大樱桃吉塞拉6号砧木组培培养基试验研究
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摘 要：以樱桃砧木“吉塞拉6号”为试材，分别进行了增殖继代和生根培养基筛选试验。对“吉塞拉6号”砧木组培培养基激素做了多个梯度浓度对比试验，并进行研究和总结，为大规模、快速繁育“吉塞拉6号”组培苗提供理论和实践依据。结果表明：在本次试验选取的培养基中，较适宜的增殖培养基为MS加1mg/L 6-BA加0.2mg/L GA3加0.2mg/L NAA，蔗糖30g/L，增殖系数可达4～5;较适宜的生根培养基为1/2MS加0.2mg/L NAA加0.7mg/L IBA，蔗糖20g/L，生根率达80%。
关键词：樱桃砧木;吉塞拉6号;组织培养;培养基
中图分类号：S-3
文献标识码：A
吉塞拉系列砧木是山东省果树研究所最早引进的德国矮化砧，其中的“吉塞拉6号”属半矮化砧，该砧木具有矮化、丰产、抗病、早实性强、土壤适应范围广等优良特性。相较于同系列的“吉塞拉5号”，“吉塞拉6号”长势更强，更适应露地栽培，“小脚”现象较“吉塞拉5号”轻，在黏土地上生长良好，但常规条件下该品种繁殖困难，扦插成活率低，根蘖法繁殖速度也较慢。为了加快其繁殖速度，试验选取“吉塞拉6号”砧木为实验材料，采用组织培养的繁殖方法，通过多次试验，得出“吉塞拉6号”较适宜继代增殖以及生根培养基配方，旨在为实现工厂化生产“吉塞拉6号”组培苗提供理论和实践依据。
1 试验材料与方法
1.1 试验材料
试验材料为无性系甜樱桃矮化砧木“吉塞拉6号”，采自上海交通大学农学与生物学院苗圃。
组培所用基础培养基为MS培养基（基础成分为大量元素、琼脂、微量元素、有机成分、铁盐成分、蔗糖等）和1/2MS培养基（大量元素用量为MS培养基1/2，其余成分与MS培养基一样），所用激素为IBA、NAA、6-BA、IAA、GA3、KT、TDZ、BAP等。
1.2 试验方法
1.2.1 茎尖剥离
选择晴朗天气采集外植体。选取生长健壮、无病虫害的一年生幼嫩半木质化新生枝条进行釆集，枝条采回后及时整理修剪，去除多余叶片，选取新梢0.5～1cm备用。新梢釆回后当天处理剥离茎尖，如当天不能及时接种的，用塑料袋包好，保存在4℃左右的冰箱内。
将采回的0.5～1cm新梢用自来水流动冲洗45～60min后，转移至超净工作台上，用75%酒精浸泡消毒45s，然后用0.1%升汞溶液浸泡5～10min，最后用无菌水冲洗5～6遍，在解剖镜下将生长点周围叶片剥离，留下茎尖生长点约0.5～1mm大小，接种于初代诱导培养基上，每瓶接种1株，转移到光照培养架上培养。
1.2.2 初代培养
试验采用的初代培养基配方为MS加0.2mg/L IBA加0.5mg/L 6-BA。配方内所有成分在高压灭菌前加入，用0.1mol/L的氢氧化钠溶液调整pH值至5.7～5.8，将培养基灌入培养瓶中，放入高压灭菌锅中加热到120℃灭菌20min。
培养条件为光照周期为10h/14h（光培养10h，暗培养14h），光照强度为2000～2500Lx，温度控制在24～27℃，空气相对湿度最佳范围为50%～60%，一般培养50d左右即可转入继代扩繁培养基中。
1.2.3 不同激素种类及浓度对试管苗继代的影响
将经过初代培养的外植体在超净工作台上切割为1cm左右的茎段，然后接种到继代培养基中，试验设Al～A7共7个种类继代培养基处理（表1），每瓶接入2～3个茎段，每个处理接种20瓶。接种后置于培养室培养，培养条件为光周期16h/8h（光培养16h，暗培养8h），光照强度控制在2000～3000Lx，培养温度为24～27℃，空气相对湿度60%～80%。分别在接种后7d、15d和25d统计继代试管苗的成活、分化率情况。
继代培养采用了7种不同成分的培养基进行试验，具体如下。
A1：MS+0.5mg/L 6-BA+0.5mg/L KT+0.1mg/L NAA+0.01mg/L TDZ
[JP3]A2：MS+0.3mg/L 6-BA+0.1mg/L IBA+0.05mg/L TDZ[JP]
A3：MS+1.2mg/L BAP
A4：MS+0.5mg/L 6-BA+0.2mg/L IBA（暗处理3～5d）
A5：MS+0.5mg/L 6-BA+0.2mg/L GA3+0.1mg/L NAA
A6：MS+1mg/L 6-BA+0.2mg/L GA3+0.2mg/L NAA
A7：MS+2mg/L 6-BA+0.2mg/L GA3+0.4mg/L NAA
1.2.4 不同激素种类及浓度对试管苗生根的影响
选择苗高3cm左右的健壮增殖继代苗，在超净工作台上由茎基部剪断，转接到生根培养基上诱导生根，每个培养瓶内接入2株。试验设生根培养基种类B1～B10共10个处理（表2），每处理接种20瓶。培养条件为光周期18h/6h（光培养18h，暗培养6h），在外植体开始生根后，逐渐增加光培养时间。光照强度范围在2000～3000Lx，培养温度控制在（25±1）℃，空气相对湿度40%～70%。在接入生根培养基15d左右，试管苗会生长出白色的根点，接種20d后，开始统计新生根数量和生根率。
B1：1/2MS+0.1mg/L IBA
B2：1/2MS+0.3mg/L IBA
B3：1/2MS+0.5mg/L IBA
B4：1/2MS+0.7mg/L IBA
B5：1/2MS+0.2mg/L IBA+0.2mg/L IAA B6：1/2MS+0.2mg/L IBA+0.4mg/L IAA
B7：1/2MS+0.2mg/L IBA+0.6mg/L IAA
B8：1/2MS+0.2mg/L NAA+0.5mg/L IBA
B9：1/2MS+0.2mg/L NAA+0.7mg/L IBA
B10：1/2MS+0.2mg/L NAA+0.9mg/L IBA
2 结果分析
2.1 不同培养基对外植体继代培养的影响
“吉塞拉6号”外植体在不同培养基中的诱导分化情况不同，其中在6号培养基中成活率最高，为97.2%，且分化率最高，为5～6，不定芽为鲜嫩绿色，转入增殖培养基后增殖速度较快;3号培养基成活率最低，为65%，且在1号和5号培养基上诱导分化的外植体，易出现玻璃化现象。因此，此次试验中，较适宜的继代培养基为MS加1mg/L 6-BA加0.2mg/L GA3加0.2mg/L NAA。
2.2 不同培养基对外植体生根培养的影响
通过实验数据采集发现，试管苗在10种生根培养基上的生根数量集中在3～5条，其中，B2、B3培养基上生根最少，B10培养基上生根最多（表4）。但是单纯从生根数量上不能直接判断培养基的适用程度，植株发出的新根是否健康、是否具备良好的组织结构才是制约试管苗移栽成活的关键。接种在添加NAA培养基上的试管苗，愈伤组织产生的新根数量虽然多但根系脆弱，长度较短（图3），不能形成健康良好的根系。接种在添加IBA培养基上的试管苗，产生的愈伤较少，且IBA浓度较大时根系粗大脆弱（图4），也不能形成健康良好的根系。综合比较发现，接种在B9培养基上的幼苗没有产生过多的愈伤组织，且新根数量较多，粗细适中，侧根分化多，形态较好（图5），由此可以判断B9培养基较适合“吉塞拉6号”生根培养。
3 小结
经过试验研究，以“吉塞拉6号”为试验材料，利用植物组织培养技术快速繁殖时，较为适宜的培养基分别为增殖培养基：MS加1mg/L 6-BA加0.2mg/L NAA加0.2mg/L GA3，蔗糖30g/L，增殖系数可达4～5;最佳生根培养基为：1/2MS加0.2mg/L NAA加0.7mg/L IBA，蔗糖20g/L，生根率达80%。另外，在生根试验中，试管苗过于幼嫩，或继代次数过多，都不利于“吉塞拉6号”外植体生根，试验用到的激素中，IBA浓度对试管苗生根影响较大。
参考文献
[1]冯社章，范继红，纪书琴，赵印.吉塞拉的组织培养技术研究[J].河北农业科学，2010，14（10）：76-79，86.
[2]夏國海，叶霞，赵冰梅，等.樱桃组织培养研究进展[J].中国果树，2003（3）：46-50.
（责任编辑 李媛媛）
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