黄连-大黄-肉桂复方及其组分对人肝癌SMMC-7721及HepG2细胞增殖的影响

来源:用户上传      作者:钱杨杨 吴中华 张静 潘志强 刘小美

　　摘要：目的  观察黄连-大黄-肉桂复方及其组分配伍对人肝癌SMMC-7721及HepG2细胞增殖的影响，并从PI3K/AKT-FOXO3a通路探讨其作用的分子机制。方法  体外培养人肝癌SMMC-7721及HepG2细胞，采用MTT法分别检测复方和复方中黄连、大黄、肉桂各自主要有效成分小檗碱、大黄素和桂皮醛不同配伍的肝癌细胞增殖;进一步以复方及有效组分最佳配伍（简称“组分”）作用肝癌细胞24 h，RT-qPCR检测PI3K、AKT和FOXO3a mRNA表达，Western blot检测PI3K p110、AKT、p-AKT、FOXO3a和p-FOXO3a蛋白表达。结果  复方、小檗碱、大黄素和桂皮醛对肝癌细胞增殖具有抑制作用，并有较明显的量效和时效关系，小檗碱、大黄素和桂皮醛最佳配伍比例分别为44、23、46 μmol/L;与对照组比较，复方和组分均能显著上调人肝癌SMMC-7721及HepG2细胞FOXO3a mRNA表达，PI3K mRNA表达也呈上调趋势，SMMC-7721细胞AKT mRNA表达显著下调，但组分使HepG2細胞AKT mRNA表达显著上调;复方和组分均可抑制PI3K p110、AKT及p-AKT蛋白表达，显著促进FOXO3a蛋白表达，对p-FOXO3a蛋白表达有抑制趋势。结论  复方和组分均能抑制SMMC-7721、HepG2细胞增殖，其抗肝癌作用可能与PI3K/AKT的抑制和FOXO3a的激活有关。
　　 关键词：黄连-大黄-肉桂复方;组分配伍;肝癌细胞;PI3K/AKT-FOXO3a通路
　　 中图分类号：R285.5    文献标识码：A    文章编号：1005-5304（2020）04-0052-07
　　 DOI：10.3969/j.issn.1005-5304.201909365
　　Effects of Coptidis Rhizoma - Rhei Radix et Rhizoma - Cinnamomi Cortex Compound and Its Component on Proliferation of Hepatoma SMMC-7721 and HepG2 Cells
　　QIAN Yangyang1， WU Zhonghua2， ZHANG Jing3， PAN Zhiqiang1， LIU Xiaomei1
　　1. School of Basic Medicine， Shanghai University of Traditional Chinese Medicine， Shanghai 201203， China;
　　2. Science and Technology Experiment Center， Shanghai University of Traditional Chinese Medicine ，
　　Shanghai 201203， China; 3. College of Acupuncture and Tuina， Shanghai University of
　　Traditional Chinese Medicine， Shanghai 201203， China
　　 Abstract： Objective To observe the effects of Coptidis Rhizoma - Rhei Radix et Rhizoma - Cinnamomi Cortex compound and its component compatibility on proliferation of hepatoma SMMC-7721 and HepG2 cells; To explore the action mechanism in the phosphatidylinositol 3-kinase （PI3K） -protein kinase B （AKT） -forkhead factor 3 （FOXO3a） pathway. Methods The SMMC-7721 and HepG2 cells were cultured in vitro. MTT assay was used to determine the effect of Coptidis Rhizoma - Rhei Radix et Rhizoma - Cinnamomi Cortex compound and its main active component compatibility of berberine， emodin and cinnamaldehyde on the proliferation hepatoma cells， respectively. Furthermore， hepatoma cells were treated with the compound and the best compatibility for 24 hours. The mRNA expressions of PI3K， AKT and FOXO3a were detected by RTqPCR， and the protein expressions of PI3K p110， AKT， p-AKT， FOXO3a and p-FOXO3a were measured by Western Blot. Results The inhibitory effects of the compound， berberine， emodin and cinnamaldehyde on the proliferation of hepatoma cells were significant， with obvious dose-effect and time-effect relationship. The optimal compatibility ratio of berberine， emodin and cinnamaldehyde was 44， 23， 46 μmol/L. Compared with the control group， both compound and component compatibility could significantly up-regulate the mRNA expression of FOXO3a in SMMC-7721 and HepG2 cells， and also up-regulate the mRNA expression of PI3K; the mRNA expression of AKT in SMMC-7721 cells was significantly down-regulated. However， the component compatibility made the mRNA expression of AKT remarkably up-regulated in HepG2 cells; Compared with the control group， compound and component compatibility could inhibit the protein expressions of PI3K p110， AKT and p-AKT， notably promote the protein expression of FOXO3a， and reduce the protein expression of p-FOXO3a. Conclusion Both compound and component compatibility can inhibit the proliferation of SMMC-7721 cells and HepG2 cells. The anti-hepatocarcinoma effect may be related to the inhibition of PI3K/AKT and the activation of FOXO3a. 　　 Keywords： Coptidis Rhizoma - Rhei Radix et Rhizoma - Cinnamomi Cortex compound; component compatibility; hepatoma cells; PI3K/AKT-FOXO3a pathway
　　 肝癌是常见的恶性肿瘤之一，发病率居全球第6位，由于起病隐匿，早期症状不明显，进展迅速，侵袭性强，死亡率在全球恶性肿瘤中排第4位[1]。尽管目前肝癌诊疗技术已有很大进展，但大多患者发现时已至中晚期，治疗效果不佳，治愈率仍有限，且常伴有不同程度的毒副作用。因此，从分子和基因出发，探索新的治疗靶点，寻找效果显著且毒副作用低的药物尤为关键。中医药对肝癌有一定疗效[2]，在改善症状、提高生存质量方面有着独特优势[3]。在肝癌的发生发展中，热、毒、瘀是常见的病理因素[4-6]。本研究选用的黄连-大黄-肉桂复方，以清热解毒为主，又兼活血化瘀之功，原方是上海中医药大学柯雪帆教授治疗早期热盛阴未虚糖尿病患者经验方，后期发现其不仅能有效降低血糖，亦能显著抑制肝癌细胞增殖[7]，但作用机制尚不清楚;同时有文献报道，复方中3味中药各自的主要有效成分——黄连有效成分小檗碱、大黄有效成分大黄素、肉桂有效成分桂皮醛单独使用时，均具有抗肝癌的作用[8-10]。鉴于有效成分单独应用难以体现中药方剂配伍理论，以及方剂有效组分配伍模式常为阐明复方起效成分的重要方法，本研究同步观察复方及其3味中药主要有效成分配伍对肝癌细胞增殖的抑制作用及其作用机制，以观察组分配伍能否重现复方的抗肝癌作用，并基于磷脂酰肌醇3-激酶（PI3K）-蛋白激酶B（PKB，又称AKT）-叉头框转录因子3（FOXO3，又称FOXO3a）通路比较两者作用机理，为复方及其组分配伍治疗肝癌提供新的实验依据。
　　1  实验材料
　　1.1  细胞株
　　 人肝癌SMMC-7721细胞及HepG2细胞，购自中国科学院上海细胞研究所，为实验室常规培养的细胞株。
　　1.2  药物
　　 黄连-大黄-肉桂复方由黄连、大黄和肉桂（黄连∶大黄∶肉桂=9∶3∶1）组成，饮片均购自上海养和堂张江店，按文献[7]方法，将三药粉碎，按比例混合后加入8倍量70%乙醇浸泡30 min，80 ℃加热回流1 h，过滤，滤渣加8倍量70%乙醇，80 ℃加热回流1 h，过滤，合并滤液。旋转蒸发回收乙醇并将药物浓缩至1 g原药材/mL，以氢氧化钠颗粒调节pH值达7.2，抽滤灭菌，分装，-80 ℃保存备用。使用前用培养液和DMSO（终浓度为0.1%）稀释至所需浓度。
　　 小檗碱和大黄素均购自中国食品药品检定研究院，桂皮醛购自美国Sigma-Aldrich公司。配制方法：将小檗碱溶解为5 mmol/L母液（水溶），大黄素溶解为40 mmol/L母液（DMSO溶），桂皮醛溶解为5 mmol/L母液（DMSO溶），使用时再以培养液和DMSO（终浓度为0.1%）稀释至所需浓度。
　　1.3  主要試剂与仪器
　　 胎牛血清（美国Corning公司），RPMI 1640培养液、胰酶、青霉素-链霉素（美国Gibco公司），Trizol试剂（美国Ambion公司），Prime Script RT reagent Kit、SYBR Premix Ex TaqTM（TliRNaseH Plus）Ⅱ（日本Takara公司），PI3K p110、AKT、p-AKT、FOXO3a、p-FOXO3a、GAPDH一抗、Anti-rabbit IgG二抗（美国CST公司），RIPA裂解液、PMSF蛋白酶抑制剂、BCA蛋白浓度测定试剂盒（增强型）、SDS-PAGE凝胶快速配制试剂盒、极超敏ECL化学发光试剂盒（上海碧云天生物科技公司）。5424R型Eppendorf台式离心机（德国Eppendorf公司），NanoDrop2000（美国Thermo公司），Applied Biosystems实时荧光定量PCR仪（美国Thermo Fisher公司），Elx800型酶标仪（Biotek公司），FC-M型化学发光成像系统（美国ProteinSimple公司）。
　　2  实验方法
　　2.1  细胞培养
　　 人肝癌SMMC-7721、HepG2细胞复苏后培养在RPMI1640培养液中，置于含10%胎牛血清、100 U/mL青霉素和100 μg/mL链霉素的37 ℃、5%CO2培养箱中培养。每隔2 d换液1次，待细胞融合率达90%时，按1∶2传代，待传代3次后用于实验。
　　2.2  分组及给药
　　 选择对数生长期SMMC-7721细胞，常规消化接种至96孔板，每孔5×103个细胞，铺板过夜后分别加入不同浓度复方（0.25、0.5、1.0 mg/mL）及小檗碱（20、40、80 μmol/L）、大黄素（10、20、40 μmol/L）和桂皮醛（45、90、180 μmol/L），同时设空白孔和对照孔，用药24、48 h后，吸弃培养液，每孔加0.5 mg/mL MTT溶液100 μL，置于37 ℃培养箱4 h后吸弃，再加150 μL/孔DMSO溶液，避光缓慢振摇10 min，酶标仪检测490 nm波长处各孔吸光度（OD值），计算细胞存活率。细胞存活率（%）=（实验孔OD值-空白孔OD值）÷（对照孔OD值-空白孔OD值）×100%，再根据用药48 h数据，计算每种药物半数抑制浓度（IC50）。
　　2.3  优化小檗碱、大黄素和桂皮醛最佳配伍
　　 选择对数生长期人肝癌SMMC-7721细胞，常规消化后接种至96孔板，每孔5×103个细胞，铺板过夜后，基于小檗碱、大黄素和桂皮醛的IC50，采用U6（64）均匀设计表安排小檗碱、大黄素和桂皮醛的用药剂量，剂量为各药物的1/6 IC50～IC50，同时设空白孔和对照孔。用药48 h后，吸弃培养液，MTT法检测并计算各组药物对细胞存活率的影响，并对数据进行逐步回归分析，得回归方程，确定最佳组分配伍（简称“组分”）。 　　2.4  肝癌HepG2细胞增殖测定
　　 以抑制SMMC-7721细胞增殖的复方IC50和组分作用于HepG2细胞24、48 h，MTT法检测其对HepG2细胞增殖的抑制作用。
　　2.5  实时荧光定量PCR检测相关基因表达
　　 选择对数生长期SMMC-7721和HepG2细胞，常规消化后接种至6孔板，每孔3×105个细胞。按处理因素不同，设置对照组、复方组、组分组，分别给予0.1%DMSO、复方（0.86 mg/mL，含0.1%DMSO）和组分（小檗碱、大黄素、桂皮醛终浓度分别为44、23、46 μmol/L，含0.1%DMSO）。给药24 h后，吸弃培养液，收集细胞，Trizol法提取总RNA，并用Prime Script RT reagent Kit将mRNA反转录成cDNA，反应条件：37 ℃、15 min，85 ℃、5 s。cDNA用SYBR Premix试剂进行实时荧光定量PCR，扩增条件：95 ℃、3 min;95 ℃、30 s，60 ℃、30 s，40个循环;95 ℃、15 s，55 ℃、15 s，95 ℃、15 s。检测基因及引物由Primer3（v.0.4.0）在线软件设计并委托Sangon Biotech公司合成（见表1）。以GAPDH作为内参，用2-ΔΔCt表示mRNA相对表达量。
　　2.6  Western blot检测相关蛋白表达
　　 细胞铺板、组别设置及用药与“2.5”项下方法相同。用药24 h后，用含有蛋白酶抑制剂的RIPA裂解液裂解细胞，BCA法测定蛋白浓度，将提取的蛋白上样25 μg进行SDS-PAGE电泳，之后将凝胶取下，将蛋白转膜至PVDF膜，封闭，分别加入PI3K p110、AKT、p-AKT、FOXO3a、p-FOXO3a和内参GAPDH一抗抗体（p-FOXO3a为1∶250，其余均为1∶1000），4 ℃摇床轻摇孵育过夜，TBST洗涤，辣根过氧化物酶标记二抗，室温孵育1.5 h，ECL试剂显色，化学发光成像仪曝光显影并记录。结果用Image J分析，以GAPDH为内参，计算目的蛋白灰度值与内参蛋白灰度值的比值，作为蛋白相对表达量。
　　3  统计学方法
　　 采用SPSS21.0统计软件进行分析。计量资料以—x±s表示，两组比较采用t检验，多组比较采用方差分析。P<0.05表示差异有统计学意义。
　　4  结果
　　4.1  复方、小檗碱、大黄素和桂皮醛对人肝癌SMMC-7721细胞增殖的影响
　　 复方、小檗碱、大黄素和桂皮醛作用SMMC-7721细胞24、48 h后，其细胞增殖抑制作用见图1。与对照组比较，不同浓度复方（图1A）、小檗碱（图1B）、大黄素（图1C）和桂皮醛（图1D）对SMMC-7721细胞增殖抑制有明显的量效和时效关系。基于48 h作用数据，计算各药物抑制SMMC-7721细胞增殖IC50分别为黄連-大黄-肉桂复方0.86 mg/mL、小檗碱62 μmol/L、大黄素33 μmol/L和桂皮醛65 μmol/L。
　　4.2  优化小檗碱、大黄素和桂皮醛最佳配伍
　　 U6（64）均匀设计小檗碱（X1）、大黄素（X2）和桂皮醛（X3）各自浓度，见表2。三者不同比例配伍作用于SMMC-7721细胞48 h，均可抑制细胞增殖，细胞存活率为40%～60%，以各配伍组细胞存活率（Y）进行逐步回归分析，得多元回归方程Y=82.486-0.348X1-0.502X2-0.229X3，其中r=0.932，F=149.556，<0.001。根据该方程，当SMMC-7721细胞达半数抑制时，计算得小檗碱、大黄素和桂皮醛的浓度分别为44、23、46 μmol/L，以此为最佳组分配伍，作为后续研究组分组。
　　4.3  复方和组分对人肝癌HepG2细胞增殖的影响
　　 复方和组分作用于HepG2细胞24、48 h后对其增殖的抑制作用见图2。与对照组比较，复方和组分对HepG2细胞增殖的抑制有明显的时效关系，药物作用24 h后，复方与组分均可抑制细胞增殖，且差异有统计学意义（P<0.001，P<0.05），药物作用48 h，复方和组分抑制细胞增殖效果更明显（P<0.001）。此浓度对HepG2细胞抑制作用与SMMC-7721细胞近似，后续将采用该浓度作用于细胞，进行机制方面的研究。
　　4.4  复方和组分对人肝癌SMMC-7721及HepG2细胞PI3K/AKT-FOXO3a相关基因表达的影响
　　 SMMC-7721细胞中，与对照组比较，复方组和组分组均可上调PI3K p110的mRNA表达，其中复方组差异有统计学意义（P<0.01），复方组和组分组比较差异有统计学意义（P<0.01）;同时复方组和组分组均能显著下调AKT和上调FOXO3a的mRNA表达（P<0.001）。见图3。HepG2细胞中，与对照组比较，复方组和组分组均显著上调PI3K p110和FOXO3a的mRNA表达，组分组AKT mRNA表达明显高于对照组和复方组（P<0.01）。见图4。
　　4.5  复方和组分对人肝癌SMMC-7721及HepG2细胞PI3K/AKT-FOXO3a相关蛋白表达的影响
　　 SMMC-7721细胞中，与对照组比较，复方组和组分组PI3K p110、AKT及p-AKT蛋白表达显著降低，组分组下降更明显;复方组和组分组FOXO3a蛋白表达明显升高（P<0.05），组分组作用更明显，p-FOXO3a表达几乎无变化。见图5。
　　 HepG2细胞中，与对照组比较，复方组和组分组PI3K p110、AKT及p-AKT蛋白表达有降低的趋势，其中组分组AKT蛋白表达下降明显，差异有统计学意义（P<0.05）;复方组和组分组FOXO3a蛋白表达明显升高，差异有统计学意义（P<0.05，P<0.01）;复方组和组分组p-FOXO3a蛋白表达有下降趋势。见图6。 　　5  讨论
　　 目前用于肝癌防治的中药包括复方及单体或单味药，复方因其基于中医基础理论进行辨证论治而广泛使用，但复方用药多以饮片汤剂为主，其成分复杂、质量难控、机理难以阐明等限制了其现代化和标准化的进程;而单味药或单体，特别是单体，其成分清晰，靶点明确，现阶段研究日益增多，但使用中缺乏相应的中医理论支持。本世纪初兴起的基于方剂配伍理论和药理机制开展的中药有效组分配伍研究模式，因其质量可控、安全有效、机理清楚，且符合中医整体观、辨证论治用药的原则，成为目前方剂配伍研究新的发展趋势[11]。值得注意的是，方剂配伍用药大多通过提取有效成分或靶向分子构成，而忽略了对机体整体状态的影响，因此在研究组分配伍时，关注药效研究的同时，也要关注药性对机体整体的调节作用。黄连-大黄-肉桂复方中，黄连、大黄均属大寒之品，佐以少量热性药肉桂以制之，药性平缓，发挥清热解毒之功，从而达到抗肝癌效果。组分是将复方中具有抗肝癌作用的有效组分——小檗碱、大黄素、桂皮醛组合配伍使用，已有研究报道，三者均与其饮片具有相似的寒热属性[12-13]。因此，探索和优化有效复方来源的组分配伍中药，有望实现基于中医辨证论治和方剂配伍理论，开发成分清晰、质量可控、机制易于阐明的组分配伍新药，对发挥中药治疗优势及中医药客观化和标准化有重要的理论意义，对临床也有应用价值。
　　 PI3K/AKT信号通路是细胞内非常重要的信号转导途径之一，在调控细胞代谢、蛋白合成等方面发挥重要作用[14]。研究发现，抑制PI3K/AKT通路能抑制肿瘤细胞增殖，促进细胞凋亡[15-16]。FOXO3a是PI3K/AKT通路下游的一个重要分子，是FOXO叉头转录因子亚家族的成员，也是肿瘤细胞凋亡周期调控的关键因子[17]。被AKT磷酸化后，FOXO3a从细胞核移至细胞质，导致其失活。研究表明，激活FOXO3a可上调细胞凋亡因子，从而促进细胞凋亡和周期阻滞，抑制肿瘤发生和发展[18]。因此，抑制PI3K/AKT和激活FOXO3a是治疗肝癌的有效途径。
　　 本研究发现，药物对不同细胞系的作用強度存在差异：复方及组分均能有效抑制人肝癌SMMC-7721和HepG2细胞的增殖;同等浓度下药物对SMMC-7721细胞抑制作用强于HepG2细胞，由此导致药物对2个不同细胞系PI3K p110-AKT-FOXO3a通路中关键分子mRNA和蛋白表达的影响趋势一致，但以SMMC-7721细胞各分子变化程度更明显，提示药物敏感性存在个体差异。药物对部分分子mRNA和蛋白表达的调控不同步：复方和组分均可致2个细胞系PI3K p110的mRNA表达及HepG2细胞AKT的mRNA表达升高，却能使同一样本这些分子的蛋白表达明显降低，提示药物虽然能激活这些分子的转录，却抑制其翻译过程，使其作用功能降低，抑制翻译的具体环节还有待进一步研究。复方与组分部分作用存在差异：在浓度设置中，复方和组分均取自致SMMC-7721细胞半数抑制的浓度，即对SMMC-7721细胞增殖的抑制作用相当，此浓度下组分对HepG2细胞增殖的抑制作用稍低于复方，但有关分子的蛋白表达变化显示，组分作用均优于复方。提示除小檗碱、大黄素和桂皮醛外，复方中其他成分也有抑制肝癌细胞增殖作用，其机制除PI3K p110-AKT-FOXO3a通路参与外，可能还有其他途径，这与复方多途径、多靶点发挥作用的理论相一致;而成分清晰的组分虽然作用强度稍低于复方，但在靶点选择上可能更集中，作用强度更大。
　　 综上，复方和组分均能抑制人肝癌SMMC-7721及HepG2细胞的增殖，其机制可能与PI3K/AKT的抑制和FOXO3a活化有关，以FOXO3a活化最明显，两药的作用及其机制存在一定差异。当然，肝癌的发生机制复杂，影响因素较多，复方及组分发挥抗肝癌作用是否存在其他的靶点，还需进一步研究。
　　参考文献：
　　[1] Cancer Today-IARC. Globocan 2018 （China） [EB/OL].[2019-09-08]. https：//gco.iarc.fr/today/data/factsheets/populations/160-china-fact-sheets.pdf.
　　[2] 赵河通，翟笑枫.中药复方治疗原发性肝癌的临床研究进展[J].中医药导报，2017，23（17）：107-110.
　　[3] 艾望，夏玉坤，王秀萍，等.原发性肝癌中医药治疗研究进展[J].辽宁中医药大学学报，2018，20（3）：133-136.
　　[4] 潘敏求，曾普华，潘博.中医药治疗中晚期原发性肝癌的规律探析[J].中医药学刊，2003，21（10）：1641-1642.
　　[5] 邵峰，曾普华，曾光，等.基于临床数据分析原发性肝癌的证治规律[J].湖南中医药大学学报，2019，39（1）：40-44.
　　[6] 邵峰，曾普华，郜文辉，等.中医药治疗原发性肝癌用药规律的文献研究[J].湖南中医杂志，2018，34（11）：117-119.
　　[7] 刘小美，潘志强，方肇勤，等.黄连-大黄-肉桂复方对肝癌细胞增殖及PTEN-PI3K/AKT/SGK1信号通路的影响[J].上海中医药大学学报，2016， 30（1）：50-54.
　　[8] LI M， ZHANG M， ZHANG Z L， et al. Induction of apoptosis by berberine in hepatocellular carcinoma HepG2 cells via downregulation of NF-kappaB[J]. Oncol Res， 2017，25（2）：233-239.
　　[9] SUBRAMANIAM A， SHANMUGAM M K， ONG T H， et al. Emodin inhibits growth and induces apoptosis in an orthotopic hepatocellular carcinoma model by blocking activation of STAT3[J]. Br J Pharmacol，2013，170（4）：807-821. 　　[10] NG L T， WU S J. Antiproliferative activity of cinnamomum cassia constituents and effects of pifithrin-alpha on their apoptotic signaling pathways in HepG2 cells[J]. Evid Based Complement Alternat Med，2011，2011：492148.
　　[11] 李冀，付殷，高彦宇.中药有效组分配伍研究新进展[J].中医药信息， 2014，31（3）：162-164.
　　[12] 隋峰，张畅斌，杜新亮，等.寒热性中药的成分对TRPV1通道蛋白功能的影响[J].中药药理与临床，2009，25（5）：18-20.
　　[13] 苟微，管冬元，方肇勤，等.小檗碱等7味中药有效成分药性的检测[J].时珍国医国药，2011，22（11）：2717-2719.
　　[14] SPANGLE J M， ROBERTS T M， ZHAO J J. The emerging role of PI3K/AKT-mediated epigenetic regulation in cancer[J]. Biochim Biophys Acta Rev Cancer，2017，1868（1）：123-131.
　　[15] DONG P， KONNO Y， WATARI H， et al. The impact of microRNA- mediated PI3K/AKT signaling on epithelial-mesenchymal transition and cancer stemness in endometrial cancer[J]. J Transl Med，2014， 12：231.
　　[16] HAFSI S， PEZZINO F M， CANDIDO S， et al. Gene alterations in the PI3K/PTEN/AKT pathway as a mechanism of drug-resistance[J]. Int J Oncol，2012，40（3）：639-644.
　　[17] LIU Y， AO X， DING W， et al. Critical role of FOXO3a in carcinogenesis[J]. Mol Cancer，2018，17（1）：104.
　　[18] FARHAN M， WANG H， GAUR U， et al. FOXO signaling pathways as therapeutic targets in cancer[J]. Int J Biol Sci，2017，13（7）：815-827.
　　（收稿日期：2019-09-25）
　　（修回日期：2019-10-15;編辑：华强）
　　基金项目：国家自然科学基金（81503481）;上海中医药大学中医基础理论学科能力提升项目（A1-Z193020110）
　　通讯作者：刘小美，E-mail：wfjlxm2005@126.com
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