不同杀菌剂对除虫菊根腐病菌的室内毒力测定

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　　摘要    为筛选出防治除虫菊根腐病菌的有效药剂，采用菌丝生长速率法测定了10种杀菌剂对除虫菊根腐病菌的主要致病菌——镰刀菌GF4的室内抑菌效果。结果表明，供试的10种杀菌剂对镰刀菌GF4均有一定的抑制作用。其中，微生物杀菌剂100亿CFU/g枯草芽孢杆菌可湿性粉剂（美国拜沃）对镰刀菌GF4的室内毒力最强，EC50值为1.40×10-6 mg/L;其次是100万孢子/g寡雄腐霉菌可湿性粉剂，EC50值为0.003 9 mg/L;化学农药80%多菌灵可湿性粉剂也表现出较强的室内抑制效果，EC50值为51.634 6 mg/L。该研究筛选出了能有效抑制镰刀菌GF4菌丝生长的生物农药，用量少且毒性低，为除虫菊根腐病的田间防治提供了基础研究。
　　关键词    除虫菊;根腐病;镰刀菌;室内毒力测定
　　中图分类号    S482.2        文献标识码    A
　　文章编号   1007-5739（2020）08-0096-02                                                                                     开放科学（资源服务）标识码（OSID）
　　除虫菊（Chrysanthemum cinerariaefolium）为菊科菊蒿属植物，是迄今为止世界上少数几种能够集约化种植的杀虫植物[1]，从中提取的除虫菊素（酯）被公认为安全有效的植物源杀虫剂。20世纪末，除虫菊被引种到云南省玉溪、曲靖、红河等地种植。经过近20年的发展，云南省已成为继东非和澳大利亚之后的第三大除虫菊产区。随着规模化种植和面积的不断扩增，除虫菊病害日益突出，但目前国内在病虫害研究和药剂防治方面几乎处于空白状态。关于除虫菊病原菌的研究，国内目前只见除虫菊茎腐病原菌为4种镰孢菌的报道[2]。
　　除虫菊根腐病是除虫菊规模化育苗和种植中出现的主要病害之一，该病使植株根部变褐、腐烂，植株萎蔫，严重的导致整株死亡。本次试验从云南峨山甸中除虫菊育苗基地采集除虫菊根腐病菌幼苗，带回实验室进行病原菌分离、培养鉴定，获得一株镰刀菌，命名为GF4，且经过科赫法则回接确定为除虫菊根腐病的主要致病菌之一。镰刀菌通常为根腐病的致病菌，郝向阳等就从福建非洲菊产区分离到非洲菊根腐病原菌主要为尖孢镰刀菌、隐地疫霉[3]，镰刀菌还是引起黄瓜、番茄、枸杞、太子参等植物根腐病的病原菌[4-7]。
　　1    材料与方法
　　1.1    试验材料
　　供试菌株为实验室保存的镰刀菌GF4。该菌株从除虫菊幼苗根腐病根上分离，根据分生孢子类型初步鉴定为镰刀菌，由云南南宝生物科技有限公司微生物实验室保存備用。
　　供试药剂有①化学杀菌剂：70%嘧霉胺水分散粒剂（山东一览科技有限公司）、20%腐霉利悬浮剂（江西禾益化工股份有限公司）、80%多菌灵可湿性粉剂（江苏仓泰农化有限公司）;②植物源杀菌剂：10%硫酸小檗碱水剂（云南南宝生物科技有限公司）、1%蛇床子素微乳剂（云南南宝生物科技有限公司）;③微生物杀菌剂：2亿活孢子/g木霉菌可湿性粉剂（山东泰诺药业有限公司）、100亿CFU/g枯草芽孢杆菌可湿性粉剂（美国拜沃股份有限公司）、100亿CFU/g枯草芽孢杆菌可湿性粉剂（德强生物股份有限公司）、1 000亿CFU/g枯草芽孢杆菌可湿性粉剂（河北中保绿农股份有限公司）、100万孢子/g寡雄腐霉菌可湿性粉剂（捷克生物制剂有限公司）。以上药剂均为市购。
　　1.2     试验方法
　　采用菌丝生长速率法[8]测定。在预试验的基础上，将1.1中的10种供试药剂制成一定浓度的母液，然后按照一定浓度和比例加入到灭菌的50～60 ℃ PDA培养基中，制成一定梯度的含药PDA平板培养基。用5 mm打孔器在预培养好的病原菌边沿打取菌饼，接种到含药培养基平板中央，将有菌丝面贴于培养基上，每个浓度设4个重复，以不含药剂加等量无菌水的培养基为对照（CK）。在25 ℃恒温培养箱中培养6 d，采用十字交叉法测量菌落直径并记录。根据以下公式计算抑制率：
　　将生长抑制率换算成抑制几率值作为因变量（y），将药剂浓度的对数值作为自变量（x），利用DPS 7.05软件求出各药剂的毒力回归方程、相关系数r和有效抑制中浓度EC50值及EC90值。根据EC50值和EC90值，比较各药剂对该菌生长的影响，筛选出用量低且抑制率高的农药制剂。
　　2    结果与分析
　　2.1    不同杀菌剂对镰刀菌GF4菌丝生长的影响
　　由表1可以看出，供试药剂对除虫菊根腐病菌GF4均有一定的抑制作用，但不同杀菌剂之间抑菌效果相差较大。各药剂在设置浓度范围内，随着药剂浓度的降低，药剂对镰刀菌GF4的抑制率也逐渐降低。在选取的化学杀菌剂中，80%多菌灵可湿性粉剂表现出相对较好的抑菌效果，在高剂量1 000 mg/L情况下抑制率为100%;而20%腐霉利悬浮剂和70%嘧霉胺水分散粒剂对镰刀菌GF4的抑制率较差，在高剂量1 000 mg/L情况下，抑制率分别仅为56.38%、69.15%。选取的2种植物源农药对镰刀菌GF4抑制效果均较差，在高剂量2 500 mg/L情况下，10%硫酸小檗碱水剂和1%蛇床子素微乳剂对镰刀菌GF4的抑制率分别为48.94%、61.70%。微生物杀菌剂中，3个厂家的枯草芽孢杆菌和寡雄腐霉菌可湿性粉剂的抑制效果均较强，即使在低剂量0.1 mg/L的情况下，抑制率仍在60%以上，只有2亿活孢子/g木霉菌可湿性粉剂表现的杀菌效果相对较差，高剂量1 000 mg/L情况下，抑制率为72.34%。综上所述，10种杀菌剂中，对镰刀菌GF4杀菌效果较好的药剂有枯草芽孢杆菌可湿性粉剂、寡雄腐霉菌可湿性粉剂，其次是化学药剂80%多菌灵可湿性粉剂，而其他几种药剂抑制效果相对较差。 　　2.2    不同杀菌剂对镰刀菌GF4的室内毒力测定
　　由表2可以看出，供试的10种农药对镰刀菌GF4均有一定的毒力，但毒力差异较大。从各药剂的EC50值和EC90值可以看出，枯草芽孢杆菌可湿性粉剂和寡雄腐霉可湿性粉剂表现出对镰刀菌GF4较强的室内毒力。美国拜沃公司的100亿CFU/g枯草芽孢杆菌可湿性粉剂对镰刀菌GF4的室内毒力最强，EC50值和EC90值均最小，分别为1.40×10-6 mg/L和2.217 0 mg/L;其次是德强生物公司的100亿CFU/g枯草芽孢杆菌和捷克生物公司的100万孢子/g寡雄腐霉可湿性粉剂，其EC50值分别为0.000 2、0.003 9 mg/L，EC90值分别为6.063 8、26.521 3 mg/L;中保绿农公司的1 000亿CFU/g枯草芽孢杆菌可湿性粉剂的EC50值为0.001 5 mg/L，但EC90值高达137.146 6 mg/L，EC90值较其他2种枯草芽孢杆菌可湿性粉剂要高;80%多菌灵可湿性粉剂的EC50和EC90值分别为51.634 6、147.784 3 mg/L;2亿活孢子/g木霉菌可湿性粉剂和其他2种化学药剂及2种植物源农药的EC50值和EC90值均较大，表明对镰刀菌GF4毒力作用不明显。总之，3个厂家的枯草芽孢杆菌可湿性粉剂和捷克生物公司100万孢子/g寡雄腐霉可湿性粉剂对镰刀菌GF4的室内毒力较强，80%多菌灵可湿性粉剂次之，70%嘧霉胺水分散粒剂和木霉菌可湿性粉剂防效一般，腐霉利、硫酸小檗碱和蛇床子素防效差。
　　3    结论与讨论
　　试验采用菌丝生长速率法对常用杀菌剂多菌灵、枯草芽孢杆菌、蛇床子素等10种药剂对除虫菊根腐病菌主要病原菌（镰刀菌GF4）进行了室内毒力测定，结果表明，枯草芽孢杆菌可湿性粉剂、寡雄腐霉可湿性粉剂对镰刀菌GF4有非常高的抑制率，而且随着药剂浓度的降低，抑制率降幅小，在低劑量0.1 mg/L的情况下，抑制率仍在60%以上，这与滕 朕等研究的生物农药对人参立枯病菌的结果一致[9]。
　　试验还发现，低于1 000 mg/L剂量时，选取的微生物杀菌剂枯草芽孢杆菌、寡雄腐霉对致病镰刀菌GF4的抑制率高于化学药剂多菌灵、嘧霉胺和腐霉利。越来越多的研究表明，枯草芽孢杆菌菌剂的杀菌效果优于某些化学农药[10-11]。长期以来，植物病害的防治以化学农药为主，但由于长期不合理使用化学农药产生了农药残留、抗性等问题。近年来，随着人们对食品安全意识的提高，生物农药的开发越来越受重视。枯草芽孢杆菌具有繁殖速度快、抗菌谱广、抗逆性强等优点，是微生物农药中登记和应用最多的一类微生物杀菌剂，已被成功用于多种病害的生物防治[10，12-13]。
　　本试验筛选出了对镰刀菌GF4的室内抑菌效果较好的 微生物农药枯草芽孢杆菌可湿性粉剂和寡雄腐霉菌可湿性粉剂，为进一步开展田间药效试验提供了基础研究。此2种微生物药剂对除虫菊根腐病菌的田间防效是否稳定，仍需下一步大田试验验证。
　　4    参考文献
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