葡萄胎恶变相关因素的探讨及瘦素在妊娠滋养细胞疾病中表达的临床意义
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作者: 郑兆祥 康丽
[摘要] 目的 通过测定瘦素（LEP）在不同类型滋养细胞疾病中的表达，探讨其预测葡萄胎恶变和转移的可能性；并对葡萄胎恶变相关因素进行分析，以提高对葡萄胎预后的判断。 方法 应用过氧化物酶免疫组织化学方法对30例正常早孕（<12周）绒毛组织、32例部分性葡萄胎、93例完全性葡萄胎、30例侵蚀性葡萄胎、5例绒毛膜癌组织中LEP进行检测。分析7例发生恶变的葡萄胎患者的发病年龄、子宫大小、卵巢黄素囊肿、血β—人绒毛膜促性腺激素（hCG）等因素。 结果 LEP在正常早孕绒毛组织、部分性葡萄胎、完全性葡萄胎、侵蚀性葡萄胎、绒毛膜癌组织中均有表达，表达阳性率与病变程度呈正相关（χ2=23.49，P < 0.05）。 结论 LEP与正常早孕滋养细胞的侵袭过程有关，LEP在滋养细胞疾病组织中表达的强度，与滋养细胞恶性程度的强度有关，对临床早期预测葡萄胎的恶变及预防性化疗有一定的参考意义。葡萄胎恶变还与患者发病年龄、β—hCG水平、子宫大小、卵巢黄素囊肿等因素有关。
[关键词] 葡萄胎；瘦素；妊娠滋养细胞肿瘤；恶变
[中图分类号] R737.33 [文献标识码] A [文章编号] 1674—4721（2012）09（a）—0111—02
葡萄胎是一种来源于胎盘滋养细胞的良性疾病，但具有生长活跃及潜在恶变的特点，能恶变为侵蚀性葡萄胎和绒毛膜癌。目前普遍认为不应将预防性化疗作为常规应用于所有葡萄胎患者，而只对有恶变倾向者给予预防性化疗。因此，需要一种理想的指标来预测葡萄胎的恶变。近年研究发现，瘦素（LEP）除了刺激下丘脑饱食中枢调控动物的摄食行为和脂肪代谢外，还具有促进细胞增殖分化，增加细胞的侵袭性，促进血管形成，调节机体免疫和强大的生殖调节功能，有可能在某种因素影响下刺激滋养细胞过度增生和异常分化，介导血管生成等作用，并参与滋养细胞疾病的发生发展。本研究探讨葡萄胎恶变相关因素及检测LEP在妊娠滋养细胞疾病中表达情况，探讨其在预测葡萄胎恶变中的价值。
1 资料与方法
1.1 一般资料
2000年6月～2011年6月本院收治妊娠滋养细胞疾病患者170例，发病年龄22～46岁。其中，葡萄胎125例（包括部分性葡萄胎32例，完全性葡萄胎93例），侵蚀性葡萄胎30例，绒毛膜癌15例。对葡萄胎患者进行1～2年随访，恶变7例。另选取正常早孕（<12周）绒毛30例作为对照。
1.2 试剂
兔抗人瘦素多克隆抗体 Leptin（BS—0108R）SP 试剂盒、DAB 显色试剂盒、封闭用正常兔血清均购于北京博奥森生物有限公司。
1.3 方法
对170例妊娠滋养细胞疾病组织蜡块切片采用免疫组织化学方法（SP法）检测，观察LEP的表达情况，实验操作步骤按试剂盒说明书进行。并分析7例发生恶变的葡萄胎患者的发病年龄、子宫大小、卵巢黄素囊肿、血β—人绒毛膜促性腺激素（hCG）等因素。
1.4 结果判定
LEP蛋白均为胞浆内充满棕黄色颗粒，判断阳性采用半定量标准，以双盲法进行评分。每张切片随机观察 10 个有代表意义的高倍视野，每个视野计数 100 个细胞中的阳性细胞数，取平均值作为结果。表达阴性和阳性根据细胞染色强度和染色细胞所占面积，即两者积分之和来判断。染色强度分为：不染色为 0，轻度染色为 1，中度染色为 2，强度染色为 3。染色面积分为：无细胞染色为 0，< 25%细胞染色为1，25%～50%细胞染色为2，> 50%细胞染色为 3。二者积分之和为 0～2为表达阴性，两者积分之和 > 2为阳性。
1.5 统计学方法
应用SPSS 10.0软件进行统计分析，等级资料用秩和检验，以P < 0.05为差异有统计学意义。
2 结果
LEP在正常早孕绒毛、部分性葡萄胎、完全性葡萄胎、侵蚀性葡萄胎、绒毛膜癌组织中均有表达，但随着滋养细胞恶性程度的增加，其染色阳性的细胞数量及表达强度（+～+++）均增加，并且其阳性部位有从滋养细胞层逐步转移至合体滋养层的现象，差异有统计学意义（χ2=23.49，P < 0.05）。见表1、2。
7例发生恶变的葡萄胎患者中，年龄<25岁2例（28.57%），>40岁4例（57.14%）。β—hCG持续阳性5例（71.43%），持续时间超过14周；β—hCG转阴后又复发阳性2例（28.57%）。子宫明显大于停经月份5例（71.43%）。发生卵巢黄素囊肿6例（85.71%）。病理结果显示，滋养细胞过度增生5例（71.43%）。
3 讨论
滋养细胞是人体极为奇特的细胞，类似于肿瘤细胞，有增殖、分化、侵袭的特点。妊娠滋养细胞疾病，包括葡萄胎及妊娠滋养细胞肿瘤（GTT）。GTT包括侵蚀性葡萄胎、绒毛膜癌及胎盘附着部位滋养细胞肿瘤。形成肿瘤的滋养细胞与正常妊娠的滋养细胞在形态和功能上极为相似。
瘦素（Leptin）是由肥胖基因（ob）编码的调节能量代谢的分泌型蛋白质，由 167个氨基酸残基组成，原来认为主要由白色脂肪组织合成分泌，但随后发现下丘脑、垂体、胃黏膜、骨骼肌、合体滋养细胞、乳腺上皮也可以分泌瘦素，瘦素可以通过内分泌、旁分泌、自分泌的方式作用于多种组织上的特异性受体而发挥作用。瘦素除了刺激下丘脑饱食中枢调控动物的摄食行为和脂肪代谢外，还具有促进细胞增殖分化，增加细胞的侵袭性，促进血管形成，调节机体免疫和强大的生殖调节功能[1—2]，Sierra—Honigmann MR等[3]报道了 Leptin在体外可促进人脐静脉内皮细胞的增殖、迁移和分化，刺激毛细血管芽的形成，在体内可诱导新生血管的形成，证明 Leptin有促进血管生成的作用，以上几点是肿瘤发生发展的必备条件。本免疫组化染色发现，人早孕绒毛组主要在细胞滋养细胞有瘦素表达，随着滋养细胞恶性程度的增加，其阳性部位有从滋养细胞层逐步转移至合体滋养层的现象，提示合体滋养细胞可以产生和分泌瘦素，并与血hCG值存在显著正相关性（r = 0.342，P < 0.05），这与 Senaris R[4]的研究一致。根据当代研究，葡萄胎组，侵蚀性葡萄胎组和绒毛膜癌可能是一种疾病的不同发展阶段，即良性葡萄胎恶变为侵蚀性葡萄胎，而进一步发展为绒毛膜癌[5—6]。本实验发现，瘦素在早孕组、葡萄胎组、侵蚀性葡萄胎组和绒毛膜癌组滋养细胞的表达依次增强，提示这些来源于 GTDs的合体滋养层细胞也能够分泌瘦素，且滋养细胞的恶性生物学行为与瘦素的表达强度之间存在着一定的相关性。本实验有望为滋养细胞疾病的靶向治疗提供新的思路。
[参考文献]
[1] Calle EE，Kodriguezc C，Walker K，et al. Overweight obesity and mortality from cancer in a prospectively studied cohort of US adults[J]. N Eng J Med，2003，348（17）：1625—1638.
[2] 赵玉，黄向华. 瘦素在妇产科的研究进展[J]. 国外医学计划生育/生殖健康分册，2006，25（5）：270—273.
[3] Sierra—Honigmann MR，Nath AK，Murakami C，et al. Biological action of lep tin as an angiogenic factor[J]. Science，1998，281（5383）：1683.
[4] Snaris R，G arcia—Caballero T，Casabiell X，et al. Synthesis of leptin in human placenta[J]. Endocrinology，1997，138（10）：4501.
[5] 宋鸿钊，杨秀玉，向阳. 滋养细胞肿瘤的诊断和治疗[M]. 2版. 北京：人民卫生出版社，2004：6.
[6] 王伊洵，杨秀玉. 滋养细胞疾病[J]. 中国实用妇科与产科杂志，2002， 18（8）：450—451.
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