Masson染色在辅助诊断肝纤维化中应用

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　　【摘要】 目的 探讨Masson染色在肝纤维化诊断中的辅助作用。方法 89例慢性肝炎、肝硬化患者的石蜡包埋肝組织标本， 连续切片并行HE染色及Masson染色， 染色完成后行单盲阅片， 根据染色结果分别对HE染色及Masson 染色的标本进行G-S分级分期， 并作出初步诊断。统计HE染色和Masson 染色的染色结果;比较HE染色和Masson染色对慢性肝炎、肝硬化程度划分情况;比较HE染色和Masson 染色对慢性肝炎、肝硬化程度划分与临床分度的吻合程度。结果 标本染色完成后， HE染色标本胞浆均被染成红色， 胞核均被染成紫色， 胶原纤维与肝细胞团分界不清楚;Masson染色标本胶原纤维被染成蓝色， 包绕红色的肝细胞团， 颜色对比明显， 分界清楚。HE染色和Masson染色对慢性肝炎、肝硬化程度划分情况比较， 差异有统计学意义（P<0.05）。HE染色结果与临床诊断相符78例， 不吻合11例;Masson 染色结果与临床诊断相符86例， 其中3例临床诊断为慢性肝炎-重度， 经Masson染色确诊为早期肝硬化;Masson染色对慢性肝炎、肝硬化的吻合程度高于HE染色， 差异有统计学意义（P<0.05）。结论 Masson 染色能更清楚地显示肝纤维化病变中的胶原纤维， 提高早期肝硬化的检出率， 具有重要的临床应用价值。
　　【关键词】 慢性肝炎、肝硬化;肝纤维化;HE染色;Masson染色;G-S分级分期
　　肝纤维化作为一个病理过程， 常见于病毒性肝炎、酒精肝、脂肪肝等多种慢性疾病， 其本质是肝脏持续性损伤， 导致以胶原为主的细胞外基质合成增多、肝星状细胞被激活转化为肌成纤维样细胞和成纤维细胞[1]。肝纤维化是慢性肝病的重要病理特征， 如持续发展， 则会导致肝硬化的发生。传统的HE染色使组织细胞的胞核均染成紫色， 胞浆均染成红色， 没有特异性， 不能明显区分病变组织和正常组织， 特别是对病变早期的轻度纤维化组织分辨更为困难， 而Masson染色法是显示胶原纤维的重要染色方法之一， 使胶原纤维呈绿色或蓝色， 肌纤维呈红色， 红细胞呈橘红色。本研究就Masson染色在辅助诊断肝纤维化中的临床价值进行探究， 取得了满意的结果， 现报告如下。
　　1 材料与方法
　　1. 1 材料来源 收集2017年8～12月本院89例慢性肝炎、肝硬化患者的石蜡包埋肝组织标本作为研究对象， 连续切片并行HE染色及Masson 染色， 所有患者的病情确诊均符合《中国慢性乙肝防治指南》的诊断标准。
　　1. 2 试剂 Masson染色试剂盒由北京索莱宝科技有限公司提供， 主要包括：试剂A1：苏木素染色液;试剂A2：三氯化铁水溶液;试剂B：盐酸乙醇分化液;试剂C：氨水水溶液;试剂D：丽春红酸性品红染色液;试剂E：乙酸水溶液;试剂F：磷钼酸水溶液;试剂G：苯胺蓝染色液。使用前取A1和A2等量混合， 即为试剂A。
　　1. 3 Masson染色法 ①石蜡切片常规脱蜡至水;②用试剂A染色10 min， 蒸馏水冲洗;③用试剂B分化1 min， 水洗;④用试剂C反蓝1 min， 水洗1 min;⑤试剂D染色10 min， 用试剂E洗1 min;⑥用试剂F洗1 min， 再用试剂E洗1 min;⑦放入试剂G中染色2 min， 试剂E洗1 min;⑧95%酒精、无水乙醇脱水， 二甲苯透明， 中性树胶封片。所有标本同时做HE染色对照。
　　1. 4 观察指标 统计HE染色和Masson 染色的染色结果。比较HE染色和Masson染色对慢性肝炎、肝硬化程度划分情况;比较HE染色和Masson染色对慢性肝炎、肝硬化程度划分与临床分度的吻合程度。采用单盲阅片方式分别对HE染色和Masson染色切片进行G-S分级分期， 其中慢性肝炎根据炎性活动度（G）可分为G0～4级， 根据纤维化程度（S）可分为S0～4级[2]。根据G-S分级分期结果将病理诊断划分为正常（G0， S0）、慢性肝炎-轻度（G1～2， S0～2）、慢性肝炎-中度（G3， S1～3）、慢性肝炎-重度（G4， S2）、早期肝硬化（G3， S4）和肝硬化[3]。
　　1. 5 统计学方法 采用SPSS22.0统计学软件进行数据统计分析。计数资料以率（%）表示， 采用χ2检验。P<0.05表示差异具有统计学意义。
　　2 结果
　　2. 1 染色结果 标本染色完成后， HE染色标本胞浆均被染成红色， 胞核均被染成紫色， 胶原纤维与肝细胞团分界不清楚;Masson染色标本胶原纤维被染成蓝色， 包绕红色的肝细胞团， 颜色对比明显， 分界清楚。
　　2. 2 HE染色和Masson染色对慢性肝炎、肝硬化程度划分情况比较 HE染色和Masson染色对慢性肝炎、肝硬化程度划分情况比较， 差异有统计学意义（P<0.05）。见表1。
　　2. 3 HE染色和Masson染色对慢性肝炎、肝硬化程度划分与临床分度的吻合程度比较 HE染色结果与临床诊断相符78例， 不吻合11例;Masson染色结果与临床诊断相符86例， 其中3例临床诊断为慢性肝炎-重度， 经Masson染色确诊为早期肝硬化;Masson染色对慢性肝炎、肝硬化的吻合程度高于HE染色， 差异有统计学意义（P<0.05）。见表2。
　　3 讨论
　　肝纤维化的发生机制非常复杂， 是由肝细胞、肝星状细胞、枯否细胞、内皮细胞、细胞外基质、细胞因子等多方面因素的共同作用引起。其中， 肝星形细胞的激活和转化是肝纤维化发生的中心环节[4]， 其结果是使细胞外基质合成增多， 降解减少， 沉积于肝内而引起纤维化。肝纤维化的主要病理特征为肝组织正常结构遭到破坏， 肝细胞减少， 血管结构紊乱， 至肝硬化阶段可有假小叶的形成， 假小叶是指由广泛增生的纤维组织分割原来的肝小叶并包绕成大小不等的圆形或类圆形的肝细胞团， 假小叶内肝细胞排列紊乱， 可有变性、坏死及再生， 中央静脉窦缺如， 偏位或两个以上[5]。 　　传统的HE染色使各种组织的胞浆都染成红色， 胞核都染成紫色， 缺乏特异性， 不利于区分病变组织和正常组织结构， 纤维化中晚期因病变较明显尚可确切诊断， 但对早期纤维化的诊断还是有一定的困难。Masson染色法是指用两种或三种阴离子染料混合， 显示组织中纤维及炎性因子的染色方法， 其原理是利用不同组织对染料分子的渗透性不同及染料分子本身的大小来实现， 小分子能进入结构比较致密， 渗透性比较低的组织， 而苯胺蓝等大分子只能进入结构较疏松， 渗透性高的组织， 从而使肌纤维呈红色， 胶原纤维呈蓝 色[6， 7]。镜下可清晰看到围绕在红色肝细胞团外的蓝色胶原纤维， 而且， 纤维增生程度不同， 染色深浅也不同， 鲜明的颜色对比更有助于肝纤维化的诊断和分期。本研究也表明经Masson染色后做出的病理G-S分级分期与患者的临床分度基本一致， 且较HE染色更能显示早期纤维化病变， 有助于轻度慢性肝炎和早期肝硬化的诊断， 提高早期隐匿性肝硬化的检出率， 为临床早期诊断及治疗提供了重要依据[8-12]。
　　综上所述， Masson染色能够更清楚地显示肝纤维化中的胶原纤维， 提高早期纤维化病变的检出率， 为临床作出精确诊断及G-S分级分期提供可靠的依据， 具有非常重要的临床应用价值。
　　参考文献
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　　[收稿日期：2018-11-15]
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