酶标分析仪吸光度示值误差测量结果的不确定度评定
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【摘要】 本文依据JJG 861-2007《酶标分析仪》检定规程和JJF 1059.1-2012《测量不确定度评定与表示》，分析了可能影响酶标分析仪吸光度示值误差测量结果的各不确定度分量的主要来源，给出了不确定度的评定过程。
【关键词】 酶标分析仪;吸光度;不确定度
【DOI编码】 10.3969/j.issn.1674-4977.2019.01.007
Abstract： According to the verification regulation of JJG 861-2007 ELISA Analytical Instruments and JJF 1059.1-2012 Evaluation and Expression of Uncertainty in Measurement，the main sources of uncertainty which may affect the absorbance measurement result of the ELISA analytical iInstruments were analyzed，and the evaluation process of uncertainty was given in this paper.
Key words： ELISA analytical instruments;absorbance;uncertainty
1 测量过程
在酶标分析仪检定规程规定条件下，仪器开机预热后，依次设置仪器波长为405 nm、450 nm、492 nm、620 nm，然后将吸光度标称值为1.0 A的光谱中性滤光片平放在微孔酶标板的空板架上，以空气为参比，连续测量3次，得到吸光度示值平均值，该平均值与相应波长下的吸光度标准值之差，即为吸光度的示值误差。
2 数学模型
3 各输入量的标准不确定度评定
3.1 输入量[A]的标准不确定度[u（A）]评定
输入量[A]的不确定度主要来源于酶标分析仪的示值不稳定性，可以在重复性试验条件下，通过连续测量获得，采用A类方法评定。也可以根据检定规程中规定的示值稳定性要求，采用B类方法评定。现在分别用上述两种方法进行不确定度分析。
1）以上海科华实验系统有限公司生产的型号为ST-360的酶标分析仪为例，设置仪器波长为492 nm，选择吸光度标称值1.0 A的光谱中性滤光片，连续测量3次，得到数据如下：1.033、1.031、1.032，采用极差法计算实验标准差。测量次数[n=3]时，极差系数C为1.69，计算实验标准差为：
另外任意选择3台相同类型的酶标分析仪，每台分别在波长405 nm、450 nm、492 nm、620 nm条件下，测定吸光度标称值为1.0 A的光谱中性滤光片，连续测定3次，共得到12组测量列，每组测量列分别按上述方法计算单次实验标准差，所得结果见表1。
合并样本标准偏差为：
实际测量时是在重复性条件下，连续测量3次，以3次测得的算术平均值为测量结果，则测量重复性引入的标准不确定度分量为：
自由度为：
2）JJG 861-2007《酶标分析仪》检定规程中所規定的示值稳定性应不大于±0.005 A，假设在该范围内均匀分布，则由示值稳定性引入的标准不确定度为：
3.2 输入量[As]的标准不确定度[u（As）]评定
输入量[As]的标准不确定度主要由光谱中性滤光片的定值不确定度及其年变化量所引入，属于B类标准不确定度。
3.2.1 光谱中性滤光片的定值不确定度[u（As1）]
根据光谱中性滤光片校准证书给出的吸光度定值的扩展不确定度为0.011 A，包含因子[k=2]，则标准不确定度为：
3.2.2 光谱中性滤光片的年变化量[引入的不确定度][u（As2）]
根据相关资料，光谱中性滤光片的年变化量为0.004 A，取均匀分布，则标准不确定度为：
3.2.3 输入量As的标准不确定度[u（As）]
由于以上二项分量相互独立不相关，将其合成，得到输入量[As]的标准不确定度为：
4 合成标准不确定度
输入量[A]与输入量[As]相互独立不相关，故合成标准不确定度为：
5 扩展不确定度
取包含因子[k=2]，则扩展不确定度为：
6 测量不确定度报告
酶标分析仪吸光度示值误差测量结果的扩展不确定度为：
7 结语
综上所述，在酶标分析仪吸光度示值误差检定时，其测量结果的不确定度主要来源于仪器示值稳定性、标准器定值不确定度以及标准器年变化量，其中标准器定值不确定度的影响最大。
【参考文献】
[1] 测量不确定度评定与表示：JJF 1059.1-2012[S].
[2] 倪育才.实用测量不确定度评定（第5版）[M].北京：中国质检出版社，2016.
[3] 董艳华.酶标分析仪示值误差测量结果的不确定度评定[J].计量与测试技术，2012（1）：40+43.
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