遵义地区育龄女性叶酸代谢关键酶基因位点多态性研究

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　　【摘 要】 目的：調查遵义地区育龄女性叶酸代谢关键酶5，10.亚甲基四氢叶酸还原酶（5，10.methylenetetrahydrofolate reductase、MTHFR）及甲硫氨酸合成酶还原酶（Methionine Synthase Reductase、MTRR）关键位点基因多态性，获取本地区育龄女性叶酸利用能力情况，同时为叶酸营养增补方案提供分子医学理论依据，更好地指导孕期保健。方法：选取2019年3月至2019年5月在本院进行备孕及孕期检查的籍贯为遵义市的女性作为研究对象，共计317例。采集并提取研究对象口腔黏膜上皮脱落细胞，抽提DNA，利用荧光定量PCR方法检测并分析受检者MTHFR（C677T，A1298C）和MTRR（A66G）基因分型情况，并与已报导的其他地区女性的数据进行比较。结果：入组对象的基因多态性分布符合遗传平衡;遵义地区育龄女性MTHFR 677CC、CT、TT的基因型频率分别为36.0%、50.5%、13.6%，MTHFR 1298AA、AC、CC的基因型频率分别为65.6%、30.9%、3.5%，MTRR 66AA、AG、GG的基因型频率分别为53.9%、40.4%、5.7%;遵义地区育龄女性MTHFR（C677T， A1298C）位点基因型和等位基因频率与以下地区育龄女性相比有显著差异（P<0.05）：与延边、廊坊、淄博、阳江、南宁、琼海比较，差异有统计学意义（P<0.05），MTRR A66G位点基因型频率与延边、琼海相比，有显著差异。结论：遵义地区育龄女性叶酸代谢关键酶基因位点多态性与其他地区女性有所区别，具有地域特性。
　　【关键词】 遵义;5，10.亚甲基四氢叶酸还原酶;甲硫氨酸合成酶还原酶
　　Study on SNP polymorphism of key enzymes in folic acid metabolism in women of childbearing age in Zunyi area
　　Han Ya1， Lu Yanqiang2， Liu Hong1， Ma Lingling1， Hu Jifang*2
　　1.Zunyi Maternal and Child Health Hospital， Zunyi， Guizhou 563000;
　　2.Shanghai Zhangjiang Puhui Translational Medicine Research Institute， Shanghai 201210
　　[Abstract] Objective：Study about the characteristics of the key enzyme folic acid metabolism MTHFR （C677T， A1298C） and MTRR （A66G） in Han women in Zunyi city， Guizhou province， and compared with the samples from other regions that have been reported， understand the folic acid metabolism ability of the study subjects and provide some reference for guiding the local folic acid health during pregnancy.Methods： The origins of pregnancy and pregnancy examinations in our hospital from March to May 2019 were selected for the study of women in Zunyi city，with a total of 317. Genomic DNA were obtained from oral mucosa cells. Detections of MTHFR and MTRR gene polymorphisms conducted with Taqman.MGB technology. Gene type and allele frequency were compared with other ethnic minorities women have been reported before.Results： The genetic polymorphism distribution of the enrolled subjects is consistent with the genetic balance; The genotype frequencies of MTHFR 677CC，CT，and TT in Han nationality women in Zunyi city were 36.0%， 50.5%， and 13.6%， respectively. The genotype frequencies of MTHFR 1298AA， AC， and CC were 65.6%， 30.9%， and 3.5%， respectively. MTRR 66AA， AG The genotype frequencies of GG were 53.9%， 40.4%， and 5.7%， respectively. There were significant differences in MTHFR （C677T，A1298C） and MTRR A66G genotypes and allele frequencies between women in Zunyi city and other ethnic groups （P<0.05）， such as Yanbian，Langfang， Zibo， Yangjiang， Nanning， Qionghai. Conclusion： MTHFR （C677T， A1298C） and MTRR （A66G） gene type frequency in women in Zunyi city were different from others minorities， which could guide for a more individualized folic acid supplement program for different ethnic women. 　　[Key words]Zunyi; 5，10.Methylenetetrahydrofolate reductase; Methionine synthase reductase
　　出生缺陷是指胚胎或胎儿在发育过程中发生的解剖学结构、功能或代谢异常。出生缺陷可由基因突变、染色体变异等遗传因素、环境因素、遗传.环境因素交互作用或不明原因引起[1]，卫生部在中国出生缺陷防治报告（2012）中提及，
　　我国是出生缺陷高发国家，每年新增出生缺陷90万例，总发生率约为5.6%，是流产、死胎、先天性残疾等发生的主要原因，给社会和家庭都带来了沉重的负担[2]。叶酸在DNA合成、甲基化、生长发育和基因表达等方面发挥重要作用。5，10.亚甲基四氢叶酸还原酶（MTHFR）、甲硫氨酸合成酶还原酶（MTRR）是叶酸代谢通路中的关键酶[3.7]，其基因的多态性会影响体内叶酸及同型半胱氨酸水平，与出生缺陷、复发性流产、妊娠期高血压等疾病的发生密切相关[8.12]。
　　1 资料与方法
　　1.1 研究对象
　　选取2019年3月至2019年5月在本院就诊的遵义籍贯的育龄女性为研究对象，平均年龄为（27.39±4.71）岁。均获得受检者知情同意。
　　1.2 研究方法
　　采用国家妇幼保健中心指定采样拭子采集受检者的口腔黏膜细胞，柱式质粒DNA小量抽提试剂盒提取样本DNA。Taqman.MGB探针（见表1）荧光定量PCR检测MTHFR C677T/A1298C和MTRR A66G的位点多态性（single nucleotide polymorphism， SNP）。相关仪器、试剂均购于美国ABI公司。反应结束后在ABI7900型荧光定量PCR仪上读取样品孔中的终点荧光。采用Hardy.Weinberg平衡分析MTHFR C677T、A1298C和MTRR A66G基因多态性，利用分析软件（ABI SDS 2.3）确定各个样本的基因分型结果。
　　1.3 统计学分析
　　采用SPSS 19.0软件进行统计学分析，不同地区间样本基因型及等位基因频率比较采用卡方检验，以P<0.05认为差异具有统计學意义。采用HaploView 4.2软件进行单核苷酸多态性的Hardy.Weinberg平衡分析。
　　2 结果
　　2.1 Hardy.Weinberg遗传平衡分析
　　研究对象遵义地区育龄女性编码MTHFR C677T， A1298C和MTRR A66G的位点基因多态性均符合Hardy.Weinberg遗传平衡（χ2=1.25、0.02、0.88，P>0.05），说明针对该样本群，由该三个位点遗传分析得出的结论对下一代群体具有指导意义。
　　2.2 基因型和等位基因频率分布比较
　　遵义地区育龄女性MTHFR 677CC、CT、TT的基因型频率分别为36.0%、50.5%、13.6%，MTHFR 1298AA、AC、CC的基因型频率分别为65.6%、30.9%、3.5%，MTRR 66AA、AG、GG的基因型频率分别为53.9%、40.4%、5.7%，位点基因型频率和等位基因频率与其他地区女性比较，具有地域特性。其中遵义地区育龄女性MTHFR C677T/A1298C位点基因型频率和等位基因频率与延边、廊坊、淄博、阳江、南宁、琼海地区育龄女性比较，差异有统计学意义，其中风险基因型MTHFR 677CT/677TT之和占比比较中，遵义地区育龄女性高于阳江、南宁、琼海，低于延边、廊坊、淄博地区女性，遵义女性MTRR A66G位点基因型频率和等位基因频率与琼海相比有显著差异，MTRR A66G位点基因型频率与延边比较有统计学差异。
　　遵义地区育龄女性MTHFR（C677T，A1298C）和MTRR A66G位点基因型频率与等位基因频率分布，及其与已报导其他地区群里样本的比较见表2、表3。
　　3 讨论
　　MTHFR和MTRR是叶酸代谢过程中的关键酶，大量研究表明其特定位点基因突变可能影响胎儿在母体的正常生长发育，增加神经管畸形、先天性心脏病、Downs综合征等出生缺陷的发生风险[19]。叶酸增补是我国目前针对出生缺陷一级预防的主要措施之一，孕妇体内叶酸水平受饮食习惯、地域、遗传等因素的影响，对营养的需求因人而异，对备孕及已怀孕的女性进行叶酸利用能力的评估，有助于了解机体对叶酸的利用能力，制定个性化的营养干预方案。
　　育龄女性叶酸代谢关键酶基因位点在遵义、六盘水、贵阳、眉山、大理等地[20.23]无显著差异，通过随访调查可知，长期以来云贵川地区饮食习惯相似，且三地通婚现象普遍，因此基因型分布差别不大。但与其他地区相比，遵义地区女性MTHFR（C66G， A129C）， MTRR（A66G）位点基因多态性分布具有本地特征，其中突变基因型位点MTHFR（677CT、677TT）型人群所占比例为64.1%，明显高于广东阳江、海南琼海等地，低于吉林延边、河北廊坊等地，这与我国神经管畸形患病率北高南低的分布特征基本一致[24]。遵义地区叶酸代谢关键酶基因突变率较高，因此加强优生知识普及，提高全民参与意识及依从性，优化孕前及孕期筛查技术手段是当地日后优生工作的重点内容之一，同时为当地出生缺陷防治工作提供一定的数据支持。
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