猪繁殖与呼吸综合征弱毒疫苗的免疫与抗体监测分析

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　　摘要：为探讨湖北某试验猪场猪群PRRS减毒活疫苗的免疫效果，选择HP-PRRS弱毒疫苗（JXA1-R株）对20头35日龄仔猪进行初步免疫试验，4周后采血进行PRRS抗体检测；另采集未免疫疫苗的20、30、60、70、120日龄阶段猪只血样194份，免疫疫苗的基础母猪群血样265份和配种前后备猪血样65份，分析其血清PRRS抗体阳性率、S/P均值和CV值。结果显示，20头35日龄仔猪免疫疫苗后4周抗体阳性率达85%，S/P均值和CV值分别为1.55和30%，初步表明疫苗免疫效力良好；未免疫疫苗的猪只在20～60日龄时抗体值随母源抗体逐步下降，在60日龄时达到最低为33%，70～120日龄时抗体值由85%上升到96%，说明此生长阶段已感染PRRSV；全部母猪群和后备猪抗体阳性率分别为87%和92%，S/P值>2.5的比例为9.1%，表明疫苗总体免疫稳定，并判断该场为PRRSV感染阳性稳定场。通过试验研究，旨在为该场科学防控PRRS提供临床依据。
　　关键词：猪繁殖与呼吸综合征；弱毒疫苗；免疫；抗体监测
　　中图分类号：S852.4 文献标识码：A 文章编号：0439-8114（2015）21-5359-03
　　DOI：10.14088/j.cnki.issn0439-8114.2015.21.039
　　Study on Immunization and Antibody Monitoring of Attenuated PRRS Live Vaccine
　　LI Ming-bo，SONG Zhong-xu，LU qin，DONG Bin-ke，SUN Hua，LEI Bin，CHEN You-wen，DUAN Mao-chun，MEI Shu-qi
　　（Institute of Animal Husbandry and Veterinary Science，Hubei Academy of Agricultural Sciences，Wuhan 430064，China）
　　Abstract：In order to investigate the immune effects of attenuated PRRS live vaccine in a pig farm in Hubei， 20 piglets of 35-day-old were selected to get vaccination by hp-PRRS attenuated vaccine （JXA1-R strain）. After four weeks the blood antibody against PRRS were tested. Simultaneously， 194 samples of unvaccinated piglets at 20， 30， 60， 70， 120 days stage，265 samples of breeding sows and 65 samples of gilts were collected for serum antibody positive rate of PRRS， S/P mean and CV values. The results showed that the antibody-positive rate of the 20 piglets was 85% after four weeks， the S/P mean and CV values were 1.55 and 30%， respectively. It indicted that the vaccine had good efficacy. The antibody value of the unvaccinated piglets at 20-60 days of age gradually declined with the maternal antibody and reached a minimum of 33% at 60 days of age. 70-120 days the antibody positive rates were ranged from 85% to 96%， which indicated that this stage had been infected with PRRSV. The antibody positive rates of breeding sows and gilts were 87% and 92%， respectively. The ratio of S/P value more than 2.5 was 9.1%， which indicated that the vaccination was overall stable and the farm was determined positive stable farm infected PRRSV. The experiment was aimed at provide a clinical reference for scientific PRRS prevention and control.
　　Key words： porcine reproductive and respiratory syndrome； attenuated vaccine； immunity； antibody monitoring
　　猪繁殖与呼吸综合征（Porcine reproductive and respiratory syndrome，PRRS）是由猪繁殖与呼吸综合征病毒（Porcine reproductive and respiratory syndrome virus，PRRSV）引起的高度接触感染性传染病，且具有较强的免疫抑制性[1]。该病主要引起初胎和妊娠后期母猪的流产、产死胎、高热等；哺乳期仔猪、保育猪最易感染出现临床症状或者继发其他细菌性疾病如链球菌、副猪嗜血杆菌、多杀性巴氏杆菌等，病死率较高，以出现发热、眼结膜水肿、呼吸衰竭、关节肿胀、间质性肺炎等综合症状为主。猪繁殖与呼吸综合征病毒可经呼吸道、胎盘、公猪精液等感染传播。 　　中国目前一些养殖场或地区主要流行北美型猪繁殖与呼吸综合征病毒[2-4]，分类学上属于以JX-A1和HuN4等为代表的亚群4变异毒株[5]。PRRS引发的临床症状以及导致的损失与感染的PRRSV毒力大小、猪群免疫状态、猪群所处生长阶段、继发和协同感染的病原以及环境和管理水平有关。目前学术界和业界对于研究如何控制猪繁殖与呼吸综合征取得了一定进展，其中可行的方法包括种猪群闭群200d净化技术、后备猪的血清驯化、严格的生物安全与猪群分类别饲养模式、减群和清群措施、合理利用抗生素控制细菌病以及活疫苗免疫技术等[6，7]。
　　已经证明中和抗体在预防PRRSV感染和病毒清楚中扮演重要角色[8]，临床上合理有效的利用疫苗来控制PRRS可以取得显著效果，能够减少病毒传播及病理损伤，改善生产性能及降低发病率和死亡率等[9]。研究表明，疫苗毒与野毒基因序列同源性越高，猪群免疫保护效果越好，然而PRRSV的持续变异特点也给当前防控PRRS和疫苗研发带来挑战[10]。关于猪群是否使用PRRS疫苗，使用哪种疫苗以及怎样使用疫苗（免疫方式和时机）应由猪群本身的感染状况、猪群感染的优势毒株、疫苗本身特点以及场内的饲养管理、生物安全水平来确定。
　　评估猪群PRRSV的感染状态、了解其感染的优势毒株是控制PRRS的前提和基础。未免疫的猪群可以根据猪只PRRSV抗体血清效价来判断本身所处的PRRSV感染状态，一般可分为阴性猪场、稳定不活动场、稳定活动场、不稳定场[11]；而对于免疫猪群则可以通过分析各生产阶段的抗体S/P值及其离散度变化，并结合场内PRRSV抗原的检测来评估PRRSV是否活跃及其活跃时间。
　　本试验的猪场为湖北省某大白猪原种猪场，通过前期对疑似发病猪组织样的检测分析，发现本地区存在变异HP-PRRSV（高致病性PRRSV）的感染和流行，因此在防控PRRS上选择采用高致病性减毒活疫苗免疫技术和药物预防相结合的综合防控方案。为较好评估本场PRRS疫苗免疫效果和病毒的感染状态（猪只血清抗体消涨规律），通过疫苗初步免疫试验及对2015年各类猪群的血清样本的检测分析研究，旨在为本场和本地区有效综合控制PRRS提供临床和实践依据。
　　1 材料与方法
　　1.1 材料
　　1.1.1 猪只血清样品 采集试验猪场2015年各饲养阶段仔猪、育肥猪、7～8月龄选留配种前后备种猪、全部基础母猪的血清样本（前腔静脉采血，EDTA-Na2抗凝）。
　　1.1.2 免疫疫苗 本试验猪场所免疫用疫苗为广东某公司生产的高致病性猪繁殖与呼吸综合征弱毒疫苗（JXA1-R株）。
　　1.1.3 猪繁殖与呼吸综合征抗体检测试剂盒
　　猪繁殖与呼吸综合征抗体检测试剂盒为IDEXX公司产品（IDEXX-PRRS X3）。
　　1.2 方法
　　1.2.1 猪繁殖与呼吸综合征活疫苗的免疫试验 为初步确定高致病性猪繁殖与呼吸综合征弱毒疫苗（JXA1-R株）疫苗免疫效果，选取20头哺乳期健康仔猪（不同4窝，每窝5头）在35日龄时免疫疫苗，免疫剂量为1头份/头。分别在免疫前1 d和免疫后1个月采血检测其抗体水平。
　　1.2.2 猪群疫苗免疫程序 根据试验场内实际生产情况，制定PRRS疫苗免疫程序如下：母猪产后14 d和配种前后备猪免疫一次疫苗，免疫剂量为1头份/头；仔猪、育肥猪、公猪均不免疫。
　　1.2.3 猪只PRRS抗体水平的检测及结果判定 按照IDEXX-PRRS X3抗体检测试剂盒说明书进行ELISA（酶联免疫吸附试验）抗体水平检测，结果判定：S/P值≥0.4判定为抗体阳性；S/P值<0.4判定为抗体阴性。
　　1.2.4 数据分析 分别计算PRRS抗体阳性S/P值平均数和CV值（离散度），CV=（标准偏差/样本平均值）×100%。
　　2 结果与分析
　　2.1 猪繁殖与呼吸综合征活疫苗（JXA1-R株）的免疫试验结果
　　PRRS活疫苗（JXA1-R株）免疫前后的抗体水平见表2。由表2可知，试验的20头仔猪在35日龄时的PRRS抗体阳性率为10%，免疫疫苗后4周即65日龄时的抗体阳性率为85%，且抗体离散度低，初步表明该疫苗可稳定提高猪只的抗体水平，疫苗免疫效果良好。
　　2.2 哺乳至育肥阶段猪只PRRS抗体水平检测结果
　　2015年2～4月分批次采集、检测了20～30日龄哺乳期仔猪血样96份，60日龄育肥前期猪只血清39份，120日龄育肥中期猪只血清25份，检测结果见表3。结果表明仔猪猪繁殖与呼吸综合征抗体水平与母源抗体直接相关，从20～60日龄抗体监测结果看，PRRS抗体值呈现梯度下降，且抗体阳性S/P值均小于2.0，未有大于2.5的个体值（PRRS野毒感染抗体），表明所检测的生长阶段猪只未发生PRRSV的垂直感染（或者母猪本身不带毒）。而在70～120日龄阶段时抗体值升高，且在120日龄时检测的抗体阳性S/P均值大于2.0，其中大于2.5的个体值占40%（10/25），表明该试验场育肥前期猪群存在PRRSV感染的风险，由于HP-PRRS弱毒疫苗（JXA1-R株）免疫后14 d可产生中和抗体[12]，因此推断需要针对断奶后猪只PRRS弱毒疫苗的免疫，从而减轻野毒感染后造成的生产损失。
　　2.3 全部基础母猪群、后备猪群PRRS抗体水平的检测结果
　　2015年2～4月分批次共采集、检测了全部基础母猪（妊娠前期、妊娠中后期、哺乳―空怀期）的血清样本量分别为47份、138份、80份；免疫PRRS弱毒活疫苗4周后的后备猪血样共65份，检测结果见表4。结果表明，该试验场全部基础母猪群PRRS抗体阳性率为87%（231/265），其中免疫疫苗后抗体S/P值>2.5（PRRS野毒感染抗体）的个体共24头，比例为9.1%，而阳性抗体值过高的个体中18头为1～3胎母猪，表明青年母猪较成年母猪易感染PRRS野毒；后备猪群体免疫PRRS弱毒疫苗后抗体阳性率为92%，其抗体值未出现异常个体（S/P>2.5的），表明后备猪群体弱毒疫苗免疫稳定、驯化措施有效。 　　3 小结与讨论
　　PRRS弱毒疫苗由于诱导免疫反应的时间较长兼具体液免疫和细胞免疫，具有较强的免疫优势而备受关注。疫苗毒与田间野毒基因序列的同源性大小、弱毒疫苗的安全性和稳定性（减毒是否彻底）、疫苗免疫后的抗体产生时间及持续时间、免疫方式和时机等是影响PRRS活疫苗免疫效果的主要因素，另外猪群整体的健康水平及是否存在其它免疫抑制性疾病等也会有不同程度的影响。相关临床研究表明，以JXAI-R株等为代表的第4亚群PRRS活疫苗相较经典毒株能较快诱导猪体的免疫应答――疫苗株产生的中和抗体时间和效价明显强于经典疫苗株，且猪群带毒现象（疫苗产生的病毒血症）随着时间的推移自然消除时间快，疫苗的安全性较高[12，13]。本研究通过对35日龄仔猪的活疫苗免疫试验，结果其在免疫后4周抗体阳性率达85%，抗体值在2.0≥S/P≥0.4，且CV值（离散度）低，表明该疫苗免疫效果良好。
　　正如前文所述，了解猪群的感染状态是合理控制PRRS的前提和基础。笔者通过对哺乳――育肥阶段的未免疫猪只、全部基础母猪和配种前后备猪的免疫群体中PRRS抗体的检测分析，表明该试验猪场为PRRSV感染阳性稳定场，但临床上育肥前期（70～120日龄）猪只仍存在较大的野毒感染风险，这与缺乏母源抗体保护和自身未免疫疫苗有关；母猪群和后备猪群体PRRS活疫苗总体上免疫稳定（抗体值主要在2.5≥S/P≥0.4，且离散度低于60%为免疫稳定群）[14]，其中部分母猪可能在妊娠期接触野毒而呈现抗体值的升高，这或与PRRS疫苗免疫抗体的衰减及疫苗毒对野毒的保护效率有关。
　　目前PRRS主要以持续性感染、亚临床感染、免疫抑制和继发细菌感染为流行特点，给临床防控带来困难。疫苗免疫作为防控PRRS的技术措施之一，不能完全清除病毒，养殖场需要统计分析各饲养周期猪群生产成绩（如母猪窝平产活仔数、育成率、育肥猪呼吸道疾病的发病率等）和抗体监测结果来综合评判疫苗的免疫效果，同时也应加强生物防范措施和饲养管理来防控该病。另外，为深入了解该病的致病机制和免疫机理，加强地区PRRSV分子流行病学调查、监测病原变异趋势的研究也是必要的。
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