LAMP技术及其在食品安全检测中的应用

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　　【摘要】LAMP技术（环介导等温扩增技术）是一种新型的体外等温扩增特异核算片段技术，该技术具有灵敏度高，扩增效率腔以及特异性强等优势。本文简单介绍LAMP技术，并探讨LAMP技术及其在食品安全检测中的应用
　　【关键词】LAMP技术;食品安全;检测
　　LAMP技术（环介导等温扩增技术是由日本研究人员在2000年发明的一种新型的体外等温扩增特异核算片段技术。该技术通过对特殊引物与有链置换活性的Bst（芽孢杆菌嗜热脂肪酸）DNA聚合酶，使反应在模板两端的引物结合处循环出现环状单链接结构，从而在等温条件下促进引物与模板的顺利结合以及链置换扩增反应的形成。相关资料显示，LAMP会在60分钟内扩增出109至1010倍的靶序列复制，从而使DNA浓度高达500txg/mL。LAMP技术中的扩增产物可以通过常规的荧光定屠以及电泳检测。在对食品安全进行检测时应用LAMP技术，可明显提高检测质量，且时间短，灵敏度高，目前在食品安全检测领域中应用十分广泛。
　　一、简述LAMP技术的原理及特点
　　（一）LAMP技术的原理
　　LAMP技术的核心是针对靶基因的六个区域中的四条特殊引物进行相关设计，并对具有链置换活性的BstDNA聚合酶进行反应。在LAMP技术的反应过程中，会对靶基因的6个不同区域进行设计，例如设计1号对应外引物F3与D3，1对内引物FIP以及BIP，并加入具有置换链作用的DNA聚合酶。在温度保持在60到65摄氏度时，对DNA片段特异性基因序列上的6个单独区域进行扩增，反应过程中会产后白色的焦磷酸镁沉淀物。
　　（二）LAMP技术的特点
　　LAMP技术具有特晃性强，检测速度较快，且检测灵敏度较高，并且检测过程中可以清晰的观察检测过程，可脱离仪器进行现场检测等特点。
　　二、LAMP技术在食品安全检测中的应用
　　LAMP技术可以从食品中的致病微生物以及转基因食品安全性等方面进行食品安全监测。
　　（一）LAMP技术在致病微生物中的检测应用。
　　病原微生物室食品安全中造成食品生物污染的主要原因。常规的检验方式通过对病原微生物进行分离培养或者生活试验进行检测，但是会耗费大量的人力物力，且时间较长，而且类似于大肠杆菌等细菌在机体营养匮乏的环境下会进入休眠状态，而进入适宜的环境后会马上复苏，就导致常规检测中相关性质的细菌会产生漏检。应用LAMP技术可以避免该现象的发生。LAMP技术可以对大肠杆菌，沙门氏菌等多种食品中的常见细菌进行检测。（1）大肠杆菌的检测。大肠杆菌是食品安全问题中的常见细菌，会引起人体出现严重腹泻与败血症。大肠杆菌是一种普通的原核生物，是人类以及动物肠道内的常见菌群。但是致病性大肠杆菌以及血性大肠杆菌会引起人体出血性肠炎以及腹泻。在应用LAMP技术对致病性大肠杆菌以及血性大肠杆菌进行检测时，发现建立的LAMP反应体系只扩增大肠杆菌基因，特异性较好，结果显示，该体系的最佳反应温度为63℃，最佳反应时间为1小时，检测浓度为0.0001pg，检测结果较精细。（2）沙门氏菌的检测。在沙门氏菌的检测过程中，对沙门氏菌的纯培养物进行检测，测定其灵敏度，并按照灵敏度对相关待检测食品进行检测对比，该检测方式的特异性较强，且用时较短。
　　（二）LAMP技术在转基因食品安全性中的检测应用。
　　随着转基因食品在人民生活中的增多，转基因食品安全问题已经成为食品安全质量检测中的关注重点。相关资料显示，目前大部分国家對转基因食品都会进行比较严格的管理，在转基因食品包装袋上会有明显的转基因食品标志。因此转基因食品的安全检测，对人们的食品安全以及国家的食品出口都存在重要意义。
　　在转基因食品安全检测中应用LAMP技术，主要是通过检测食品中转入的外援启动字尽心相关判断。大部分转基因食品中都含有花椰菜花叶病毒355启动子，应用LAMP检测法，将花椰菜花叶病毒启动子作为研究对象进行检测，检查出转基因大豆中的转基因成分，然后将转基因大豆与非转基因大豆进行一定比例的混合后，分析比较LAMP技术检测大豆中的转基因分子的成功率。相关研究结果表示，LAMP技术可以成功检测出混合大豆中的转基因成分，检测结果显示成功。可根据检测结果建立转基因大豆及相关豆制品的LAMP技术检测方式。
　　（三）LAMP技术在食品过敏性残留物检测中的应用。
　　在食品安全检测中，过敏性残留物的检测也至关重要。食品中常见的过敏性食品有鸡蛋，牛奶，花生等，此类食品的主要过敏性物质主要为蛋白质。在食品安全检测中应用LAMP技术进行检测，可以将食物中蛋白质分子作为研究对象进行检测，根据检测结果建立对蛋白质等过敏性残留物的LAMP技术检测方式。LAMP技术检测在食品过敏性残留物的检测中，结果较准确，操作简洁。
　　三、LAMP技术在食品安全检测中的优势，问题以及解决方法
　　（一）LAMP技术在食品安全检测中的优势
　　在食品安全检测中应用LAMP技术，较传统检测方式时间明显缩短，且操作简单，检测时间一般在1到2小时内完成，且具有更高的灵敏度检测结果准确度高，检测成本较低，并且LAMP技术的检测过程中不需要应用相关仪器设备，使用配套的试剂盒与水浴锅即可完成检验，特别适合野外，山区等偏远地方进行食品安全检测。
　　（二）LAMP技术在食品安全检测中存在的问题
　　1.LAMP技术在食品安全检测的过程中，对温度的要求较高。2.LAMP技术在检测过程中，需要选择待检测的分子标本才能制做LAMP技术检测，如果检测标本不准确容易导致结果失效。
　　（三）酶联免疫吸附技术中相关问题的解决方式
　　1.在食品安全检测中应用LAMP技术时，尽量将室内温度调高，保证LAMP技术的灵敏度。2.可在检测过程中改善抗标本的制作方式，根据待检测食品的特性，应用相关知识建立不同结构的评价模式，提高标本的亲和性。在对多个结构类似食品进行检测时，将标本针对同种分子进行检测，可以避免工作的重复性，减少检测过程中的交叉反应。
　　综上所述，LAMP技术是一种简便，准确，价格低廉且用时较短的基因扩增技术。目前在食品安全检测中应用广泛。随着相关技术的不断进步与发展，LAMP检测技术在更多领域得到了更全面的应用。在食品安全检测中应用LAMP技术，可明显提高食品安全的检测灵敏度，检测结果更加准确，且检测用时明显缩短，LAMP技术的操作方式简单明了，检测成本相对低廉，可在技术水平发展价较差的山区等偏远地区应用，并且检测过程中不会对环境造成污染，可在食品安全检测中推广应用。
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