鸭绿江中上游水中菌相调查分析
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【中图分类号】R123【文献标识码】C【文章编号】1005-2720-(2010)04-0245-02【摘要】目的:了解鸭绿江中上游水中细菌的种类及分布情况。方法:采集鸭绿江中上游不同水域的水样,经增菌培养、细菌分离,进行细菌学鉴定。结果:从鸭绿江中分离出细菌387株,其中肠杆菌科细菌189株(59.1%),弧菌科细菌41株(12.8%),非发酵菌35株(10.9%),革兰阳性杆菌29株(9.1%),革兰阳性球菌26株(8.1%)。结论:鸭绿江中上游细菌种类多、分布广泛,此项调查对于该水域细菌感染的防治具有重要意义。
【关键词】细菌;培养;鉴定为了解鸭绿江细菌分布情况,防治该水域细菌感染,2006年至2008年对鸭绿江细菌的种类及分布情况进行调查,现将结果报告如下。
1采样时间及采样地点
2006年至2008年,白山市疾控中心根据鸭绿江沿岸居民分布的人口密度,饮水方式、排污口位置等方面的不同因素及两岸工矿企业的分布,分别于每年的枯水期、平水期、丰水期采集鸭绿江水样,累计采集水样200份。
2采样方法
用无菌瓶采集水面下30cm深度、距离江边2m逆向水流采集水样。每个采样点采集两瓶水样、每瓶500ml。
3试验方法
3.1培养基和试剂
3.1.1增菌培养基:碱性蛋白胨水、氯化钠结晶紫增菌液、乳糖胆盐增菌液、GN增菌液、SC增菌液、AC增菌液。10倍浓缩碱性蛋白胨水。
3.1.2分离培养基:TCBS平板、伊红美蓝平板、SS平板、碱性琼脂平板、山梨醇麦康凯琼脂平板、氯化钠蔗糖琼脂平板、哥伦比亚血琼脂(北京陆桥技术有限责任公司);叠氮钠-结晶紫-七叶苷琼脂平板(自制);科玛嘉O157显色培养基、科玛嘉沙门氏菌显色培养基、科玛嘉弧菌显色培养基。
3.1.3生化反应试剂:细菌微量生化反应管及美国BD公司产品。
3.1.4诊断血清:沙门氏菌属诊断血清、志贺氏菌诊断血清、致病性大肠埃希氏菌诊断血清、出血性大肠埃希氏菌O157H7血清、O1群霍乱弧菌诊断血清、霍乱弧菌O139诊断血清。非O1群霍乱弧菌诊断血清。
3.1.5质控菌株:大肠埃希氏菌ATCC25922、铜绿假单胞菌ATCC27853和金黄色葡萄球菌ATCC25923。
3.2实验设备:全自动细菌鉴定/药敏系统:(美国BD):PHOENIX100;PCR扩增仪:美国:PTC200。
3.3方法
3.3.1增菌分离
3.3.1.1用0.45um滤膜过滤500ml水样,将滤膜无菌手续剪碎,分别取适量滤膜进行如下操作
①无菌手续加入10ml碱性蛋白胨水中,36℃增菌6～8小时,取表面培养物接种于TCBS平板、碱性琼脂平板和科玛嘉弧菌显色平板,36℃、18～24小时 培养 ;同时取0.2ml接10ml碱性蛋白胨水进行二次增菌6～8小时,取表面培养物接种TCBS平板、碱性琼脂平板和科玛嘉弧菌显色平板;再取0.2ml进行三次增菌6～8小时,取表面培养物接种TCBS平板、碱性琼脂平板和科玛嘉弧菌显色平板;挑取各种平板上可疑菌落,按弧菌科生化试验进行细菌鉴定。
②无菌手续加入氯化钠结晶紫增菌液10ml中,36℃增菌12～18小时,取表面培养物接种于氯化钠蔗糖琼脂平板,36℃培养18～24小时,观察菌落特征,按弧菌科进行细菌鉴定。
③无菌手续加入SC增菌液10ml中,36℃增菌18～24小时,取培养物接种于SS平板、伊红美蓝平板、科玛嘉沙门氏菌显色平板36℃培养18～24小时,观察菌落特征,按肠杆菌科进行细菌鉴定。
④无菌手续加入GN增菌液10ml中,36℃增菌6～8小时,取培养物接种于SS平板、伊红美蓝平板,36℃培养18～24小时,观察菌落特征,按肠杆菌科进行细菌鉴定。
⑤无菌手续加入AC增菌液10ml中,36℃增菌12～18小时,取培养物接种于叠氮钠-结晶紫-七叶苷平板,36℃培养18～24小时,挑取典型菌落,按肠杆菌科进行细菌鉴定。
⑥无菌手续加入乳糖胆盐增菌液10ml中, 36℃增菌18～24小时,取培养物接种于伊红美蓝平板、山梨醇麦康凯琼脂平板36℃培养18～24小时;挑取各种平板上可疑菌落,按肠杆菌科生化试验进行细菌鉴定。
3.3.2细菌鉴定:取分离平板典型菌落纯培养后,涂片染色,手工鉴定、并利用全自动细菌鉴定/药敏系统,按国家标准和参考文献进行属和种的鉴定。
4结果
4.1鸭绿江中上游水中未检出沙门氏菌、志贺氏菌、O1群霍乱弧菌、O139群霍乱弧菌、致病性大肠埃希氏菌、副溶血性弧菌、O157大肠埃希氏菌。4.2鸭绿江中上游水中检测出非O1群霍乱弧菌、河弧菌、麦氏弧菌、梅氏弧菌、维隆气单胞菌、豚鼠气单胞菌、嗜水气单胞菌、温和气单胞菌、大肠埃希菌、肺炎克雷伯菌、阴沟肠杆菌、弗劳地枸橼酸杆菌、奇异变形杆菌、普通变形杆菌、粪产碱杆菌II型、皮乔特产碱杆菌、表皮葡萄球菌、腐生葡萄球菌、枯草芽胞杆菌、液化沙雷菌、屎肠球菌、坚韧肠球菌等二十二种细菌。
5讨论
5.1从结果可以看出,鸭绿江细菌以革兰阴性菌为主,占78.8% ,主要包括弧菌科细菌 (34.4%)、肠杆菌科细菌(38.5%)和非发酵菌(5.9%);其次是革兰阳性菌,占21.2% ,包括革兰阳性杆菌(1.5%)和革兰阳性球菌(19.7%)。这表明弧菌科细菌是鸭绿江中的优势菌群,与江水受到污染有关。
5.2本项目调查结果显示,鸭绿江细菌种类多,分布广,水中微生物如经口进入人体,可引起肠道感染性疾病,如腹泻、食物中毒,经破损皮肤黏膜侵入,可引起伤口感染。对于沿江居民,应注意改变不良饮食习惯,不喝生水,不吃未经加工的水产品,从而降低发病率;同时提醒人们应注意环境保护,减少江水污染,以维护生态平衡。
5.3本次调查虽未检出沙门菌属、志贺菌属及霍乱弧菌,但这些细菌都可以经水传播,引起爆发流行,特别是夏秋季节,因此,加强对这些细菌的检测是一项长期而重要的工作,对于防止此类细菌所致的传染病的发生与流行都具有重要意义。江水中除含有细菌外,还有真菌、非细胞结构的噬菌体和病毒等微生物,它们的分布规律、生物学特性和致病性等,有待于进一步研究。
参考文献
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[2][3]康志清,吴德怀,马立人.唐山口岸地区海水致病性弧菌的调查与药敏检测[J].中国国境卫生检疫杂志,1999,22(5):257～260
作者单位:134300吉林省白山市疾病预防控制中心
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