两面针组培苗规模化生产技术

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　　摘要    为优化两面针组培育苗流程、改善生产工艺，本文总结了一套两面针组培苗规模化生产技术，包括母株培养、培养基准备、外植体采集及处理、无菌芽诱导、继代增殖培养、生根培养、炼苗、移栽、施肥及管护、病虫害防治、苗木出圃、安全措施、档案管理、存在的问题及解决措施等方面内容，以期为两面针组培苗生产提供参考。
　　关键词    两面针;组培苗;规模化生产;组织培养
　　中图分类号    S567.19        文献标识码    B
　　文章编号   1007-5739（2020）15-0090-02                                                                                     開放科学（资源服务）标识码（OSID）
　　两面针（Zanthoxylum nitidum（Roxb.）DC.）为芸香科花椒属植物，是广西的道地中药材品种，药用部位为根，具有行气止痛、活血化瘀、祛风通络等功效，是制作保健牙膏和中成药的主要中药材品种[1-3]，用途广泛，经济效益较好，目前引种繁殖栽培的有2个类型[4]。钦州市林业科学研究所经过多年摸索，在组培育苗研究[5-8]的基础上，优化总结出一套有效生产两面针组培苗的技术流程。
　　1    母株培养
　　选择生长旺盛、无病虫害的优良两面针种质材料种植在大棚中作母株，育苗容器选用规格为16 cm×16 cm以上的大塑料营养袋，基质选用黄心土∶泥炭土∶细河沙=7∶2∶1制成的营养土，于离地面茎高15～30 cm处截断，使其萌发新梢，散射光下继续培育成半木质化枝条。
　　2    培养基准备
　　一是芽诱导培养基，配方为MS培养基+6-BA 0.4 mg/L+IBA 0.2 mg/L+蔗糖30 g/L+琼脂3.5 g/L（J1）;二是芽继代增殖培养基，配方为改良MS培养基+6-BA 0.6～0.8 mg/L+IBA 0.3～0.4 mg/L+蔗糖30 g/L+琼脂3.5 g/L（J2）或改良H+6-BA 0.6～0.8 mg/L+NAA 0.3～0.4 mg/L+蔗糖30 g/L+琼脂3.5 g/L（J3）;三是生根培养基，配方为1/2 MS+ABT6 0.6～0.8 mg/L+NAA 0.3～0.4 mg/L+蔗糖15 g/L+琼脂3.2 g/L（J4）或1/10 MS+NAA 0.5～0.7 mg/L+蔗糖15 g/L+琼脂3.2 g/L（J5）。以上培养基均调至pH值5.6～6.0，分装于广口瓶中，按常规高压灭菌，冷却，备用。改良MS培养基和改良H培养基的FeSO4·7H2O用量分别是MS和H培养基用量的1.5倍。
　　3    外植体采集及处理
　　春季、夏季和秋季，连续晴天3 d以上，于9：00—12：00、15：00—17：00，采集母株上当年萌发的长20～30 cm、无病虫害、生长旺盛的半木质化嫩枝条作为外植体材料;剪掉枝条上的叶片，用洗洁精清洗后，再用自来水冲洗干净;剪成约5 cm长、带2～3个腋芽的茎段，用冷开水浸泡30 min，在超净工作台上将茎段用0.1% HgCl2溶液消毒6 min，无菌水冲洗3次，再用0.1% HgCl2溶液消毒6 min，无菌水冲洗5次。
　　4    无菌芽诱导
　　将消毒好的外植体，在无菌条件下剪成2～4 cm长的茎段或茎尖，垂直或略倾斜接种于芽诱导培养基J1中，放置在培养室用黑布遮盖进行暗培养，培养温度（25±2）℃，相对湿度60%～80%。培养至腋芽开始萌出后掀开黑布，先在100～500 lx弱光下培养7 d后，再置于500～5 000 lx散射光下继续培养，至不定芽长约2 cm。
　　5    芽继代增殖培养
　　待诱导出的腋芽长成1.5～3.0 cm高的丛芽，将丛芽剪切分成2～3个芽的丛芽或单芽，垂直或略倾斜接种到芽继代增殖培养基（J2或J3）上，每个200 mL广口瓶接种丛芽4～5丛。接种后，先在光照强度400～800 lx的弱光下培养10～15 d，再置于光照强度2 000～4 000 lx条件下培养，每天光照时间8～12 h，以自然散射光为主、人工光照为辅。培养温度（25±2）℃，相对湿度60%～80%。继代培养周期25～30 d，继代次数不大于36代。
　　6    生根培养
　　剪取无污染、顶芽明显、芽高3 cm以上、健壮、叶片绿色的单芽苗转接到生根培养基（J4或J5）上，每个200 mL广口瓶接种10株，在400～800 lx弱光条件下培养，每天光照时间为10～12 h。培养15 d左右，长出幼根。
　　7    炼苗
　　生根苗根系长1～2 cm时，移至遮光70%～80%的大棚内自然光下炼苗，先放在光线稍弱的培养架下层炼苗5～7 d，再放到光线较强的培养架上层炼苗5～7 d。
　　8    移栽 　　移栽季节在春、夏、秋三季，移栽场所选在有塑料薄膜及黑网覆盖的大棚内。基质采用黄心土+细河沙+泥炭土（体积比3∶1∶1），育苗容器选用规格为8 cm×12 cm、10 cm×12 cm或12 cm×14 cm的塑料袋。苗木移栽前1 d，基质用0.1%高锰酸钾溶液消毒;移栽前1～4 h，用清水淋透基质。洗苗时，将苗木从瓶子内夹出，用自来水清洗干净粘附于苗木根部的培养基，然后放在盛有少量干净自来水的盆内待移栽，避免折断和损伤芽苗。移栽时，用镊子在基质袋中插孔，将清洗干净的组培苗轻插入孔中。移栽完成后，用喷头浇透定根水，保持棚内相对湿度为70%～90%、温度为10～30 ℃。如温度较低、干燥或光线过强，可搭小拱棚覆盖塑料薄膜，晴天用遮光度70%～85%的遮阳网遮荫，保持幼苗生长温、湿度。
　　9    施肥及管护
　　移栽1周后，每隔7～10 d喷施0.1%叶面肥1次;小苗长出新叶起，每隔7～10 d噴施0.3%～0.5%叶面肥1次;叶片浓绿舒展时，每隔7～10 d增施0.1%～0.2%复合肥（15-15-15）水溶液1次。小苗具4～6片叶、苗高15 cm左右时，移出大棚外炼苗，每隔7～10 d施1次0.3%～0.5%复合肥水溶液和0.2%磷酸二氢钾溶液。
　　10    病虫害防治
　　病害主要有茎腐病、黄化病、焦枯病，移栽初期每隔7 d交替喷施甲基托布津、百菌清、菌毒清、多菌灵等杀菌剂1次进行预防。苗圃地幼苗摆放留有一定空隙，不能太密，同时避免下雨前施肥等，能有效预防茎腐病的发生。虫害主要有蚜虫、尺蠖、玉带凤蝶等，可用艾美乐（吡虫啉）、氯氰菊酯等交替喷施预防。
　　11    苗木出圃
　　11.1    瓶苗出圃
　　生根瓶苗规格：经过室外自然光炼苗15～20 d，每瓶10株健壮芽苗，苗高3～4 cm，出根率达80%以上，根长约1 cm，每株至少保留5片叶片，叶绿色挺拔，茎轴伸长，茎充分木质化，无微生物污染。
　　商品瓶苗包装运输：将检验合格的生根瓶苗清洗干净根部培养基，整齐装入泡沫箱内，并加胶带密封。运输环境温度15～30 ℃，避免阳光直射和剧烈颠簸，路途时间不超过48 h，苗运到目的地后及时移栽。
　　11.2    容器苗出圃
　　容器苗规格：苗高20～50 cm，地径>0.2 cm，生长健壮，叶绿色挺拔，无检疫病虫害。
　　容器苗包装运输：起苗前宜淋足水分，将苗木整齐叠放在编织袋上包捆结实或装入竹筐等容器后再装车，路途时间不宜超过72 h，避免苗木失水或腐烂。若远途运输，车顶须盖篷布遮荫，防止上层苗木失水萎蔫，同时尽量避免车厢内苗木发热。
　　12    安全措施
　　育苗过程中，做好药品安全、压力容器安全、消防安全、紫外线与臭氧防护以及废弃培养液的处理等工作。
　　13    档案管理
　　详细记录和保存生产经营档案，包括种质来源和类型、产地、育苗技术、培育苗木数量和质量、销售去向、销售日期和责任人员等内容。
　　14    存在的问题及解决措施
　　（1）继代培养初期芽黄、不萌发。新诱导出的无菌芽转接后，出现芽黄、不萌发，原因主要是培养基不适宜，可根据不同类型的两面针调整选用J2或J3培养基（J3培养基大量元素用量较J2低）。在适宜的培养基中，芽丛萌发、伸长，通过3次转接，能扩繁至一定数量的芽苗。
　　（2）继代增殖过程中叶呈黄白色、卷曲。该问题主要是由两面针在增殖生长过程中微量元素（FeSO4·7H2O）不足造成。两面针在增殖生长过程中需要较高的微量元素，在培养基中适量增加FeSO4·7H2O的用量，可使部分茎叶逐渐由黄白转为嫩绿色。
　　（3）组培苗在继代过程中出现玻璃化现象。继代苗的叶片较大，每瓶放继代苗的密度要适当，苗与苗之间留有一定空隙;增加自然光照，芽苗转接后弱光培养10 d，移至窗边培养架上自然光培养;夏天温度高，可适当降低生长调节剂浓度。
　　（4）生根培养出根时间长、出根率低。培养温度影响出根时间，冬天温度低，可采用人工加温和适当增加生长调节剂浓度的措施。基本培养基及配方影响组培苗的生根率，不同类型的两面针应分别选用培养基J4和J5。
　　（5）移栽后期大棚外炼苗时叶片褪绿、成活率降低。生根苗移栽后，幼苗在大棚内经遮光、控温培育一段时间，移至大棚外继续自然光培养，苗木叶片褪绿、呈黄白色。解决办法一是大棚炼苗后期要逐渐掀开卷帘通风，二是增施钙镁磷肥。
　　15    参考文献
　　[1] 中华人民共和国药典委员会.中华人民共和国药典：一部[S].北京：化学工业出版社，2005：116-117.
　　[2] 孙世荣，蒋水元，李虹，等.广西两面针种群分布特征[J].福建林业科技，2010，37（2）：78-81.
　　[3] 余丽莹，黄宝优，谭小明，等.广西两面针野生种质资源调查研究[J].广西植物，2009，29（2）：231-235.
　　[4] 孙世荣，柴胜丰，蒋水元，等.不同类型两面针的特性研究[J].北方园艺，2009（5）：236-238.
　　[5] 时群.两面针组培技术试验[J].林业科技开发，2013，27（6）：117-120.
　　[6] 时群，梁刚，蔡林，等.两面针林下栽培技术[J].林业调查规划，2013，38（3）：131-134.
　　[7] 时群，梁刚，蔡林，等.两面针容器育苗技术[J].林业实用技术，2012（5）：32-33.
　　[8] 韦大器，吴红英，何贵整，等.两面针的组织培养和快速繁殖[J].植物生理学通讯，2006（1）：73.
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