麝香保心丸对代谢综合征大鼠血管重构的影响

作者:未知

  【摘要】目的:观察麝香保心丸对代谢综合征(MS)大鼠主动脉重构的影响。方法:用高果糖饮食饲养SD大鼠建立代谢综合征大鼠模型,成功后大鼠随机分为模型对照組和麝香保心丸干预组,用Masson染色血管胶原沉积情况,用放射免疫法检测大鼠血清单核细胞趋化蛋白-1(MonocyteChemoattractantprotein-1,MCP-1)含量,用免疫组化法检测主动脉MCP-1受体表达。结果:高果糖饮食可成功诱导高血压、高甘油三酯血症和高血糖等特征的代谢综合征模型,Masson染色可见MS组大鼠主动脉有明显胶原沉积,与正常对照组相比,模型对照组血清MCP-1含量明显增加,主动脉MCP-1受体表达亦同步上调。用麝香保心丸干预后,MCP-1表达下调,同时,血管胶原沉积有所减轻。结论:麝香保心丸可改善代谢综合征大鼠血管重构,可能与下调MCP-1表达有关。
  【关键词】麝香保心丸;代谢综合征;血管重构;MCP-1
  【中图分类号】R285.5【文献标志码】A【文章编号】1007-8517(2019)1-0012-03
  Abstract:Objectives[JP2]ToinvestigatetheeffectofShexiangBaoxinPill(SXBXP)onVascularremodelinginmetabolicsyndrome(MS)modelrats.MethodsMSmodelofratswereinducedbyhighfructosedietforeightweeks,thentheywererandomlydividedintoMSgroupandMSplusSXBXPgroup.TheMonocyteChemoattractantprotein-1(MCP-1)contentsweredetectedbyradioimmunoassay,andtheexpressionsofcorrespondingreceptorsweredeterminedbyimmunohistochemistry.TheexpressionofcollagenwasdeterminedbyMassonstaining.ResultsTheMSmodelofratswereinducedbyhighfructosedietsuccessfully.MassonstainingshowedthattherewerecollagendepositedinaorticwallofMSrats.MCP-1contentsinserumonMSgroupwereincreasedsignificantlythanthoseinthecontrolgroup(P<0.01).Meanwhile,theexpressionsofcorrespondingreceptorwereup-regulatedobviously.Inaddition,SXBXPdietcouldreducethedegreeofMCP-1content,inthesametime,thecollagendepositionofvascularwasrelieved.ConclusionOursresultsindicatedthatSXBXPsignificantlyimprovethevascularremodelingonMSmodelratspartlythroughreducingMCP-1content.[JP]Keywords:ShexiangBaoxinPill(SXBXP);MetabolicSyndrome;VascularRemodeling;MCP-1
  代谢综合征[1](MetabolicSyndrome,MS)包括高血压、高脂血症和血糖代谢异常等心血管危险因素,可导致血管内皮功能障碍和动脉粥样硬化等心血管疾病的发生发展,并导致血管重构,是目前冠心病、脑梗塞等常见心脑血管疾病发病率升高的主要因素之一。因此,防治MS导致的血管重构除了控制相应的危险因素,还需要具有血管保护或抗动脉粥样硬化的药物。麝香保心丸具有舒张血管、抑制炎症反应、抗动脉粥样硬化及抑制血管钙化等作用[2-3],在临床上治疗心绞痛、心肌梗死等发挥了很大的作用,能否改善MS导致的血管重构尚不清楚。为此,本实验在MS大鼠模型上,用麝香保心丸干预,观察血管重构的变化,并观察血清MCP-1及主动脉相应受体表达的变化,初步探讨相关可能的机制。
  1材料
  1.1动物无特定病原体级(SPF)雄性SD大鼠由汕头大学医学院实验动物中心提供,8周龄。
  1.2材料高果糖饲料(60%,北京华阜康生物科技有限公司);MCP-1试剂盒(北京华英生物研究所);MCP-1受体一抗、二抗及DAB显色试剂盒(武汉博士德);其余为进口或国产分析纯试剂。麝香保心丸(批号:12050401,上海和黄药业有限公司)。[JP]1.3仪器BP-2010A鼠尾动脉测压仪(北京软隆生物);BeckmanCoulterAU5800生化仪;血糖试纸及快速血糖仪购自美国雅培。
  2方法
  2.1MS动物模型制备参照参考文献[4]制备大鼠MS模型,取雄性SD大鼠8只作为正常对照组,普通饲料喂养;取16只雄性SD大鼠作为MS组,高果糖饲料喂养8周后,检测血糖、血脂和尾动脉压水平,以确定MS模型建立成功(高血糖、高血脂及高血压状态)。将造模成功的MS大鼠随机分成MS组(8)和MS+麝香保心丸组(8),继续高果糖饲料喂养,MS+麝香保心丸组予麝香保心丸25mg/kg灌胃1次。饲养4周后称重后,3%水合氯醛麻醉,心脏取血,血液置入含有促凝剂的5mL塑料试管中,充分混匀,4度离心分离血清,-80℃保存。摘取胸主动脉,用冰生理盐水冲洗后,4%多聚甲醛固定,石蜡包埋。
  2.2血糖、甘油三酯和血压的测定禁食8h后尾动脉取血,采用快速血糖仪检测血糖,并分离血清,采用BeckmanCoulterAU5800生化仪检测血清甘油三酯水平;采用鼠尾动脉测压仪测量血压。   2.3血清MCP-1含量的测定将血清送至北京华英生物研究所,采用放射免疫法测定血清MCP-1含量,具体步骤按试剂盒说明书操作。
  2.4免疫组织化学法检测主动脉组织MCP-1受体的表达采用4%多聚甲醛固定胸主动脉,石蜡包埋,制作4μm厚切片,常规脱腊入水,抗原修复,封闭非特异性抗原,滴加一抗过夜,滴加二抗,DAB显色,苏木素复染,盐酸酒精分化、脱水、透明、中性树胶封片,具体步骤按说明书进行。
  2.5统计学方法采用SPSS12.0统计软件进行统计分析。计量资料以均数加减标准差(x±s)表示,两组比较采用t检验,多组间比较采用单因素方差分析法,两两比较采用q检验。以P<0.05表示差异有统计学意义。
  3结果
  3.1大鼠MS模型特征经高果糖饲料喂养8周后,大鼠血清血糖、甘油三酯和尾动脉压水平明显高于正常对照组(P<0.01),提示MS模型建立成功。见表1。
  3.2Masson染色采用Masson染色观察大鼠主动脉组织,与正常组比较,MS大鼠发现血管全层均有明显胶原沉积,血管细胞和弹力纤维排列紊乱,管壁增厚,用麝香保心丸干预后胶原沉积有所改善。见图1。
  3.3大鼠血清MCP-1含量的变化MS组血清MCP-1含量明显增加(P<0.01),采用麝香保心丸干预后,血清MCP-1含量有所下降(P<0.01)。详见表2。
  3.4大鼠胸主动脉组织MCP-1受体表达的变化与正常组相比,MS组主动脉组织MCP-1受体表达明显上调,用麝香保心丸干预后,主动脉组织MCP-1受体表达有所下调。见图2。
  4讨论
  随着近年来国民生活条件改善和生活方式的改变,肥胖人群越来越多,导致MS的患病率明显增加,包括高血压及糖脂代谢异常等多种心血管危险因素,这些危险因素均可导致血管损伤,最终导致血管重构的发生。实验研究发现MS大鼠模型可出现血管重构,表现在血管内膜及中膜不均一增厚,结构紊乱,平滑肌细胞增殖明显,涉及的可能分子机制包括炎症因子、一些血管活性因子及脂肪细胞因子等生物效应相关[4-5]。因此,探索参与血管重构的机制,为其防治提供新的策略,具有重要的间接临床意义。
  本实验采用高果糖饲料喂养后,血清血糖、甘油三酯水平及尾动脉压明显高于对照组,提示大鼠MS模型建立成功。同时发现MS大鼠主动脉大量胶原沉积,血管细胞排列紊乱,提示主动脉重构,与国内外学者研究一致。同时血清MCP-1水平明显高于正常组,同时主动脉组织MCP-1受体的表达亦同步下调,而MCP-1是体内重要的促炎症因子,可诱导炎症细胞聚集,产生并加重局部组织的炎症反应,而炎症贯穿于血管重构始终,是导致血管功能及解剖结构异常重要分子机制之一,加剧动脉粥样硬化的发生发展,也促进血管重构的发生与发展。
  麝香保心丸在临床上作为一种常用治疗冠心病的有效药物,对缓解心绞痛、改善心肌缺血等有显著的作用。本实验用麝香保心丸干预后,MS大鼠主动脉胶原沉积有所减轻,血清MCP-1水平明显下降,主动脉组织MCP-1受体表达同步下调,这提示麝香保心丸有明显的抑制炎症反应的作用,并可改善血管重构,可能是改善血管重构的重要分子机制之一。
  实验发现麝香保心丸可改善MS大鼠诱导的血管重构并抑制MCP-1及其受体的表达,这将为血管重构的机制研究及防治提供新的思路和作用靶点,具体的分子作用机制和细胞内信号转导通路尚需进一步研究证实。由于植物提取物成分和有效成分作用靶点的复杂性,中药成分对保护血管内皮功能的药理学作用尚需进一步研究。
  参考文献
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