心脑疏通胶囊指纹图谱研究
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作者:周和 谭翔匀 冯华 王奥
【摘 要】 目的：建立心脑疏通胶囊的HPLC指纹图谱。方法：Waters XSelect C18（4.6 mm × 250 mm，5μm）色谱柱，流动相为乙腈-0.1%磷酸溶液进行梯度洗脱，检测波长270nm，柱温25℃。以丹参酮IIA为参照，绘制10批心脑疏通胶囊指纹图谱，采用“中药色谱指纹图谱相似度评价系统（版本 2004 A）”进行相似度评价。结果：10批样品相似度均在0.95以上，确认共有峰20个，标示3个已知化合物（丹参酮IIA、隐丹参酮、丹参酮I），方法学考察结果符合指纹图谱技术要求。结论：该方法具有良好的精密度、重复性、稳定性和专属性，可为该制剂的质量控制提供一定参考。
【关键词】 心脑疏通胶囊;丹参酮IIA;质量控制;指纹图谱;相似度
【中图分类号】R284.1 【文献标志码】 A 【文章编号】1007-8517（2020）9-0043-05
Study on Fingerprint of Xinnao Shutong Capsule
ZHOU He1 TAN Xiangyun1 FENG Hua1 WANG Ao2*
1.Zunyi Institute for Food & Drug Control，Zunyi 563002， China;
2. Zunyi Product Quality Inspection and Testing Institute，Zunyi 563002， China
Abstract：ObjectiveTo establish the HPLC fingerprint of Xinnao Shutong capsule. MethodsWaters XSelect C18（4.6mm × 250mm，5μm） as analytical column and acetonitrile-0.1% phosphoric acid solution as mobile phase in a gradient mode. Detecting wavelength was set at 270nm. The temperature of column was at 25℃. Total 10 batches of Xinnao Shutong capsule samples were determined by selected tanshinone IIA as a reference. The similarity evaluation was conducted by using Similarity Evaluation System for Chromatographic Fingerprint of TCM（2004 A edition）. ResultsThe similarities in 10 batches of Xinnao Shutong capsule samples were greater than 0.95. There were 20 common peaks in the HPLC fingerprints and identified 3 compounds（tanshinone IIA， cryptotanshinone， tanshinone I）. The results of methodological study meet the technical requirements of fingerprint.ConclusionThe proposed method showed its advantages of good precision， repeatability， stability and specificity， and can provide some reference for the quality control of Xinnao Shutong capsule.
Keywords：Xinnao Shutong Capsule;Tanshinone IIA;Quality Control;Fingerprint;Similarity
心脑疏通胶囊由丹参、川芎、法半夏、茯苓等11味中药材组成，具有益气活血、化瘀通络之功效，用于气虚血滞、脉络瘀阻所致中风后遗症，半身不遂、肢体麻木及心脑血管供血不足等[1-2]。丹参中丹参酮类化合物有抗菌消炎、祛瘀止痛等作用，是心脑疏通胶囊发挥功效的指标性成分之一[3-4]。该中药制剂现有质量标准比较简单，只有川芎、枸杞子等几味药材的薄层鉴别，难以准确、全面地表达该制劑的整体质量和疗效。
中药指纹图谱具有整体性、相似性的特点，是一种能突出中药及其制剂完整面貌的有效方法[5-6]，有助于中药及其制剂内在化学成分的综合评价。近年来，中药指纹图谱技术已广泛应用于多种中药及其制剂的质量控制[6-10]。本研究以处方中丹参酮类成分（丹参酮IIA、隐丹参酮、丹参酮I）为切入点，采用梯度洗脱模式，建立心脑疏通胶囊HPLC指纹图谱，以期为心脑疏通胶囊的识别和质量控制提供一定的参考依据。
1 仪器与试药
1.1 仪器与试剂 Agilent 1260高效液相色谱议（美国安捷伦公司），Waters XSelect C18 （4.6mm×250mm，5μm）色谱柱;MS204TS型梅特勒电子天平（北京中恒日鑫科技有限公司），KQ-500DV型数控超声波清洗机（昆山市超声仪器有限公司）。
1.2 试剂与药品 丹参酮IIA（98.9%，批号：110766-201721）、隐丹参酮（99.1%，批号：110852-201605）、丹参酮I（98.2%，批号：110867-201705），心脑疏通胶囊（批号：161201、161202、161203购买于遵义市中医院，19101601、19101602、19101603、19102101、19102102、19102103、19102104为自制）。乙腈（天津市科密欧化学试剂有限公司），纯净水（杭州娃哈哈集团有限公司），乙醚（成都金山化学试剂有限公司），其它试剂均为分析纯。 2 方法与结果
2.1 色谱条件 色谱柱waters XSelect C18（4.6 mm ×250 mm，5μm）;流动相为乙腈（A）-0.1%磷酸溶液（B），梯度洗脱（0-5min，85% B;5-20min，85% B→50% B;20-35min，50% B→30% B;35-45min，30% B→10% B;45-65min，10% B）;检测波长：270nm;流速：1.0mL/min;柱温：25℃;进样量：10μL。
2.2 溶液制备
2.2.1 对照品溶液 称取丹参酮IIA、隐丹参酮、丹参酮I对照品适量，分别用甲醇溶解制成含丹参酮IIA 212.63μg/mL、隐丹参酮47.52μg/mL、丹参酮I的单一对照品溶液，摇匀，用0.22μm 微孔滤膜滤过，即得。
2.2.2 供试品溶液 取心脑疏通胶囊内容物适量，研细，取约3.0g，精密称定，置具塞锥形瓶中，加入乙醚50mL，静置24h（时时振摇），过滤，滤液蒸干，用甲醇溶解并转移至10mL容量瓶中，定容，摇匀，用0.22μm微孔滤膜滤过，即得。
2.3 方法学考察
2.3.1 精密度试验 取“2.2.2”项下供试品溶液（批号：161201）按“2.1”项下色谱条件连续进样测定6次，主要共有峰与17号丹参酮IIA参照峰的相对保留时间和相对峰面积的RSD均小于0.93%（n=6），表明仪器精密度良好。
2.3.2 重复性试验 取心脑疏通胶囊（批号：161201）内容物适量，按“2.2.2”项下制备供试品溶液，共6份，按上述色谱条件进样测定，记录各共有峰的相对保留时间和相对峰面积，结果，20个共有峰相对保留时间RSD均小于1.29%（n=6），相对峰面积的RSD均小于1.83%（n=6），表明重复性良好。
2.3.3 稳定性试验 取（批号：161201）同一供试品溶液，分别在0、2、5、8、12、24h进样检测，共有峰的相对保留时间和相对峰面积的RSD（n=6）均小于2.62%，表明供试品溶液于室温下放置24h内基本稳定。
2.4 指纹图谱生成与相似度评价、共有峰的指认及相关分析
2.4.1 指纹图谱的生成 取10批心脑疏通胶囊内容物适量，按“2.2.2”项下方法制备供试品溶液，再按“2.1”项下色谱条件进行测定。采用“中药色谱指纹图谱相似度评价系统2004 A版”分析处理得心脑疏通胶囊HPLC指纹图谱，如图1、图2所示。
2.4.2 相似度分析 采用“中药色谱指纹图谱相似度评价系统（版本 2004 A）”，以S1号样品（161201）为对照指纹图谱，进行整体相似度评价。结果显示，10批样品相似度均大于0.95，表明各样品间差异小，质量稳定性良好，详见表1。
2.4.3 共有峰的指认 分别取“2.2.1”项下丹参酮IIA、隐丹参酮、丹参酮I的单一对照品溶液，按“2.1”项下色谱条件依次测定，并与样品对照图谱进行对比指认。结果，共有峰中17、12、13号色谱峰分别指认为丹参酮IIA、隐丹参酮、丹参酮I，如图1、图3所示。
2.4.4 共有峰的相关分析 10批样品总峰31个，共有20个共有峰，其峰面积总和占色谱峰总面积的91.49%，具有较大代表性。其中，17号峰丹参酮IIA峰面积大，含量较高，峰形好，分离度为2.09，在样品中较稳定，故以其保留时间和峰面积为参照，计算其它共有峰的相对保留时间和相对峰面积。各共有峰相对保留时间和相对峰面积的RSD均在3%范围内，无显著性差异。结果详见表2、表3。
3 讨论
研究对比考察甲醇、乙醚两种提取溶剂，结果发现甲醇提取液的色谱峰繁杂，不易分离，而用乙醚提取时，基线较平稳，各色谱峰保留时间适中，故选择乙醚为提取溶剂。此外，经多次梯度洗脱模式摸索，对甲醇-水、甲醇-磷酸溶液、甲醇-醋酸溶液、乙睛-水、乙睛-磷酸溶液、乙睛-醋酸溶液6个流动相考察发现：乙腈-0.1%磷酸溶液对样品成分的梯度洗脱效果最好。同时采用DAD检测器进行紫外区全波长扫描，发现在270nm波长下色谱图基线噪音较低，色谱峰数目多，保留时间适中，有利于指纹图谱分析，因此选择270nm为检测波长。
综上所述，本研究首次建立心脑疏通胶囊的HPLC指纹图谱，确认20个共有峰，标示指认了丹参酮IIA（17号）、隐丹参酮（12号）、丹参酮I（13号）3个成分，10批样品相似度均在0.95以上。该方法简便、准确、重现性好，可为心脑疏通胶囊的质量控制提供可靠一定的参考。在色谱图中，以丹参酮IIA和隐丹参酮含量相对较高，可用于定量检测分析，笔者将进一步深入研究，完善心脑疏通胶囊的质量控制。
参考文献
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（收稿日期：2020-01-23 编辑：程鹏飞）
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