五金化石方对胆色素结石性胆囊炎模型豚鼠血清炎性因子的影响

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　　【摘 要】目的：探讨五金化石方对胆色素结石性胆囊炎模型豚鼠血清IL-6、TNF-α含量及胆囊黏膜TNF-α mRNA的表达的影响。方法：120只健康豚鼠随机分为空白对照组、模型对照组、阳性药物对照组、五金化石方低、中、高剂量组，每组20只。除空白对照组外，其余5组按照复制胆色素结石性胆囊炎模型，造模成功后，各组给予相应的药物灌胃4周。各组给药结束后第2天，采集各组血液标本检测血清IL-6、TNF-α含量，胆囊标本进行TNF-α mRNA表达的检测。结果：与模型对照组比较，五金化石方低、中、高剂量组血清IL-6、TNF-α含量及胆囊组织TNF-α mRNA表达明显降低（P<0.05）。五金化石方高剂量血清IL-6、TNF-α含量及胆囊组织TNF-α mRNA表达与阳性药物对照组比较，差异有统计学意义（P<0.05）。结论：五金化石方能降低实验性胆色素结石性胆囊炎模型豚鼠血清IL-6、TNF-α含量及胆囊组织TNF-α mRNA表达。
　　【关键词】五金化石方；胆囊炎；胆汁量；炎性因子；白细胞介素6；肿瘤坏死因子α
　　近年来研究表明，中医药在治疗胆囊炎具有独特作用[1]。五金化石方为我院治疗结石经验方，具有消炎、利胆、溶石、化石作用，临床上主要用于治疗胆石症、胆囊炎等病症，本研究观察五金化石方对胆色素结石性胆囊炎模型豚鼠血清IL-6、TNF-α含量及胆囊黏膜TNF-α mRNA的表达的影响，进一步探讨五金化石方治疗胆囊炎的可能作用机制。
　　1 材料与方法
　　1.1 实验动物
　　健康豚鼠120只，雄性，体重（280±20）g，普通级，购贵州医科大学实验动物中心，许可证号SCXK（黔）2016-18。
　　1.2 实验药物
　　五金化石方（处方金钱草、海金沙、郁金、虎杖、茵陈、鸡壳子、大黄、柴胡、鸡内金、石韦、茯苓、猪苓、王不留行、赤芍、延胡索、乌药、甘草等16味药物组成）。购于贵州省惠水县人民医院中药房，药材标准按照《中国药典》2015版中有关标准进行，实验时将五金化石方常温下制成水煎液，质量浓度为2.0g/mL；消炎利胆片（国药准字Z44020528，惠州大亚制药有限公司，批号20180604）。
　　1.3 实验方法
　　1.3.1 分组、造模及给药
　　120只健康雄性豚鼠，按照数字随机法分为空白对照组（蒸馏水）、模型对照组（蒸馏水）、阳性药物对照组（消炎利胆片3.0g/Kg）、五金化石方低（3.0g/Kg）、中（6.0g/Kg）、高（12.0g/Kg）剂量组6组，每组20只。除正常对照组外，其余5组豚鼠皮下注射盐酸林可霉素60mg/kg/d，连续4d，停2d，再注射3d。进行胆囊B超检查观察豚鼠胆囊情况，然后再进行皮下注射盐酸林可霉素60mg/kg/d，连续15d。实验性豚鼠胆色素结石性胆囊炎造模结束后。各组给予相应的药物灌胃4周。
　　1.3.2 标本采集
　　各组给药结束后第2天，采集各组血液标本制备血清及收集各组胆囊标本，置-20℃冰箱保存。
　　1.4 检测指标
　　（1）血清IL-6、TNF-α测定：严格按照试剂盒说明书操作，检测各组豚鼠血清IL-6、TNF-α表达。
　　（2）胆囊组织中TNF-α mRNA的表達：按照文献的方法进行检测。
　　1.5 统计学分析
　　数据统计采用SPSS17.0软件进行，计量资料采用单因素方差分析（ANOVA），多重比较采用LSD检验，P<0.05差异具有统计学意义。
　　2 结果
　　2.1 各组血清IL-6、TNF-α含量比较
　　与空白对照组比较，模型对照组血清IL-6、TNF-α含量明显升高（P<0.05）；与模型对照组比较，五金化石方低、中、高剂量组血清IL-6、TNF-α含量明显降低（P<0.05）。五金化石方高剂量组血清IL-6、TNF-α含量与低剂量组比较，差异有统计学意义（P<0.05），五金化石方高剂量血清IL-6、TNF-α含量与阳性药物对照组比较，差异有统计学意义（P<0.05）。表1。
　　2.2 各组胆囊组织中TNF-α mRNA表达比较
　　与空白对照组比较，模型对照组胆囊组织中TNF-α mRNA表达明显升高（P<0.05）；与模型对照组比较，五金化石方低、中、高剂量组胆囊组织中TNF-α mRNA表达明显降低（P<0.05）。五金化石方高剂量组胆囊组织中TNF-α mRNA表达与低剂量组比较，差异有统计学意义（P<0.05），五金化石方高剂量胆囊组织中TNF-α mRNA表达与阳性药物对照组比较，差异有统计学意义（P<0.05）。表2。
　　3 讨论
　　现代医学认为，胆囊炎胆囊黏膜存在大量的炎细胞浸润，胆汁酸代谢途径障碍，导致胆固醇清除能力下降，胆囊炎时充血、水肿，炎性细胞浸润发生炎性反应。临床上治疗结石性胆囊炎有效的药物较少，尤其能够溶解多种胆囊结石的药物更是少见。五金化石方能治疗结石性胆囊炎疗效确切。本文结果显示，与模型对照组比较，五金化石方低、中、高剂量组血清IL-6、TNF-α含量及胆囊组织TNF-α mRNA表达明显降低（P<0.05）。五金化石方高剂量组血清IL-6、TNF-α含量及胆囊组织TNF-α mRNA表达与低剂量组比较，差异有统计学意义（P<0.05），五金化石方高剂量血清IL-6、TNF-α含量及胆囊组织TNF-α mRNA表达与阳性药物对照组比较，差异有统计学意义（P<0.05）。五金化石方能降低血清IL-6、TNF-α含量及胆囊组织TNF-α mRNA表达。提示该方对胆囊炎疼痛有很好的缓解作用。
　　参考文献
　　[1]徐迎涛，孙雪萍.加味大柴胡汤治疗胆囊炎的实验研究[J].中国实验方剂学杂志，2013，19（03）：234-237.
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