌对辣椒疫霉菌和烟草疫霉菌的生长具有抑制作用[11，12]，哈茨木霉对辣椒疫霉菌菌丝的平均抑制率达69.1%[13];郭敬[14]等试验证明哈茨木霉可与烯酰吗啉联合施用防治烟草黑胫病。生防菌不仅可以抑制病原菌的生长，而且有促进植物生长的作用;但受环境条件、使用方法等影响，防效不稳定[14]。本文研究结果表明：2种木霉菌对碧玉疫病具有一定抑制作用，绿色木霉处理后72h的抑菌率最高达36.26%，相对抑制效果为59.91%，稍好于哈茨木霉;烯酰吗啉对2种木霉菌均有较好的相容性。为提高抑菌效果，降低使用化学药剂的使用量，达到一定程度保护环境的目的，利用离体叶片法测试了木霉与烯酰吗啉联合抑菌作用，联用条件下，高浓度使用下的预防作用的防效达到90.52%，优于治疗作用的防治效果，且明显高于高浓度单用药剂的效果，表明具有明显正协同作用。此外，低浓度联用木霉菌合药剂的防效达到甚至优于高浓度单用药剂的效果。本文试验结果证明，烯酰吗啉可以和供试生防菌株联合施用防治碧玉疫病，为碧玉疫病的防治提供了一个选择。
参考文献
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（责任编辑 周康）
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