胎儿生长受限孕妇血浆\胎盘\羊水中妊娠特异性β1糖蛋白(SP1)与胎盘功能的研究

来源:用户上传      作者: 张涛 陈东东 梁欣

　　【摘要】目的:探讨胎儿生长受限孕妇血、胎盘、羊水中SP1与与胎盘功能的相关性。方法:对胎儿生长受限组与正常对照组孕妇血、分娩后胎盘以及羊水采取固相夹心法酶联免疫吸附实验（ELISA）检测其SP1含量。 结果:胎儿生长受限组与正常妊娠组比较SP1含量明显降低（P <0.05）。 结论:动态观察血清SP1含量变化可作为胎儿生长受限孕妇监测胎盘功能以及胎儿宫内安危的重要指标之一。
　　【关键词】胎儿生长受限；SP1；胎盘功能
　　【中图分类号】R714.5【文献标识码】A【文章编号】1008-6455（2011）04-0527-02
　　【Abstract】Objective:Research on relationship between SP1 in blood, placenta, as well as amniotic fluid and placental function in the situation of fetal growth restriction.Methods:implement ELISA on blood, After delivery of the placenta placenta, amniotic fluid of pregnant patients in both fetal growth restriction group and normal treatment group to measure their level of SP1. Results:the level of SP1 in fetal growth restriction group is obviously lower than that in the normal treatment group（P<0.05）. Conclusion:Observations of the change of SP1 content in blood serum, can be used to be one of the significant index to inspecting placenta function and safety status of fetals under fetal growth restriction.
　　【Key words】The embryo grows is limited; SP1; Placenta function
　　胎儿生长受限（fetal growth restriction,FGR）是指胎儿受各种不利因素影响，未能达到其潜在所应有的生长速度。表现为足月胎儿出生体重<2500g；或胎儿体重低于同孕龄平均体重的两个标准差；或低于同孕龄正常体重的第10百分数[1]。FGR围生儿患病率和死亡率均高于正常体重儿。这是一个普遍的重大公共卫生问题，不但危及新生儿的健康，对成年后的生活亦带来有害的后果，对远期体格和智能发育也有一定影响[2]，已经证实FGR新生儿成年后易发高血压、糖尿病及神经紊乱等疾病[3]。早期诊断及早干预FGR成为当今产科领域的研究热点之一。
　　1 材料与方法
　　1.1 临床资料:2008年1～12月共87例在牡丹江医学院红旗医院产科进行产前检查并住院分娩的孕产妇为研究对象。被选入者月经规律（28～35天）且末次月经史明确，无内外科合并症，均为单胎妊娠，孕34～42周。分为2组：正常妊娠的孕妇50例为对照组；确诊FGR的孕妇37例。对照组与FGR组平均孕周分别为38.9±4.5周和38.1±4.2周,平均年龄分别为27.70±3.56岁和28.78±3.87岁。诊断及分组标准按《妇产科学》第7版[1]。
　　1.2 年龄、孕次、产次、孕周:对孕妇年龄、孕次、产次进行的秩和检验校正H值（即Hc） 和卡方值分别是1.3021、2.9904、3.5149，各组年龄、孕次、产次差异无统计学意义（P> 0.05）。对孕周进行的秩和检验显示FGR组与正常妊娠对照组相比差异有统计学意义外（P<0.01）。但因本研究所纳入研究对象均为34～42周之间的晚孕病例，此期间不同孕周的激素水平无明显差异，对研究结果无影响[4]。
　　1.3 方法
　　1.3.1 样本收集:①抽取孕妇产前空腹肘静脉血2mL，置于混有枸橼酸钠的试管，放置20～30分钟。②分娩后取胎盘组织1×1cm，无菌生理盐水冲洗干净，加入适量生理盐水，用组织匀浆机进行匀浆。③取羊水2ml。以上样本均以1000×g离心10分钟，取上清液置于-50℃ 冰箱保存，整批测定。
　　1.3.2 步骤:采用Elisa法检测正常对照组与胎儿生长受限组孕妇血、分娩后胎盘以及羊水的SP1含量：①测试前，在室温下解冻并确保样品（血浆、胎盘组织匀浆液、羊水）均匀地充分解冻。②使用前，将试剂盒内所有试剂充分混匀。不要使液体产生大量的泡沫。③根据待测样品数量加上标准品的数量决定所需的板条数。标本用标本稀释液1:1稀释后加入50ul于反应孔内。④加入稀释好后的标准品50ul于反应孔、加入待测样品50ul于反应孔内。立即加入50ul的生物素标记的抗体。盖上膜板，轻轻振荡混匀，37℃温育1小时。⑤甩去孔内液体，每孔加满洗涤液，振荡30秒，甩去洗涤液，用吸水纸拍干。重复此操作3次。如果用洗板机洗涤，洗涤次数增加一次。⑥每孔加入80ul的亲和链酶素-HRP，轻轻振荡混匀，37℃温育30分钟。⑦甩去孔内液体，每孔加满洗涤液，振荡30秒，甩去洗涤液，用吸水纸拍干。重复此操作3次。如果用洗板机洗涤，洗涤次数增加一次。⑧每孔加入底物A、B各50ul，轻轻振荡混匀，37℃温育10分钟。避免光照。⑨取出酶标板，迅速加入50ul终止液，加入终止液后应立即测定结果。于波长570nm的酶标仪上读取各孔的OD值。
　　1.4 统计学处理:实验计量资料均以均数±标准差（x±s）表示，采用SPSS 18.0 软件进行实验数据统计分析, 各期组间数据比较采用单因素方差分析。P＜0.05表示差异有统计学意义, P＜0.01表示差异有高度统计学意义。
　　2 结果
　　正常妊娠随着孕周增加，血浆中SP1数值逐渐升高，妊娠34周达高峰，维持至分娩，产后很快消失。SP1值下降提示胎盘功能不良。本实验对照组与FGR组比较，产前血浆中SP1含量变化差异有统计学意义（P<0.05）；对照组与FGR组比较，分娩后胎盘组织匀浆中SP1含量变化差异有高度统计学意义（P<0.01）；羊水中SP1含量变化差异无统计学意义（P>0.05）。
　　表1 正常晚孕与胎儿生长受限孕妇血浆、胎盘、羊水中SP1含量的检测
　　数据表达形式x±s；* P <0.05,与对照组比较，**P <0.01，与对照组比较
　　3 讨论
　　随着社会的发展，胎儿优生学日益受到重视，人们寻求能早期发现胎儿生长受限的指标并期望能采取针对性的干预措施。FGR病因复杂，包括孕妇、胎儿、胎盘与脐带等因素。胎盘组织常被作为评估母体与胎儿健康状况的生物标本[5],它的形态结构发生病理改变会严重影响胎盘物质交换、激素分泌等正常功能的发挥,最终可能会导致FGR的发生,甚至流产[6]。本实验探讨的是临床确诊胎儿生长受限孕妇的血浆、胎盘、羊水中SP1与胎盘功能的关系。近年来, 由于实验方法的进步, 从母血和胎盘提取分离出许多命名不同的妊娠特异性蛋白。迄今为止, 在临床上能作为胎盘功能检测指标的仍是妊娠特异性β1 糖蛋白。SP1主要由胎盘合体滋养细胞产生，是胎盘功能检测指标之一。Wiley等[7]研究表明,在97.4%早孕6-8周的妇女中和100%孕晚期妇女中可检出SP1，而不存在于正常非孕妇女和男性血中。孕卵植入后SP1即进入母体循环, 并逐渐上升,妊娠34周达高峰，维持至分娩，产后很快消失。正常妊娠的脐带血、羊水、乳汁中也能检测到SP1[8]。SP1其分必量比hPL大20～30倍，与胎儿体重、胎盘重量呈正相关性，是胎盘功能检查的良好指标。测定母血中SP1可直接了解胎盘功能, 间接了解胎儿的宫内生长发育状况。Regnault等[9]认为胎盘的结构和功能异常是FGR发病的重要原因。 Salafia[10]研究认为累积的胎盘损伤导致FGR，病理基础可概括为因子宫胎盘功能不足使胎儿供氧及血流灌注减少。Israfilbe？li等[11]报道，血SP1数值减低，提示胎盘合成这种蛋白的功能低下，并可反映胎儿生长不良和子宫内不良环境。

　　本实验提示，胎儿生长受限可表现在孕妇外周血SP1数值减低，差异有统计学意义（P<0.05）；可表现在孕妇胎盘SP1含量减低，差异有高度统计学意义（P<0.01）；而羊水中SP1含量无明显降低，差异无统计学意义（P>0.05），提示胎盘功能不良对羊水SP1影响不大。妊娠早期的羊水,主要是母体血清经胎膜进入羊膜腔的透析液，而妊振中期以后胎儿尿液成为羊水的重要来源。且羊水中SP1值远低于血清中SP1值 ，故羊水SP1的ELISA检测灵敏度低于血浆的灵敏度。因此羊水中SP1检测无统计学意义考虑与此有关，可考虑更改更为敏感的检测方法，或者增大样本量。
　　综上所述，尽管羊水、胎盘组织中SP1含量更加稳定，但产前抽取羊水、提取胎盘组织对母儿具有一定的创伤性，可导致流产、早产等风险增加而不易被接受，故抽血检测血浆中SP1含量目前仍然作为产前检查必不可少的项目之一，可预测胎盘功能不良，从而及早干预，避免FGR带来的不良后果。
　　参考文献
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