翠云草中黄酮类成分的研究

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　　[摘要] 采用大孔吸附树脂、聚酰胺柱、正相硅胶柱、Sephadex LH-20柱色谱以及制备高效液相色谱等分离纯化方法，从翠云草75%乙醇提取物中分离得到9个化合物，根据化合物的理化性质和光谱方法鉴定其结构分别为：滨蓟黄苷（1）、印度荆芥苷（2）、芹菜素-6-C-α-L-吡喃阿拉伯糖-8-C-β-D-吡喃葡萄糖苷（3）、芹菜素-6-C-β-D-吡喃葡萄糖-8-C-α-L-吡喃阿拉伯糖苷（4）、芹菜素-7-O-β-D-吡喃葡萄糖苷（5）、2，3-二氢穗花杉双黄酮（6）、4′-甲氧基穗花杉双黄酮（7）、2，3-二氢-4′-甲氧基穗花杉双黄酮（8），2，3，2″，3″-四氢-4′-甲氧基罗波斯塔双黄酮（9），化合物1～5为黄酮苷类化合物，并且均为首次从卷柏属植物中分离得到，化合物7为首次从翠云草中分离得到。
　　[关键词] 卷柏属;翠云草;黄酮;黄酮苷
　　[收稿日期] 2015-03-12
　　[基金项目] 国家自然科学基金项目（31370370）
　　[通信作者] *邹辉，讲师，Tel：（0731） 88912473，E-mail： zouhui308@163.com
　　[作者简介] 易美玲，硕士研究生，E-mail： 1270943278@qq.com
　　Flavonoids from Selaginella uncinata
　　YI Mei-ling1， SHENG Xi-feng1， XU Kang-ping2， Tan Gui-shan2， ZOU Hui1*
　　（1. Medical College， Hu′nan Normal University， Changsha 410013， China;
　　2. School of Pharmaceutical Sciences， Central South University， Changsha 410013， China）
　　[Abstract] In the current study， nine flavonoids were isolated and purified from 75% ethanol extract of Selaginella uncinata（Desv.） Spring by column chromatographic techniques over macroporous resin， polyamide， silica gel， Sephadex LH-20 and pre-HPLC. On the basis of their physico-chemical properties and spectroscopic data analyses， these compounds were elucidated as cirsimarin（1）， nepitrin（2）， apigenin-6-C-α-L-arabinopyranosyl-8-C-β-D-glucopyranoside（3）， apigenin-6-C-β-D-glucopyranosyl-8-C-α-L-arabinopyranoside（4）， apigenin-7-O-β-D-glucopyranoside（5）， 2，3-dihydroamentoflavone（6）， 4′-O-methylamentoflavone（7）， 2，3-dihydro-4′-O-methyl-amentoflavone（8）， and 2，3，2″，3″-tetrahydron-4′-O-methyl-robustaflavone（9）. Compounds 1-5 belong to flavonoid glycosides and were isolated from the genus Selaginella for the first time.
　　[Key words] Selaginella; Selaginella uncinata; flavonoids; flavonoid glycosides
　　doi：10.4268/cjcmm20151517
　　翠云草为卷柏属植物翠云草Selaginella uncinata（Desv.） Spring的全草，又名蓝地柏、绿绒草，主要分布于我国南方地区，是一种在民间被广泛使用的中草药，具有清热利湿、解毒、消瘀及止血的功效[1]。现代药理研究显示翠云草具有平喘[2]、抗菌[3]、抗病毒[4]、抗缺氧[5]及抗肿瘤[6]等作用，目前文献报道表明翠云草中的主要活性成分为黄酮类成分[7-8]。本实验对翠云草中的黄酮类成分，特别是其中的黄酮苷类成分进行了进一步研究，从中分离并鉴定了9个黄酮类化合物，它们分别是：滨蓟黄苷（1）、印度荆芥苷（2）、芹菜素-6-C-α-L-吡喃阿拉伯糖-8-C-β-D-吡喃葡萄糖苷（3）、芹菜素-6-C-β-D-吡喃葡萄糖-8-C-α-L-吡喃阿拉伯糖苷（4）、芹菜素-7-O-β-D-吡喃葡萄糖苷（5）、2，3-二氢穗花杉双黄酮（6）、4′-氧-甲基穗花杉双黄酮（7）、2，3-二氢-4′-甲氧基穗花杉双黄酮（8），2，3，2″，3″-四氢-4′-甲氧基罗波斯塔双黄酮（9）。
　　1 材料
　　AV-500 MHz超导核磁共振仪（德国Bruker公司）;Finnigan LCQ-Advantage型质谱仪;D101大孔树脂（安徽三星树脂科技有限公司）;HP-20大孔树脂（日本三菱化学）;薄层色谱硅胶GF254和柱色谱硅胶（200～300目）均为青岛海洋化工厂生产;聚酰胺树脂（80～100目）为国药集团生产;Agilent 1200型液相分析色谱仪;Agilent 1100型液相半制备色谱仪;依利特Sinochrom ODS-BP色谱柱（10 mm×250 mm， 10 μm）;凝胶Sephadex LH-20（日本TOYOPEARL TOSOH公司）;试剂均为分析纯或色谱纯。 　　翠云草药材于2009年7月采自湖南省怀化市中方县，由厦门大学李政基教授鉴定为卷柏属植物翠云草S. uncinata的全草，标本（No. 20090710）保存于中南大学药学院。
　　2 提取和分离
　　翠云草全草（20 kg）粉碎后用75%乙醇回流提取（2×2 h），合并提取液浓缩、真空干燥后得提取物2 500 g。提取物拌样上大孔树脂D101柱，分别以H₂O，40%EtOH，70% EtOH，95% EtOH梯度洗脱，得4个部位（水部位，40% EtOH部位，70% EtOH部位，95% EtOH部位）。40% EtOH部位经大孔树脂HP-20柱，以EtOH-H₂O梯度洗脱，得到4个流分A～D，流分B经Sephadex LH-20柱及半制备HPLC（15% ACN-H₂O）得到化合物3（15 mg）和4（21 mg）。流分C经聚酰胺柱色谱，以EtOH-H₂O梯度洗脱，TLC检测后合并得到8个流分（C1～C7），C3经Sephadex LH-20柱色谱和半制备HPLC（20% ACN-H₂O），得到化合物1（13 mg），2（11 mg），5（25 mg）。C6经聚酰胺色谱和半制备HPLC（36% ACN-H₂O），得到化合物6（12 mg）。70 %EtOH部位经正相硅胶柱色谱，以氯仿-甲醇梯度洗脱（100∶0～0∶100），TLC检测后合并得到7个流分（a～f），流分c经聚酰胺柱色谱，以EtOH-H₂O梯度洗脱，TLC检测后合并得到6个流分（c1～c6），c5经Sephadex LH-20柱色谱和半制备HPLC（35% ACN-H₂O），得化合物9（11 mg），流分d经Sephadex LH-20和半制备HPLC（35% ACN-H₂O），得化合物7（27 mg），8（35 mg）。
　　3 结构鉴定
　　化合物1 黄色粉末（MeOH），Molish反应阳性。ESI-MS m/z 475[M-H]-。1H-NMR（DMSO-d6，500 MHz）δ： 12.86（1H，s，5-OH），8.08（2H，d，J=8.5 Hz，H-2′，6′），7.20（2H，d，J=8.5 Hz，H-3′，5′），7.00（1H，s，H-8），6.98（1H，s，H-3），5.40（1H，d，J=4.0 Hz，2″-OH），5.15（1H，br s，3″-OH），5.08（1H，d，J=4.0 Hz，4″-OH），5.04（1H，d，J=7.0 Hz，H-1″），4.60（1H，t，J=5.5 Hz，6″-OH），3.92（3H，s，6-OMe），3.86（3H，s，7-OMe），3.70～3.16（6H，m，H-2″～H-6″）;13C-NMR（DMSO-d6，125 MHz） δ： 182.8（C-4），163.8（C-2），160.8（C-4′），159.2（C-7），153.2（C-9），152.6（C-5），132.4（C-6），128.6（C-2′，6′），124.4（C-1′），117.0（C-3′，5′），105.6（C-10），104.1（C-3），92.2（C-8），60.5（6-OMe），56.9（7-OMe）; 4-O-β-Glc： 100.3（C-1″），73.6（C-2″），77.0（C-3″），70.2（C-4″），77.6（C-5″），61.1（C-6″）。以上波谱数据与文献报道一致[9]，确定化合物1为滨蓟黄苷（cirsimarin）。
　　化合物2 黄色粉末（MeOH），Molish反应阳性。ESI-MS m/z 477[M-H]-。1H-NMR（DMSO-d6，500 MHz） δ： 7.43（1H，d，J=8.5 Hz，H-6′），7.42（1H，s，H-2′），6.96（1H，s，H-8），6.91（1H，d，H-5′，J =8.5 Hz），6.70（1H，s，H-3），5.13（1H，d，J=7.0 Hz，H-1″），3.78（7-OMe），3.75～3.20（6H，m，H-2″～6″）; 13C-NMR（DMSO-d6，125 MHz） δ： 182.6（C-4），164.9（C-2），156.9（C-7），152.9（C-5），150.4（C-9），150.3（C-3′），146.2（C-4′），133.0（C-6），121.9（C-1′），119.6（C-6′），116.4（C-5′），114.0（C-2′），106.2（C-10），103.2（C-3），94.7（C-8），60.8（7-OMe）; 7-O-β-glc： 100.6（C-1″），73.6（C-2″），77.1（C-3″），70.0（C-4″），77.7（C-5″），61.1（C-6″）。以上波谱数据与文献报道一致[10]，确定化合物2为印度荆芥苷（nepitrin）。
　　化合物3 黄色粉末（MeOH），Molish反应阳性。ESI-MS m/z 563[M-H]-。1H-NMR（DMSO-d6，500 MHz） δ： 13.82（1H，s，5-OH），8.11（2H，d，J=8.5 Hz，H-2′，6′），6.90（2H，d，J=8.5 Hz，H-3′，5′），6.78（1H，s，H-3），4.71（1H，d，J=7.0 Hz，H-1″），4.70（1H，d，J=7.0 Hz，H-1），3.23～3.89（11H，m，H-2″～5″，H-2～6）;13C-NMR（DMSO-d6，125 MHz） δ： 182.0（C-4），163.7（C-2），161.1（C-7），161.1（C-5），159.6（C-4′），154.4（C-9），129.0（C-2′，6′），121.2（C-1′），115.9（C-3′，5′），108.5（C-6），104.4（C-8），103.0（C-10），102.2（C-3）; 6-C-α-Ara： 75.0（C-1″），74.6（C-2″），70.9（C-3″），69.0（C-4″），68.8（C-5″）; 8-C-β-Glc： 73.6（C-1），70.0（C-2），78.6（C-3），70.7（C-4），81.4（C-5），60.8（C-6）。以上波谱数据与文献报道一致[11]，确定化合物3为芹菜素-6-C-α-L-吡喃阿拉伯糖-8-C-β-D-吡喃葡萄糖苷。 　　化合物4 黄色粉末（MeOH），Molish反应阳性。ESI-MS m/z 563[M-H]-。1H-NMR（DMSO-d6，500 MHz）δ： 13.64（1H，s，5-OH），8.01（2H，br d，J=8.0 Hz，H-2′，6′），6.89（2H，br d，J=8.0 Hz，H-3′，5′），6.76（1H，s，H-3），4.79（1H，d，J=7.0 Hz，H-1″），4.66（1H，d，J=7.0 Hz，H-1），3.23～3.88（11H，m，H-2″～5″，H-2～6）; 13C-NMR（DMSO-d6，125 MHz） δ： 181.8（C-4），163.5（C-2），161.1（C-7），161.0（C-4′），158.4（C-5），155.1（C-9），128.7（C-2′，6′），121.6（C-1′），116.7（C-3′，5′），108.2（C-6），104.9（C-8），104.3（C-10），102.4（C-3）; 6-C-β-Glc： 73.3（C-1″），69.0（C-2″），78.6（C-3″），70.6（C-4″），81.7（C-5″），61.2（C-6″）; 8-C-α-Ara： 74.0（C-1），74.2（C-2），71.0（C-3），70.0（C-4），68.6（C-5）。以上波谱数据与文献报道一致[12]，确定化合物4为芹菜素-6-C-β-D-吡喃葡萄糖-8-C-α-L-吡喃阿拉伯糖苷。
　　化合物5 黄色粉末（MeOH），Molish反应阳性。ESI-MS m/z 431[M-H]-。1H-NMR（DMSO-d6，500 MHz） δ： 7.94（2H，d，J=9.0 Hz，H-2′，6′），6.94（2H，d，J=9.0 Hz，H-3′，5′），6.83（1H，s，H-3），6.82（1H，d，J=2.0 Hz，H-8），6.44（1H，d，J=2.0 Hz，H-6），5.06（1H，d，J=7.0 Hz，H-1″），3.74～3.17（6H，m，H-2″～6″）;13C-NMR（DMSO-d6，125 MHz） δ： 182.4（C-4），164.7（C-2），163.4（C-7），161.8（C-5），157.4（C-9），129.0（C-2′，6′），121.6（C-1′），116.4（C-3′，5′），106.8（C-10），103.6（C-3），100.0（C-6），96.3（C-8）; 7-O-β-Glc： 100.4（C-1″），73.6（C-2″），76.9（C-3″），70.0（C-4″），77.6（C-5″），61.0（C-6″）。以上波谱数据与文献报道一致[13]，确定化合物5为芹菜素-7-O-β-D-吡喃葡萄糖苷。
　　化合物6 黄色粉末（MeOH）。1H-NMR（DMSO-d6，500 MHz）δ： 13.09（1H，s，5″-OH），12.16（1H，s，5-OH），7.60（2H，d，J=9.0 Hz，H-2，6），7.42（1H，d，J=8.5 Hz，H-6′），7.41（1H，s，H-2′），7.02（1H，d，J=8.5，H-5′），6.80（2H，d，J=9.0，H-3，5），6.78（1H，s，H-3″），6.36（1H，s，H-6″），5.90（1H，s，H-6），5.90（1H，s，H-8），5.52（1H，dd，J=13.0，2.5 Hz，H-2），3.36（1H，dd，J=17.0，13.0 Hz，H-3a），2.69（1H，dd，J=17.0，2.5 Hz，H-3b）;13C-NMR（DMSO-d6，125 MHz） δ： 196.3（C-4），182.0（C-4″），166.6（C-7），163.5（C-2″），163.4（C-9），163.0（C-5），162.4（C-7″），161.0（C-4），160.2（C-5″），156.1（C-4′），154.4（C-9″），131.4（C-6′），128.4（C-1′），128.2（C-2，6），127.9（C-2′），121.4（C-1），119.2（C-3′），116.8（C-3，5），115.6（C-5′），104.8（C-8″），103.4（C-10″），102.4（C-3″），101.7（C-10），98.7（C-6″），95.6（C-6），95.0（C-8），78.6（C-2），42.0（C-3）。根据HSQC和HMBC谱对化合物6的1H-NMR和13C-NMR信号进行准确的归属，以上波谱数据与文献报道一致[14]，确定化合物6为2，3-二氢穗花杉双黄酮。
　　化合物7 黄色粉末（MeOH）。1H-NMR（DMSO-d6，500 MHz） δ： 13.09（1H，s，5-OH），12.95（1H，s，5″-OH），8.16（1H，dd，J=9.0，2.0 Hz，H-6′），8.04（1H，d，2.0，H-2′），7.50（2H，d，J=9.0 Hz，H-2，6），7.33（1H，d，J=9.0 Hz，H-5′），6.89（1H，s，H-3），6.76（1H，s，H-3″），6.71（2H，d，J=9.0 Hz，H-3，5），6.46（1H，s，H-8），6.32（1H，s，H-6″），6.16（1H，s，H-6），3.78（3H，s，4′-OMe）; 13C-NMR（DMSO-d6，125 MHz） δ： 182.3（C-4），182.1（C-4″），164.5（C-2″），164.0（C-7），163.6（C-2），161.7（C-5），161.6（C-7″），161.4（C-5″），161.3（C-4），161.1（C-4′），157.9（C-9），155.6（C-9″），130.8（C-6′），128.8（C-2，6），128.3（C-2′），122.9（C-1′），122.5（C-3′），122.2（C-1），116.4（C-3，5），115.2（C-5′），104.5（C-8″），104.2（C-10），103.9（C-3），103.2（C-10″），103.1（C-3″），99.5（C-6″），98.4（C-6），94.6（C-8），56.3（4′-OMe）。以上波谱数据与文献报道一致[14]，确定化合物7为4′-氧-甲基穗花杉双黄酮（Bilobetin）。 　　化合物8 黄色粉末（MeOH）。1H-NMR（DMSO-d6，500 MHz）δ： 13.07（1H，s，5″-OH），12.15（1H，s，5-OH），7.61～7.57（1H，m，H-6′），7.53～7.50（2H，m，H-2，6），7.49～7.46（1H，m，H-2′），7.19～7.22（1H，m，H-5′），6.89（1H，J=2.0 Hz，H-8），6.88（1H，d，J=2.0，H-6），6.77～6.80（2H，m，H-3，5），6.80（1H，s，H-3″），6.38（1H，s，H-6″），5.58（1H，dd，J=13.0，2.5 Hz，H-2），3.70（3H，s，4′-OMe），3.33～3.41（1H，m，H-3a），2.68～2.78（1H，m，H-3b）; 13C-NMR（DMSO-d6，125 MHz）δ： 196.6（C-4），182.5（C-4″），167.1（C-7），164.0（C-2″），163.9（C-5），163.4（C-9），162.2（C-7″），161.6（C-4），160.8（C-5″），158.1（C-4′），154.6（C-9），131.6/131.5（C-2′），130.7/130.6（C-1′），128.5（C-6′），128.2（C-2，6），121.7（C-3′），121.3/121.2（C-1），118.6（C-3，5），111.7/117.6（C-5′），104.8（C-8″），104.0（C-10″），102.9（C-3″），102.2（C-10），99.0（C-6″），96.3（C-6），95.5（C-8），78.8（C-2），56.0（4′-OMe），42.9/42.6（C-3）。由于旋转异构的存在使得化合物8的谱图信号出现多重性，这些波谱数据与文献报道一致[15]，确定化合物8为2，3-二氢-4′-甲氧基穗花杉双黄酮。
　　化合物9 黄色粉末（MeOH）。1H-NMR（DMSO-d6，500 MHz）δ： 12.38（1H，s，5″-OH），12.17（1H，s，5-OH），7.45（1H，d，J=8.5 Hz，H-6′），7.34（2H，d，J=8.5，H-2，6），7.20（1H，br s，H-2′），7.06（1H，d，J=8.0 Hz，H-5′），6.81（2H，d，J=8.5 Hz，H-3，5），6.03（1H，s，H-8″），5.89（1H，d，J=2.0 Hz，H-8），5.87（1H，d，J=2.0 Hz，H-6），5.44～5.51（2H，m，H-2，2″），3.70（3H，s，4′-OMe），3.24～3.36（2H，m，H-3，3″a），2.67～2.64（2H，m，H-3，3″b）; 13C-NMR（DMSO-d6，125 MHz）δ： 196.8（C-4），196.7（C-4″），167.6（C-7），165.4（C-7″），163.9（C-5），163.3（C-9），162.1（C-9″），161.3（C-5″），158.3（C-4′），158.2（C-4），131.5（C-2′），130.3（C-1′），129.4（C-1），128.8（C-2，6），127.8（C-6′），122.6（C-3′），116.8（C-5′），116.6（C-3，5），107.0（C-6″），102.2（C-10），101.8（C-10″），96.4（C-6），95.6（C-8），95.0（C-8″），78.8（C-2），78.7（C-2″），56.9（4′-OMe），42.6（C-3），42.5（C-3″）。以上波谱数据与文献报道一致[8]，确定化合物9为2，3，2″，3″-四氢-4′-甲氧基罗波斯塔双黄酮。
　　[参考文献]
　　[1] 江苏新医学院. 中药大辞典[M]. 上海：上海科技技术出版社，2001： 2582.
　　[2] 应华忠，王德军，徐孝平，等. 翠云草平喘作用的实验研究[J]. 江西科学，2004， 22（5）： 290.
　　[3] Ma Lingyun，Ma Shuangcheng，Wei Feng，et al. Uncinoside A and B， two new antiviral chromone glycosides from Selaginella uncinata[J]. Chem Pharm Bull，2003，51（11）：1264.
　　[4] 江海燕，吴思超，朱家杰，等. 几种瑶药的体外抗病毒活性初步研究[J]. 暨南大学学报：自然科学版，2008，29（5）：500.
　　[5] Zheng Junxia，Zheng Yang，Zhi Hui，et al. New 3′，8″-linked biflavonoids from Selaginella uncinata[J]. Molecules，2011， 16（8）： 6206.
　　[6] 孙颖帧，陈科力，刘震. 翠云草总黄酮对结肠癌HT-29细胞COX-2 mRNA表达的抑制作用[J]. 中国药师，2010， 13（2）： 163.
　　[7] Zou Hui，Xu Kangping，Li Fushuang，et al. Unciflavones A-F， six novel flavonoids from Selaginella uncinata（Desv.） Spring[J]. Fitoterapia， 2014， 99： 328.
　　[8] Zheng Junxia，Wang Naili，Liu Hongwei，et al. Four new biflavonoids from Selaginella uncinata and their anti-anoxic effect[J]. J Asian Nat Prod Res， 2008， 10（10）： 945.
　　[9] Yim S H，Kim H J，Lee I S，et al. A polyacetylene and flavonoids from Cirsium rhinoceros[J]. Arch Pharm Res， 2003， 26（2）： 128.
　　[10] 卢汝梅，杨长水，韦建华. 荔枝草化学成分的研究[J]. 中草药， 2011， 42（5）： 859.
　　[11] Xue Pei Fei，Liang Hong，Wang Bin，et al. Chemical constituents from Potentilla multifida L[J]. J Chin Pharm  Sci， 2005， 14（2）： 86.
　　[12] 吴碧灵，覃芳敏，周光雄. 毛茛属刺果毛茛化学成分研究[J]. 天然产物研究与开发，2013， 25（6）： 736.
　　[13] 李雯，陈燕芬，王磊，等. 三叶人字草化学成分研究[J]. 中国实验方剂学杂志，2014， 20（11）： 91.
　　[14] Markham Kenneth R，Sheppard Carolyn，Geiger Hans. 13C NMR studies of some naturally occurring amentoflavone and hinokiflavone biflavono[J]. Phytochemistry， 1987， 26（12）： 3335.
　　[15] Moawad Abeer，Hetta Mona，Zjawiony J K，et al. Phytochemical investigation of cycas circinalisand cycas revoluta leaflets：moderately active antibacterial biflavonoids[J]. Planta Med， 2010， 76（8）： 796.
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