茂名地区汉族人群MTHFRC677T基因多态性研究
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[摘要] 目的 探讨茂名地区汉族人群亚甲基四氢叶酸还原酶（MTHFR）C677T位点的基因多态性。方法 采用PCR-熒光探针法 ，分析方便选取2018年2—8月间2 803例茂名地区来茂名市人民医院就诊汉族人群的外周血样本亚甲基四氢叶酸还原酶（MTHFR）C677T基因型，并与其他6地区汉族人群的数据比较。结果 茂名地区人群中亚甲基四氢叶酸还原酶（MTHFR）677T等位基因频率（22.21%）与琼海汉族（22.11%）比较差异无统计学意义（P>0.05）。而与惠州汉族（29.53%）、湘潭汉族（34.98%）、湖北汉族（34.64%）、廊坊汉族（58.29%）、延边汉族（55.06%）地区的人群等位基因频率的差异有统计学意义（P<0.05）。结论 汉族人群亚甲基四氢叶酸还原酶（MTHFR）C677T基因多态性分布具有地区差异，由南向北亚甲基四氢叶酸还原酶（MTHFR）677T等位基因的频率逐渐增高。
[关键词] 亚甲基四氢叶酸还原酶;基因多态性;基因频率
[Abstract] Objective To investigate the gene polymorphism of methylenetetrahydrofolate reductase （MTHFR） C677T locus in Han population in Maoming area. Methods The PCR-fluorescent probe method was used to analyze the methylenetetrahydrofolate reductase （MTHFR） C677T gene in peripheral blood samples of 2 803 Han people who came to Maoming People's Hospital from Maoming District between February and August 2018. And compared with the data of the Han population in the other 6 regions. Results The frequency of methylenetetrahydrofolate reductase （MTHFR） 677T allele in population of Maoming area was not statistically significant （P>0.05）. Compared with Qionghai Han population （22.11%）， there were statistically significant differences in allele frequencies（22.21%） between the populations of the Hans in Huizhou （29.53%）， Xiangtans （34.98%）， Hubeis （34.64%）， Hans in Langfang （58.29%）， and Hans in Yanbian （55.06%） （P<0.05）. Conclusion The distribution of （MTHFR） C677T gene polymorphism in the Han population has regional differences， and the frequency of the MTHFR 677T allele has gradually increased from south to north.
[Key words] Methylenetetrahydrofolate reductase; Gene polymorphism; Gene frequency
基因的多态性在生物群体中十分常见，基因的多态性可产生具有不同功能的蛋白，这就导致了机体对某种疾病的易感性或者对某些药物的反应出现差异[1]。研究某个基因的多态性产生的功能差异有重要的医学意义，这可有助于人们预防疾病及指导临床用药[2]。该研究方便选取2018年2—8月间就诊于茂名市人民医院产检孕妇及体检人员进行了茂名地区汉族人群的MTHFRC677T基因型多态性研究，旨在探讨该地区汉族人群MTHFR C677T基因多态性的分布情况及分子遗传学特征，为个体化的孕期增补叶酸及叶酸个体化治疗高Hcy心血管疾病提供依据，报道如下。
1 资料与方法
1.1 一般资料
方便选取就诊于茂名市人民医院产检孕妇及体检人员2 803例，男：女=1 415：1 388，年龄18～45岁，平均年龄为35.4岁，纳入标准为汉族且无基础疾病;该次试验过程上报该院伦理委员会批准进行，试验开始前将试验内容告知患者及其家属并签署知情同意书。
1.2 仪器与试剂
试剂：全血基因组提取试剂盒（西安天隆科技有限公司）; MTHFR C677T基因检测试剂盒（深圳奥萨医药有限公司）;
仪器：提取仪（西安天隆科技有限公司）; 扩增仪（宏石荧光定量扩增仪slan-96P）;
1.3 方法
1.3.1 样本采集及DNA制备 采集病例1 mLEDTA抗凝静脉血，-80℃可长期保存，样本禁止反复冻融。全血标本、阴性质控和阳性同时使用西安天隆科技有限公司核酸提取试剂进行提取，具体操作严格按照说明书执行。样本DNA在2～8℃可以贮存1周或-2 0℃贮存1个月，反复冻存不超过3次。
1.3.2 PCR扩增 取DNA 样本4 μL、PCR扩增混合液10 μL，双蒸水0.75 μL、探针0.25 μL、加入PCR反应管中混匀盖好，将上述 PCR 反应管放入荧光定量 PCR 仪中扩增，选择等位基因模块，荧光信号的收集定为 FAM 和 VIC，数据的采集定在 60℃程序设置 ，阴性质控和阳性同时进行。见表1。 1.3.3 结果判读 由仪器对结果进行自动判读，具体操作按照产品说明书严格执行。
1.4 統计方法
应用SPSS 13.0统计学软件分析数据，Hardy-Weiberg平衡定律计算各基因型个体数的期望值，组间基因型频率及等位基因频率用（%）表示，采用χ2检验，P<0.05为差异有统计学意义。
2 结果
统计结果显示茂名地区汉族人群中MTHFR 677CC、677CT和677TT基因型比率分别为60.19%、35.21%和4.60%，其中MTHFR 677C和677T等位基因在该人群中的分布频率分别为77.79%和22.21%，见表2。
与其他6地区数据分析比较显示， 茂名地区汉族人群中MTHFR 677T等位基因频率为22.21%，与琼海汉族（22.11%）比较差异无统计学意义（P>0.05）。而与惠州汉族（29.53%）、湘潭汉族（34.98%）、湖北汉族[（34.64%）、廊坊汉族（58.29%）、延边汉族（55.06%）地区的人群等位基因频率的差异有统计学意义（P<0.05）。见表2。
3 讨论
叶酸对细胞的分裂生长及核酸、氨基酸、蛋白质的合成起着重要的作用[3]。 MTHFR C677T基因型不同，机体对叶酸的代谢能力不同[4]。因此研究了解该地区汉族人群的MTHFR C677T基因型是十分必要的，结果显示该位点等位基因频率存在地区差异性，与相关研究结果一致[5-7]：该研究中， 茂名地区汉族人群MTHFR基因C677T的等位基因频率为22.21%。这与肖雁等[8]的研究结果是一致的，其研究结果显示，汉族MTHFR 677T等位基因频率为22.8%。茂名地区汉族人群中MTHFR C677T基因型分布与其他6个地区数据比较分析结果显示，该地区汉族的MTHFR C677T基因型分布与琼海汉族差异无统计学意义（P>0.05），而与惠州汉族、湘潭汉族、湖北汉族、廊坊汉族、延边汉族]地区的汉族人群等位基因频率的差异有统计学意义（P<0.05），说明汉族人群中MTHFR C677T基因型分布及等位基因频率存在地域差异。该研究结果显示MTHFR C677T基因型地区分布呈渐变趋势，即由南向北677T等位基因的频率越来越高。同时，多个项目的研究表明;叶酸的代谢水平不同会导致机体血清Hcy水平出现差异，继而引起各类心脑系统疾病，对于心血管科的个体化用药，未发现叶酸能力有风险者无需服用叶酸，叶酸利用能力有风险，高同型半胱氨酸血症患者需最低补充叶酸650 ug/d，待服用2周后可将半胱氨酸水平降至最低，此外MTHFR的多态性能够对叶酸的代谢产生影响进而导致高同型半胱氨酸的出现，近年来许多研究都表明：高同型半胱氨酸与主动脉夹层、脑中风、心肌梗死等心脑血管疾病的发生密切相关，其中高同型半胱氨酸能够通过DNMT1使Cyclin A的低甲基化进而抑制内皮干细胞的增殖而对血管的修复功能造成损坏，该情况能够解释高同型半胱氨酸与心脑血管疾病的发病率之间存在的联系。临床中许多疾病也有一些地域性的差异，不同地区的气候、微量元素以及饮食习惯等因素都会导致某一族群对某种疾病出现不同的易感性，例如大部分鼻咽癌患者都是出现在中国，鼻咽癌的发生与某些基因的多态性显著相关。因此猜测亚甲基四氢叶酸还原酶（MTHFR） 的多态性在中国出现南北地域的差异与这些地方的气候、微量元素以及饮食习惯等因素密切相关，进一步说明这些基因的多态性与这些因素的关系在疾病的一级预防中显得十分重要，遗憾的是明确的证据仍需要临床中进一步的流行病研究证实。但是通过检测人群中的MTHFRC677T的多态性可能发现心血管疾病、恶性肿瘤的高危人群，从而指导临床对这些患者的随访及早期干预，这对降低这类疾病所带来的社会负面影响是非常可观的。
4 结论
该研究显示茂名地区汉族人群MTHFR 677C基因分布频率（77.79%）显著高于MTHFR677T基因分布频率（22.21%），不同于其他地区的MTHFR C677T基因多态性分布特征。综上所述，通过遗传检测与叶酸代谢能力相关的基因位点多态性。筛选出有叶酸代谢障碍的高危人群，进行个体化的补充叶酸以有利于进一步降低茂名地区新生儿出生的缺陷率。个体化利用叶酸调节心脑疾病患者的血清的Hcy含量。通过对茂名地区汉族人群进行遗传筛查，针对存在叶酸代谢障碍遗传风险的人群个体化用药、为茂名地区孕妇个体化补充叶酸提供证据及作为心脑血管患者服用叶酸的依据。
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（收稿日期：2020-02-17）
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